摘要: 干细胞因子(stem cell factor,SCF)结合受体酪氨酸激酶c-Kit后,可传导多条信号通路。它们介导细胞增殖、存活、分化、迁移、黏附和化学趋向等一系列生物过程。巨大数目的突变动物模型及其相关研究表明SCF/c-Kit对黑色素细胞生成、造血作用、配子发生、... 展开 干细胞因子(stem cell factor,SCF)结合受体酪氨酸激酶c-Kit后,可传导多条信号通路。它们介导细胞增殖、存活、分化、迁移、黏附和化学趋向等一系列生物过程。巨大数目的突变动物模型及其相关研究表明SCF/c-Kit对黑色素细胞生成、造血作用、配子发生、以及肥大细胞和caial细胞的发育是至关重要的。虽然一百年前就建立了第一个c-kit突变小鼠品系。如今关于c-Kit分子和生理功能的报道仍在快速增长。 在本论文中,通过Enu化学诱变,我们得到并鉴定了两个新的原癌基因c-kit点突变小鼠:1)Wads小鼠,在c-Kit激酶区发生F8565突变;2)Wps小鼠,在胞外第一个免疫球蛋白样功能域(D1)发生D60N突变。大体上讲,Wads小鼠表现为色素沉积缺陷、巨细胞性贫血症、生殖细胞及肥大细胞缺失。而Wps小鼠的表型则包括除眼睛耳朵外全身白毛、生殖力下降、骨髓增生性疾病(MPN)及肥大细胞减少。 Wps小鼠的MPN表型提示c-Kit蛋白D1功能域具有独特功能。生化分析表明D60N突变并不影响SCF的结合,而是阻断c-Kit蛋白的完全糖基化。Wps突变削弱SCF诱导的受体自磷酸化和下游Akt和ERK激活。但却增加JAK2的结合和激活。同时,我们证明在c-Kit信号通路,IL-3/GM-CSF/IL-5受体家族的beta共受体可能促进JAK2和c-Kit的结合从而导致MPN症状。 另外,我们发现c-kit突变小鼠具有未预料的肥胖表型,身体脂肪含量增高、血浆Leptin、甘油三酯、自由脂肪酸等升高。同时,wps/Wps小鼠对葡萄糖不耐受及胰岛素不敏感。并对高脂饲料诱导的肥胖更加敏感。进一步分析表明肥胖是由于能量消耗降低:运动减少、寒冷诱导的产热降低。通过二维电泳和质谱分析,我们发现大多数鉴定的蛋白都定位于线粒体。符合预测的,Wps/Wps小鼠棕色脂肪(BAT)线粒体呼吸和线粒体DNA舍量均降低。 该两个新的c-kit突变品系Wads和Wps,为我们解读c-Kit的体外和在体多重功能提供了理想动物模型。现在。我们正在建立c-kit突变、线粒体功能缺陷及最终肥胖表型间的因果联系。 收起