摘要: 目的: ①研究光敏剂ZnPcH1在正常骨髓单个核细胞(MNC)、急性单核细胞白血病细胞系SHI-1细胞内的代谢情况。 ②探讨酞菁锌介导的光动力疗法(ZnPcH1-PDT)对SHI-1细胞的增殖抑制作用及其机制。 方法: ①应用荧光光谱分析法检测正常骨髓MNC、... 展开 目的: ①研究光敏剂ZnPcH1在正常骨髓单个核细胞(MNC)、急性单核细胞白血病细胞系SHI-1细胞内的代谢情况。 ②探讨酞菁锌介导的光动力疗法(ZnPcH1-PDT)对SHI-1细胞的增殖抑制作用及其机制。 方法: ①应用荧光光谱分析法检测正常骨髓MNC、SHI-1细胞内的ZnPcH1含量，了解正常骨髓MNC、SHI-1细胞ZnPcH1含量的变化差异。 ②应用MTT比色法、台盼兰拒染法、白血病细胞集落培养观察ZnPcH1-PDT对SHI-1细胞的生长抑制作用，设立三个对照组(空白对照组、光照对照组、PS对照组)。 ③通过AO/EB复合染色、TUNEL、DNA二倍体分析、Annexin-V/FITC/PI双染流式细胞检测等手段来分析ZnPcH1-PDT作用后SHI-1细胞的凋亡情况。 ④应用激光扫描共聚焦显微镜和特异的细胞器探针对光敏剂ZnPcH1进行亚细胞定位。 结果: ①正常骨髓MNC与SHI-1细胞内ZnPcH1浓度变化存在差异：在与ZnPcH1共孵育5h时，SHI-1细胞系与正常MNC细胞内的ZnPcH1含量比值达到最高值。因此，可据此来优化实验条件，ZnPcH1-PDT处理细胞时选用与ZnPcH1孵育5h后再行光照。 ②ZnPcH1-PDT对SHI-1细胞有显著的杀伤作用：不同浓度的ZnPcH1-PDT组对SHI-1细胞均有杀伤作用，与对照组相比均有显著性差别(p<0.01)，并呈ZnPcH1剂量相关。随着ZnPcH1浓度的增加，CFU-SHI-1形成率显著下降；1.0μm ZnPcH1-PDT可完全抑制SHI-1细胞集落形成；而三个对照组间无显著性差别(p>0.05)。 ③ZnPcH1-PDT可诱导SHI-1细胞发生细胞凋亡，且48h内细胞凋亡阳性率呈时间依赖性：AO/EB复合染色结果可见处理组的SHI-1细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片，呈现凋亡表象。TUNEL检测可见明显的棕色核凋亡细胞；FCM检测Annexin-V/FITC/PI显示，细胞凋亡阳性率随着时间的延长而逐渐增高；细胞周期分析显示各处理组均可见亚二倍体Gl峰(凋亡峰)。 ④利用荧光探针的细胞器特异性分布确定ZnPcH1在细胞器中的位置，通过直接观察法、伪彩色融合法、相关系数法表明ZnPcH1定位于SHI-1细胞中的线粒体、内质网、溶酶体中。　　 结论: ①正常骨髓MNC与SHI-1细胞内znPcH1浓度的动态变化存在差异，即孵育5h时SHI-1细胞与正常MNC内的ZnPcH1含量比值达到最高值。 ②ZnPcH1-PDT可抑制SHI-1细胞系增殖并诱导其凋亡。 ③ZnPcH1-PDT导致亚细胞水平多位点损伤。 收起