摘要: 磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解及继之发生的假体无菌性松动，是导致假体失效的最重要原因。由于涉及这一病理过程的因素错综复杂，人们很难找到单一通路作为治疗靶点。随着对破骨细胞分化调节机制认识的深入，钙调磷酸酶(CN)/活化T细胞核因子(NFAT)途... 展开 磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解及继之发生的假体无菌性松动，是导致假体失效的最重要原因。由于涉及这一病理过程的因素错综复杂，人们很难找到单一通路作为治疗靶点。随着对破骨细胞分化调节机制认识的深入，钙调磷酸酶(CN)/活化T细胞核因子(NFAT)途经在骨系统中的重要作用日益受到重视。然而，CN/NFAT途经和11R-VIVIT肽(新型细胞可渗透、特异性NFAT抑制剂)在以破骨细胞分化增强和炎性反应为主要特点的磨损颗粒诱导假体周围骨溶解中的确切作用尚不清楚。 目的：1.观察磨损颗粒对破骨细胞前体细胞活力、炎性细胞因子表达的影响。2.分析磨损颗粒对破骨细胞分化及其骨吸收功能的影响。3.研究CN/NFAT途经在磨损颗粒诱导破骨细胞分化及炎性细胞因子表达中的作用。4.探讨11R-VIVIT肽特异性阻断CN/NFAT途经对磨损颗粒诱导骨溶解的影响。 方法：1.吖啶橙染色观察破骨细胞前体细胞对钛(Ti)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒的吞噬反应；MTT、ELISA法检测Ti、PMMA颗粒刺激下破骨细胞前体细胞活力及炎性细胞因子的表达。2.M-CSF依赖性前体细胞诱导法诱导破骨细胞分化；TRAP染色、扫描电镜及RT-PCR法观察Ti、PMMA颗粒刺激下破骨细胞分化、骨吸收陷窝形成情况及破骨细胞特异性基因mRNA的表达。3.免疫荧光、RT-PCR法分析Ti、PMMA颗粒诱导破骨细胞分化过程中NFATcl蛋白表达、核转位及其mRNA表达情况；MTT、免疫荧光、RT-PCR法分析11R-VIVIT肽对破骨细胞前体细胞活力及Ti、PMMA颗粒诱导NFATcl表达的影响。4.TRAP染色、扫描电镜、RT-PCR及ELISA法观察11R-VIVIT肽对Ti、PMMA颗粒诱导破骨细胞分化、骨吸收功能、破骨细胞特异性基因mRNA及炎性细胞因子表达的影响。 结果：1.Ti和PMMA颗粒均可引起细胞吞噬反应；随时间延长，吞噬颗粒细胞比例增加(p＜0.01)；但两者均不影响破骨细胞前体细胞活力；Ti和PMMA颗粒均显著刺激TNF-α、IL-1β和IL-6表达(p＜0.01)；PMMA.颗粒刺激TNF-α表达更显著(p＜0.01)。2.Ti和PMMA颗粒均显著促进破骨细胞分化(p＜0.01)、骨吸收功能(p＜0.01)及破骨细胞特异性基因mRNA表达。3。随着Ti、PMMA颗粒诱导破骨细胞分化过程进展，NFATcl蛋白表达逐渐增加并随之出现核转位过程；NFATcl蛋白表达及其核转位过程的阶段性变化与磨损颗粒诱导破骨细胞分化进程密切相关；Ti、PMMA颗粒亦均刺激NFATclmRNA表达；而11R-VIVIT肽阻断CN/NFAT途径显著抑制Ti、PMMA颗粒诱导的NFATcl表达，且不影响细胞活力。4.11R-VIVIT肽显著抑制Ti、PMMA颗粒诱导的破骨细胞分化(p＜0.01)、骨吸收功能(p＜0.01)、破骨细胞特异性基因mRNA及TNF-α(p＜0.01；p＜0.05)、IL-1β(p＜0.05)和IL-6(p＜0.01.p＜0.05)的表达。 结论：1.Ti和PMMA颗粒均可引起细胞吞噬反应并促进炎性细胞因子表达；PMMA颗粒刺激INF-α表达更显著；但两者均不影响细胞活力。2.Ti和PMMA颗粒均显著促进破骨细胞分化及其骨吸收功能。 3.CN/NFAT途径在调节磨损颗粒诱导破骨细胞分化及炎性细胞因子表达方面发挥重要作用。4.11R-VIVIT肽阻断CN/NFAT途径显著抑制Ti和PMMA颗粒诱导的破骨细胞形成及炎性反应。 收起