摘要: 目前研究认为脊尾白虾（Exopalaemoncarinicauda）免疫主要是依靠先天性免疫，而凝集素在先天性免疫中发挥着重要作用。本研究克隆得到了一种新型的脊尾白虾C-型凝集素基因的cDNA全长，甘露糖结合凝集素（MBL）基因的cDNA全长，并对凝集素基因进行了不... 展开 目前研究认为脊尾白虾（Exopalaemoncarinicauda）免疫主要是依靠先天性免疫，而凝集素在先天性免疫中发挥着重要作用。本研究克隆得到了一种新型的脊尾白虾C-型凝集素基因的cDNA全长，甘露糖结合凝集素（MBL）基因的cDNA全长，并对凝集素基因进行了不同情况下的表达特征分析，以期为脊尾白虾免疫提供理论基础，具体研究结果如下： 1、脊尾白虾C-型凝集素基因的克隆及其抗病生物学功能研究 本研究以转录组序列中获得的C-型凝集素基因部分序列为基础，采用RACE技术克隆获得了脊尾白虾C-型凝集素基因cDNA全长序列。脊尾白虾C-型凝集素基因全长为1273bp，其中开放阅读框735bp，5’非编码区为11bp，3’非编码区为527bp，共编码244个氨基酸，预测蛋白质的分子质量为27.7kDa，理论等电点为5.49。同源性分析显示，脊尾白虾C-型凝集素基因与日本囊对虾相似性最高。荧光定量PCR显示，C-型凝集素基因在肝胰腺的表达量最高，其次是心脏和卵巢。鳗弧菌（Vibrioanguillarum）感染后，脊尾白虾C-型凝集素在肝胰腺中的表达量呈上升趋势，在48小时达到峰值，随后呈下降趋势；进一步采用RNA干扰技术沉默该基因后，发现感染鳗弧菌的脊尾白虾个体累积死亡率显著增加。同时发现，与对照组相比，所有干扰组的个体患病症状外观上明显加重。本研究表明，C-型凝集素在脊尾白虾抗鳗弧菌感染中发挥了重要作用。 2、脊尾白虾C-型凝集素基因在镉胁迫中的生物学功能分析 为了研究重金属镉（Cd2+）胁迫下脊尾白虾C-型凝集素（C-Lectin）在肝胰腺中表达量的变化特征，本研究利用重金属镉对脊尾白虾进行96h急性毒性实验。实验共设置了5组Cd2+浓度胁迫（0、0.01、0.0175、0.021和0.0278mmol/L），分别在Cd2+胁迫后0h，3h，6h，12h，24h，48h，72h和96h共8个时间点取样。实时荧光定量结果显示：高浓度Cd2+（0.0175、0.021和0.0278mmol/L）胁迫下，脊尾白虾C-Lectin基因的表达量在48h达到峰值，并与对照组存在显著性差异（Plt;0.01）；镉离子为0.01mmol/L时，脊尾白虾C-Lectin基因的表达量在3h，6h，12h，24h，48h和72h时均显著低于对照组。进一步采用RNA干扰技术沉默该基因后，发现Cd2+胁迫后的脊尾白虾个体累积死亡率显著增加。本研究表明，脊尾白虾C-型凝集素在应答Cd2+胁迫过程中可对机体起到一定的保护作用。 3、脊尾白虾甘露糖结合凝集素基因的克隆及其抗病生物学功能研究 本研究以转录组序列中获得的甘露糖结合凝集素（MBL）基因部分序列为基础，采用RACE技术克隆获得了脊尾白虾MBL基因cDNA全长序列。脊尾白虾MBL基因全长为1342bp，其中开放阅读框972bp，5’非编码区为39bp，3’非编码区为331bp，共编码323个氨基酸，预测蛋白质的分子质量为36.51kDa，理论等电点为6.18。同源性分析显示，脊尾白虾MBL基因与罗氏沼虾相似性最高。荧光定量PCR显示，MBL基因在肝胰腺中的表达量最高，在其他组织中几乎不表达。鳗弧菌感染后，脊尾白虾MB在肝胰腺表达量呈上升趋势，在24小时达到峰值，随后呈下降趋势；进一步采用RNA干扰技术沉默该基因后，发现感染鳗弧菌的脊尾白虾个体累积死亡率显著增加。同时发现，与对照组相比，所有干扰组的个体患病症状外观上明显加重。本研究表明，MBL在脊尾白虾抗鳗弧菌感染中发挥了重要作用。 4、脊尾白虾甘露糖结合凝集素（MBL）基因在镉胁迫中的生物学功能分析 为了研究了重金属镉（Cd2+）胁迫下脊尾白虾甘露糖结合凝集素（MBL）在肝胰腺中表达量的变化特征，利用重金属镉（Cd2+）对脊尾白虾进行96h急性毒性实验。实验共设置了5组Cd2+浓度胁迫（0、0.01、0.0175、0.021和0.0278mmol/L），分别在Cd2+胁迫后0h，3h，6h，12h，24h，48h，72h和96h共8个时间点取样。实时荧光定量结果显示：高浓度Cd2+（0.0175、0.021和0.0278mmol/L）胁迫下，脊尾白虾MBL基因的表达量先呈上升趋势，在72h达到峰值后随后下降，但各时间点表达量均与对照组存在显著性差异（Plt;0.01）；镉离子为0.01mmol/L时，脊尾白虾MBL基因的表达量整体呈下降趋势。进一步采用RNA干扰技术沉默该基因后，发现Cd2+胁迫后的脊尾白虾个体累积死亡率显著增加。本研究表明，脊尾白虾MBL在应答Cd2+胁迫过程中可对机体起到一定的保护作用。 收起