摘要: 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，该病严重威胁患者的视力和生命。传统的治疗方法或存在应用的局限性，或存在远期毒副作用。随着肿瘤分子生物学的发展，基因治疗作为一种新的治疗策略，已越来越受到人们的重视。其... 展开 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，该病严重威胁患者的视力和生命。传统的治疗方法或存在应用的局限性，或存在远期毒副作用。随着肿瘤分子生物学的发展，基因治疗作为一种新的治疗策略，已越来越受到人们的重视。其中，自杀基因治疗恶性肿瘤是国内外研究的热点。本实验尝试构建肿瘤特异性双自杀基因载体pc-DNA3.1-CMV-hTERT-CDTK(pc-ChCDTK)，在此基础上研究其对人视网膜母细胞瘤Y79细胞在体内外的杀伤作用。 目的：构建肿瘤特异性双自杀基因载体pc-ChCDTK。 方法：利用PCR扩增CMV增强子、hTERT启动子、yCD及TKgly 4种元件，并构建过渡载体T-CMV、T-hTERT、T-yCD、T-TKgly，连至pc-DNA3.1(-)质粒载体上构建成双自杀基因载体pc-DNA3.1-CMV-hTERT-CDTK(pc-ChCDTK)；对各个元件、过渡载体及最终载体进行琼脂糖凝胶电泳、酶切和测序鉴定。 结果：实验所构建的最终载体的酶切产物琼脂糖凝胶电泳所得片段大小分别为6773bp和288bp，与预期片段一致；测序证实最终载体与pc-ChCDTK序列一致。 结论：成功构建了含有hTERT启动子的肿瘤特异性双自杀基因载体pc-ChCDTK。 收起