摘要: 该论文主要完成杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因选择标记建立过程中NR基因的克隆、表达载体的构建、NR基因完整性的鉴定以及基因枪转化方法的研究,为进一步建立杜氏盐藻NR基因选择标记奠定基础.结论1.克隆得到完整的NR cDNA序列,全长3696bp,包含了全部编码序... 展开 该论文主要完成杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因选择标记建立过程中NR基因的克隆、表达载体的构建、NR基因完整性的鉴定以及基因枪转化方法的研究,为进一步建立杜氏盐藻NR基因选择标记奠定基础.结论1.克隆得到完整的NR cDNA序列,全长3696bp,包含了全部编码序列(2700bp),编码一个全长900个氨基酸的蛋白序列,该序列与其它微藻的NR具有较高同源性.2.该基因所推导的氨基酸序列有三个保守性较高的结构域,分别与亚硫酸氧化酶、细胞色素b5以及NADH:细胞色素b5还原酶有较高同源性,符合NR的结构域特征.3.在杜氏盐藻NR氨基酸序列中,具有两种以上同义密码子的氨基酸偏好使用以C/G为结尾的密码子.4.该研究构建杜氏盐藻真核表达载体,该载体可用于转化杜氏盐藻NR基因突变藻株进而建立盐藻NR基因选择标记.5.构建了杜氏盐藻NR基因原核表达载体,并在大肠杆菌中融合表达;37℃诱导时,融合蛋白以包涵体形式存在,降低诱导温度可以增加蛋白的可溶性;硝酸盐还原酶活力测定显示MBP-NR融合蛋白具有较高NR活力.6.基因枪法是一种适合盐藻细胞进行核转化的方法,盐藻细胞生长状态、轰击压力以及每个样本轰击的次数对转化效果有明显影响. 收起