摘要: 本研究从已构建的草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝肾cDNA文库中筛选到1个克隆,经测序和特征分析确定为草鱼胶原凝集素基因(GQ141696)。草鱼胶原凝集素全长cDNA为1128 bp,其中5’非编码区229 bp,3’非翻译区104 bp,最大开放阅读框为795 bp,编码1个264 a... 展开 本研究从已构建的草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝肾cDNA文库中筛选到1个克隆,经测序和特征分析确定为草鱼胶原凝集素基因(GQ141696)。草鱼胶原凝集素全长cDNA为1128 bp,其中5’非编码区229 bp,3’非翻译区104 bp,最大开放阅读框为795 bp,编码1个264 aa组成的蛋白质。系统进化分析表明草鱼胶原凝集素与斑马鱼的亲缘关系最近。根据草鱼胶原凝集素序列特征,克隆了包含糖基识别域(CRD)的cDNA,并进行原核表达、纯化获得其重组蛋白PCRD。进行PcRD与6种细菌的凝集和糖抑制实验,结果表明半乳糖、葡萄糖、甘露糖和麦芽糖4种糖都会使PCRD与嗜水气单胞菌的凝集明显下降甚至极大地干扰凝集。麦芽糖使金黄色葡萄球菌的凝集明显下降,而肽聚糖和甘露糖会使凝集受到抑制。此外,PcRD的凝集反应不依赖Ca2+。 转铁蛋白(transferrin,Tf)是一种非血红素结合铁的β-球蛋白,其N-端和C-端的2个同源结构域由一个短铰链区链接,草鱼转铁蛋白每个结构域含有4个铁离子结合位点,分别结合4个Fe3+。转铁蛋白功能广泛,不仅参与机体铁离子的运输和代谢,还在细胞呼吸、细胞生长和增殖中起重要作用,而且它具有抗菌杀菌功能,与机体的先天性免疫有关。为了解鱼类转铁蛋白与铁离子结合的分子机理以及N-端和C-端的2个同源结构域的功能,本文根据实验室前期克隆的草鱼转铁蛋白基因(EU790874)全长cDNA序列特征,分别克隆了包含这2个结构域的cDNA,并进行原核表达、纯化获得其重组蛋白PTfl、PTf2。进行重组蛋白结合铁离子能力检测。结果表明,重组蛋白能够结合铁离子,从而引起重组蛋白的吸收峰改变。体外结合铁离子实验实验表明,这2个结构域结合铁离子的能力有差异,PTf2与铁离子的结合更强。 收起