摘要: 目的探讨高糖状态下血管内皮细胞人血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)基因表达的改变，以及调控HO-1基因的表达对血管内皮细胞功能的影响。方法 (1)在体外原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。(2)分别在... 展开 目的探讨高糖状态下血管内皮细胞人血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)基因表达的改变，以及调控HO-1基因的表达对血管内皮细胞功能的影响。方法 (1)在体外原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。(2)分别在不同时间和用不同浓度的高糖刺激HUVECs，并设正常组和甘露醇对照组作为对照，提取细胞总RNA和总蛋白，RT-PCR及Westemblot检测HO-1的表达情况；同时利用台盼蓝染色检测各组细胞死亡情况。(3)分别在不同时间和用不同浓度的罗格列酮刺激高糖状态下(30mmol/L)的HUVECs，Real time-PCR及Western blot检测各实验组HO-1的表达情况；同时利用台盼蓝染色检测各组细胞死亡情况。(4)构建含HO-1基因重组质粒pCDNA3.1-HO-1，瞬时转染ECV304细胞株，RT-PCR及Western blot分别比较转染重组质粒pCDNA3.1-HO-1、空载质粒组及未转染组的HO-1表达情况。结果(1)在体外成功培养HUVECs，本实验中使用的细胞均为第3-5代细胞。(2)与正常组及甘露醇对照组相比，高糖组细胞呈时间和浓度依赖性抑制HO-1表达，差异具有显著性(P值均<0.05)。随着葡萄糖浓度增高，细胞死亡率明显增加。(3)与正常对照组相比，罗格列酮能呈时间和浓度依赖性提高高糖状态下，HUVECs的HO-1基因表达。罗格列酮刺激后，细胞死亡率明显下降。(4)成功构建及鉴定pCDNA3.1-HO-1质粒。结论高糖抑制了HUVECs HO-1的表达，使其死亡率增加；罗格列酮可以增加HUVECs在高糖状态下HO-1的表达并降低了其死亡率，可以提高对HUVECs的保护作用。 收起