摘要: 本研究对已构建的经PolyI:C诱导的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝肾cDNA文库进行初步筛选、保存，并从中克隆出草鱼转铁蛋白和趋化因子基因全长cDNA序列。 转铁蛋白(Transferrin，Tf)功能广泛，不仅参与机体内铁离子的运输和代谢，还在细胞呼吸、... 展开 本研究对已构建的经PolyI:C诱导的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝肾cDNA文库进行初步筛选、保存，并从中克隆出草鱼转铁蛋白和趋化因子基因全长cDNA序列。 转铁蛋白(Transferrin，Tf)功能广泛，不仅参与机体内铁离子的运输和代谢，还在细胞呼吸、细胞生长和增殖中起重要作用，而且它具有抗菌杀菌的功能，与机体的先天性免疫有关。草鱼转铁蛋白基因(CtTf)全长cDNA5’非编码区包含31bp，最大开放阅读框为2025bp，编码674个氨基酸，3’非编码区为266bp。CtTf编码的蛋白质N-端有1个由15个氨基酸残基组成的信号肽，第24-334和第338-665个氨基酸为2个保守的结构域，二者同源率为31%。与其它物种的转铁蛋白类似，草鱼转铁蛋白每个结构域包含4个铁离子结合位点，它们在两个结构域中的位置相对保守，除此之外，还存在多个完全保守的氨基酸残基。草鱼转铁蛋白与其它鲤科鱼类的同源性为65%-73%，与海洋鱼类同源性为43%-50%，与两栖、爬行、鸟类、哺乳类的同源性为40%-42%。系统进化树也显示草鱼转铁蛋白基因与斑马鱼和鲤鱼的亲缘关系最近。在正常草鱼肝、肠、肾、脾、心、肌肉、鳃和脑8种组织中，草鱼转铁蛋白基因在肝中的表达量最高，其次为脾和肠，在鳃和脑中有痕量表达。经PolyI:C诱导后，肝、脾、鳃中的表达水平明显升高，其中脾脏中的表达量超过肝脏，肠和脑中几乎无变化。 趋化因子(Chemokine)是细胞因子中的一个大家族，是先天性免疫系统的重要组成部分。草鱼CCL4基因全长854bp，ORF位于104-397bp，编码97个氨基酸。其中，32-73aa为其保守的CC趋化因子超家族结构域，N-端有1个由24个氨基酸组成的信号肽。草鱼CCLA与斑马鱼的同源性为69%。此外，与其他鱼类(斑点叉尾鮰Ictaluruspunctatus、大西洋鲑Salmosalar、虹鳟Oncorhynchusmykiss等)和哺乳类的同源性在50%以下。系统进化分析也显示其与斑马鱼CCL4基因的亲缘关系最近。适应性进化分析的结果表明：38D、43V、47A的氨基酸位点受到正选择作用。正常组织中，CCL4基因在草鱼脾脏表达量最高，心、肌、鳃、肝中次之，肠和肾中有少量表达，在脑中有痕量表达。经PolyI:C感染后，在肝脏、脾、肠、肾、鳃中CCL4的表达水平有不同程度的增加，而心、肌、脑无显著变化。 收起