摘要: 利用RNA干扰（RNAi）技术，将携带表皮生长因子受体（EGFR）同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株A549细胞，观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化。 方法： 根据RNA干扰原理，体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰... 展开 利用RNA干扰（RNAi）技术，将携带表皮生长因子受体（EGFR）同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株A549细胞，观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化。 方法： 根据RNA干扰原理，体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰片段，即h-EGFR，以pGensil-1为载体，构建重组质粒pGensil-1-EGFR（简称ds-EGFR），以Lipofectamine2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞，经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞，将所挑选出的单克隆细胞大量培养后与A549细胞对照组和转染空白质粒的阴性对照组进行比较，并加入不同浓度顺铂（40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml），采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞活力，绘制生长曲线，并计算细胞抑制率，流式细胞仪（FCM）分析细胞周期及细胞凋亡的变化，观察RNAi对A549细胞抑制作用及是否与顺铂有协同作用. 结果： 1.MTT检测结果显示，从第二天起ds-EGFR组生长缓慢，48h、72h、96h的吸光度分别为0.741±0.010、0.860±0.054、0.999±0.192，与对照组、阴性对照组相比，有统计学差异（P<0.05）；ds-EGFR联合不同浓度（40ug/ml、10ug/ml、2.5ug/ml）的顺铂与等浓度顺铂相比，作用24h后，其抑制率分别提高了7.8%、30.70%、34.42%，提示ds-EGFR联合顺铂或单独顺铂对A549细胞均有抑制作用，且随着顺铂浓度的增加和时间的延长抑制作用增强。 2.细胞周期分析显示，ds-EGFR组G0/G1细胞百分比较对照组增加了13.84%，较阴性对照组增加了14.65%，进入S期的细胞百分比较对照组减少了19.10%，较阴性对照组减少了18.68%；40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml顺铂处理细胞24h后，与对照组相比，凋亡率明显增高（P<0.05），其凋亡率分别为34.40±1.21，16.30±1.19，7.22±1.25，ds-EGFR联合不同浓度顺铂（40ug/ml、10ug/l、2.5ug/ml）作用A549细胞24h后其凋亡率分别为37.12±1.99，17.93±1.13，10.42±1.45。ds-EGFR联合顺铂与等浓度顺铂凋亡率比较有统计学差异（P<0.05）。 结论： ds-EGFR可有效抑制A549细胞生长，使细胞阻滞在G0-G1期，并能提高细胞对顺铂的敏感性，且随着顺铂浓度的增加，其抑制率增强，提示靶向EGFR的RNA干扰技术可作为NSCLC基因治疗的一种手段，且与顺铂联用两者具有协同效应。 收起