摘要: 目的：通过研究烟草悬凝物(CSC)对人支气管上皮细胞(BEP-2D)急性毒性及慢性遗传性毒性损伤的相关机制，探讨香烟烟气在人支气管上皮细胞损伤过程中的生物学作用，以期为新的肺癌诊断方法和防治措施提供理论依据。 方法： 1.收集某品牌香烟烟气并... 展开 目的：通过研究烟草悬凝物(CSC)对人支气管上皮细胞(BEP-2D)急性毒性及慢性遗传性毒性损伤的相关机制，探讨香烟烟气在人支气管上皮细胞损伤过程中的生物学作用，以期为新的肺癌诊断方法和防治措施提供理论依据。 方法： 1.收集某品牌香烟烟气并溶解于LHC-8培养液制备成CSC。 2.CSC对BEP-2D细胞的急性毒性损伤：用四唑盐(MTT)比色实验检测细胞存活率，检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)相对活性以评估细胞膜损伤，细胞凋亡率检测，利用凋亡细胞具6-硫代鸟嘌呤(6-TG)抗性检测细胞HPRT基因突变。 3.CSC对BEP-2D细胞的慢性遗传性毒性损伤：取对照组(未染毒BEP-2D细胞)及实验组(CSC染毒的BEP-2D细胞)作为研究对象，采用半定量反转录PCR(RT-PCR)检测各组细胞中survivin基因，同时用免疫组化法检测各组中survivin蛋白的表达。 结果： 1.在急性毒性损伤过程中，随着CSC浓度的逐渐增加：①细胞存活率逐步下降；②细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)逐渐且明显增多；③CSC作用2h后，细胞的早期和晚期凋亡率均增大，与染毒剂量具有明显剂量-效应关系；④HPRT基因突变逐渐增大。 2.在慢性遗传性损伤过程中：survivin mRNA在对照组细胞中的表达强度仅为0.08，在实验组细胞P15、P25和P38中分别为0.56、0.80和0.81；survivin蛋白在对照组细胞中表达阴性，在实验组不同代细胞中均表达阳性，两组间表达具有显著性差异(P＜0.05)。 结论： 1.CSC作为一种复杂的香烟烟气混合物具有较为典型的急性细胞毒性和遗传毒性。 2.survivin基因及蛋白在CSC诱导BEP-2D细胞恶性转化过程中各代均有较高表达，可作为肺癌诊断的一个辅助分子生物学指标。 收起