摘要: 第一部分,采用RNA干扰技术抑制哺乳动物细胞绿色荧光蛋白的表达.目的:该研究旨在探讨阳离子脂质体的体外转染效率、化学合成双链RNA(dsRNA)诱导RNA干扰(RNAi)的效应强度及其作用特点,为采用RNAi技术开展基因治疗提供实验依据.结论:(1)体外化学合成的d... 展开 第一部分,采用RNA干扰技术抑制哺乳动物细胞绿色荧光蛋白的表达.目的:该研究旨在探讨阳离子脂质体的体外转染效率、化学合成双链RNA(dsRNA)诱导RNA干扰(RNAi)的效应强度及其作用特点,为采用RNAi技术开展基因治疗提供实验依据.结论:(1)体外化学合成的dsRNA可有效诱导哺乳动物细胞出现序列特异性基因沉默效应.(2)三种不同的阳离子脂质体中Lipofectamine 2000的转染效率最强,且细胞毒性轻微.(3)dsRNA/Lipofectamine 2000诱导的RNAi效应具有剂量及时间双重依赖性.第二部分,RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体的表达.目的:探讨采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)技术是否能有效抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549、SPC-A1细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达,以及抑制EGFR基因表达后NSCLC细胞生物学特性的改变,以期为肿瘤治疗提供新的思路和实验依据.结论:(1)NSCLC细胞株存在EGFR高表达.(2)dsRNA-EGFR可序列特异性下调NSCLC细胞EGFR基因水平,显著降低EGFR蛋白表达.(3)dsRNA-EGFR通过抑制EGFR表达可显著抑制细胞增生和细胞迁移,降低配体EGF的含量,将更多的细胞阻滞在G<,0>-G<,1>期,增加细胞对顺铂的敏感性,有效逆转NSCLC细胞的恶性表型,从而为NSCLC基因治疗提供了新策略.第三部分,RNA干扰技术抑制NSCLC细胞EGFR表达的在体实验研究.目的:探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染NSCLC细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.结论:(1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染NSCLC细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对EGFR基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨. 收起