中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 宋兴超中国农业科学院 2016年博士导师: 杨福合共156页

摘要 : 水貂（Neovison vison），是一种珍贵毛皮动物，其毛皮主要用于制裘，因此，被毛颜色是决定貂皮质量与价值的一种重要经济性状，深入解析水貂被毛色素沉积机理在新型毛色品种培育过程中具有重要的理论与实践意义。为了更好地明确水貂被毛颜色表型形成... 展开水貂（Neovison vison），是一种珍贵毛皮动物，其毛皮主要用于制裘，因此，被毛颜色是决定貂皮质量与价值的一种重要经济性状，深入解析水貂被毛色素沉积机理在新型毛色品种培育过程中具有重要的理论与实践意义。为了更好地明确水貂被毛颜色表型形成的遗传调控机制，本研究以具有显著毛色差异的金州黑水貂（黑色）、吉林白水貂（白色）、银蓝水貂（灰色）、咖啡水貂（棕褐色）和珍珠水貂（珍珠色）为研究对象，利用组织学、细胞学、分子生物学及高通量RNA-seq转录组测序技术，系统开展了水貂被毛黑色素含量差异分析、成熟黑色素细胞组织学定位检测、毛色关联基因克隆及其遗传变异位点筛查、毛色基因mRNA差异表达分析与基于高通量RNA-seq皮肤转录组挖掘色素沉积相关基因等六个相互关联的试验研究，主要研究内容及获得的研究结果如下： 1．通过测定换毛期和毛皮成熟期金州黑水貂、银蓝水貂和吉林白水貂被毛黑色素含量，比较3种不同被毛颜色水貂毛纤维中总黑色素（Total melanin，TM）、真黑色素（Eumelanin，EM）及褐黑色素（Pheomelanin，PM）含量的差异，同时分析不同时期被毛黑色素含量的变化。结果表明，换毛期和毛皮成熟期，黑色水貂被毛TM、EM和PM含量均最高，随着被毛颜色变浅，3种黑色素含量均呈降低趋势。单因素方差分析显示，黑色水貂中，毛皮成熟期被毛TM和PM含量分别是换毛期的1.17和1.20倍（P<0.01），EM含量显著高于换毛期（P<0.05）；白色水貂毛皮成熟期被毛TM和PM含量分别是换毛期的1.27和1.22倍（P<0.05），EM含量略高于换毛期，差异不显著（P>0.05）；银蓝水貂被毛TM、EM和 PM含量在毛皮成熟期和换毛期差异不显著（P>0.05）。PM含量决定了水貂灰色和白色被毛表型的发生，EM含量可能与黑色被毛表型存在关联，在水貂换毛过程中，存在于皮肤黑色素小体中的黑色素由毛囊定向转移到毛干。 2．利用甲苯胺蓝染色、多巴氧化酶法（dopa）及dopa-甲苯胺蓝联合染色三种方法，分析黑色、灰色和白色被毛水貂皮肤组织中成熟黑色素细胞的分布特性。甲苯胺蓝染色结果表明，3种毛色水貂皮肤、毛囊及其附属物结构特征比较明显，其中有核细胞的细胞核被染成蓝色，毛皮成熟期水貂表皮相对真皮较薄，毛根下端形成杵状毛（club hair），未见明显凹陷的毛乳头，推断水貂毛囊处于退行期（catagen）后期。dopa染色与dopa-甲苯胺蓝复染镜检结果均显示，黑色水貂表皮多巴阳性着色较灰色水貂深，且黑色素颗粒呈连续分布，灰色水貂表皮阳性着色区域颜色较浅，呈间断分布。多巴阳性呈“团状”大量聚集于黑色被毛水貂皮肤毛囊顶端，毛囊外根鞘和毛根的髓质中有少量着色带，沿毛干方向，颜色逐渐变淡；灰色被毛毛囊顶端多巴阳性着色带较少，呈“稀疏颗粒”分布，毛囊外根鞘阳性着色较黑色被毛弱。白色被毛水貂皮肤组织中未见明显多巴阳性着色区域。毛囊顶端的成熟黑色素细胞是水貂被毛色素沉积的主要细胞学基础，该部位成熟黑色素细胞数量及酪氨酸酶活性是决定其毛色差异的直接因素，表皮中的黑色素细胞可能并不参与水貂被毛色素沉积。 3．采用PCR、克隆测序技术获得水貂MC1R、TYR和Agouti基因核苷酸序列，通过比较基因组学方法对3个基因进行了鉴定及生物信息学分析。结果表明，美洲水貂 MC1R基因长度为1324 bp（GenBank登录号：KJ152766），编码序列长954 bp，编码317个氨基酸，MC1R蛋白多肽链存在1个低复杂度结构域和7个典型跨膜区，具有细胞膜受体典型结构。水貂 TYR基因（GenBank登录号：KJ716783）5个完整的外显子长度分别为：819 bp（外显子1）、217 bp（外显子2）、148 bp（外显子3）、182 bp（外显子4）和230 bp（外显子5），编码区全长1596 bp，编码531个氨基酸，由18个氨基酸的信号肽和513个氨基酸的成熟肽组成。水貂Agouti基因长度为4231 bp，包括部分内含子1（424 bp）、完整外显子2（160 bp）、外显子3（62 bp）、内含子2（1256 bp）和部分内含子3（2329 bp）。 4．采集金州黑水貂、银蓝水貂、吉林白水貂、咖啡水貂和珍珠色水貂共计430份血液，利用PCR产物直接测序技术对MC1R、TYR和Agouti基因编码区及非编码区开展SNPs检测，将不同基因突变位点形成的基因型与水貂毛色表型进行了关联分析。结果表明，水貂MC1R基因编码区不存在多态性，编码区上游存在缺失突变位点：g.132_135delAGTG，银蓝水貂在该位点的多态信息含量为0.3268，属中度多态，暗示该突变位点可能影响银蓝水貂的被毛颜色，或者与调控银蓝水貂灰色被毛表型的主效基因连锁。TYR基因外显子4和5不具有多态性，外显子1无义SNPs（g.138T>A）与吉林白水貂白色被毛表型极显著相关（P<0.0001）。Agouti基因内含子2中g.1189C>T位点的CT基因型与吉林白水貂白色被毛表型存在关联；内含子3上g.252C>T位点CT基因型与珍珠水貂的毛色存在关联，5个SNPs（g.290A>C、g.298G>C、g.340A>G、g.343T>C和g.379T>C）与2个缺失突变位点（g.472_473delCA和g.974_977delCTCT）在不同毛色水貂群体内分别处于紧密连锁状态且可能与水貂浅色被毛表型相关。 5．采用qRT-PCR技术分析了金州黑水貂、银蓝水貂和吉林白水貂毛皮成熟期背部皮肤组织MC1R、TYR和Agouti基因mRNA表达量。结果表明，毛皮成熟期，3个基因在3种毛色水貂皮肤中均有表达。在MC1R基因mRNA表达上，白色与黑色、灰色差异极显著（P<0.01），黑色与灰色差异不显著（P>0.05），相对表达量顺序为：白色>灰色>黑色。黑色、灰色被毛水貂TYR基因mRNA表达量分别是白色被毛水貂的3.2535和1.8933倍，黑色与灰色、白色被毛水貂差异极显著（P<0.01），相对表达量顺序为：黑色>灰色>白色。黑色、灰色被毛水貂Agouti基因mRNA表达量分别是白色被毛水貂的1.2515和0.9501倍，但三者间差异不显著（P>0.05），相对表达量顺序为：黑色>白色>灰色。 6．基于高通量RNA-seq技术测定了金州黑水貂、银蓝水貂和吉林白水貂皮肤组织转录组，利用qRT-PCR技术对可能影响水貂被毛色素沉积的关键基因进行了mRNA定量表达验证。结果表明，获得毛皮成熟期水貂皮肤转录组原始数据约33.19 G，403,725个Unigene成功注释到7个生物信息学数据库中。BLM_Svs WHM_S（黑色vs白色）、BLM_S vs SBM_S（黑色vs灰色）和WHM_S vs SBM_S（白色vs灰色）组合中分别存在12,557、4,334和10,643个差异表达基因，3个组合共有的差异表达基因为1,735个。3个组合中分别存在20、10和17个参与水貂被毛色素沉积的差异表达基因，KITLG、LEF1、DCT、TYRP1、PMEL、TYR、Myo5a、Rab27a和SLC7A11基因可能从黑色素细胞发育、黑素小体成分及其前体、黑素小体转运和真黑色素与褐黑色素合成转变开关这4个生物学过程调控水貂毛色表型。收起

关键词 : 水貂色素沉积毛色基因皮肤转录组高通量RNA-seq

2. 中国环颈雉屠宰和肉质性状相关候选基因研究

[学位论文] 吴琼中国农业科学院 2011年博士导师: 杨福合共140页

摘要 : 中国环颈雉具有独特的肉质特点,目前饲养量较大,因此,如何在保持中国环颈雉特有肉质风味的基础上,进一步提高中国环颈雉的生产性能,改善其肉质性状,成为中国环颈雉研究工作的重点。肌内脂肪(IMF)和肌苷酸(IMP)含量与肌肉嫩度、风味密切相关,是影响肉质... 展开中国环颈雉具有独特的肉质特点,目前饲养量较大,因此,如何在保持中国环颈雉特有肉质风味的基础上,进一步提高中国环颈雉的生产性能,改善其肉质性状,成为中国环颈雉研究工作的重点。肌内脂肪(IMF)和肌苷酸(IMP)含量与肌肉嫩度、风味密切相关,是影响肉质的主要指标,因此,将参与IMF和IMP含量代谢的基因都可以归纳为潜在的影响肉质性状的候选基因。本试验以A-FABP、H-FABP、LPL、ADSL和ATIC基因作为影响中国环颈雉肉质性状的候选基因,采用RT-PCR、PCR-SSCP和Real-time PCR方法,对其进行研究。试验所得结论如下: 1.中国环颈雉胸肌和腿肌IMF含量低于三黄鸡和AA白羽肉鸡。 2.中国环颈雉A-FABP、H-FABP、LPL、ADSL和ATIC基因的核苷酸序列和编码的氨基酸序列与禽类亲源关系较近。A-FABP和H-FABP具有Lipocalin家族结构域特征,LPL具有Esterase-lipase家族结构域特征,ADSL具有Lyase家族结构域特征,ATIC具有AICARFT家族结构域特征。 3.A-FABP基因检测到4个突变位点,对活体重、屠体重和胸肌IMF含量有显著影响(P<0.05)；H-FABP基因检测到4个突变位点,对胸肌IMF含量有显著影响(P<0.05)；LPL基因检测到3个突变位点,对活体重和屠体重有显著影响(P<0.05)；ADSL基因检测到1个突变位点,对屠宰性状均有显著影响(P<0.05)；ATIC基因检测到1个突变位点,对胸肌IMF含量有显著影响(P<0.05)。中国环颈雉群体两两位点合并,AAAA基因型个体胸肌IMF含量最高。 4.A—FABP基因存在16种单倍型,单倍型组合H9H11和H1H4有利于屠宰性状和IMF含量的增长；H-FABP基因存在14种单倍型,单倍型组合H3H6和H4H6有利于屠宰性状和IMF含量的增长；LPL基因存在7种单倍型,单倍型组合H1H5、H3H6、H1H1和H1H2有利于屠宰性状和IMF含量的增长。 5.A-FABP、LPL、ADSL和ATIC基因均在150d时表达量最大,H-FABP基因在60d时表达量最大。脂肪为A-FABP基因的优势表达组织,心脏为H-FABP基因的优势表达组织,胸肌为LPL基因和ADSL基因优势表达组织,肝脏为ATIC基因优势表达组织。 6.肝脏A-FABP基因相对表达量与胸肌IMF含量呈显著负相关；肝脏H-FABP基因相对表达量与腿肌IMF含量呈显著正相关,脂肪H-FABP基因相对表达量与腿肌IMF含量呈显著负相关；脂肪LPL基因相对表达量与腿肌IMF含量呈显著负相关；脂肪ADSL基因相对表达量与活体重呈显著负相关。收起

关键词 : 中国环颈雉候选基因肉质性状屠宰性状

3. 日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能及毛皮发育的影响

[学位论文] 张海华中国农业科学院 2011年博士导师: 杨福合共123页

摘要 : 本论文通过研究水貂日粮适宜可消化蛋白质和蛋氨酸水平,结合日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能、毛囊发育和水貂皮肤内参与水貂皮肤和毛囊生长相关基因的定量定位表达研究,分别从营养水平、组织形态学水平和分子水平对日粮蛋白质和蛋氨酸对水貂毛... 展开本论文通过研究水貂日粮适宜可消化蛋白质和蛋氨酸水平,结合日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能、毛囊发育和水貂皮肤内参与水貂皮肤和毛囊生长相关基因的定量定位表达研究,分别从营养水平、组织形态学水平和分子水平对日粮蛋白质和蛋氨酸对水貂毛皮性能影响机理进行了探索性研究,主要内容如下: 1.选取健康断奶公水貂128只,随机分成8组,每组16只幼貂,各组水貂初始体重差异不显著。前5组分别饲喂日粮粗蛋白质水平为36％、32％、28％、24％和20％的日粮,后三组在日粮蛋白质水平为28％的日粮中分别添加0.3％、0.6％和0.9％的DL-蛋氨酸,试验期60天。结果显示:当日粮蛋白质水平降低到28％时添加0.6％蛋氨酸日粮组水貂的试验末体重、日增重、饲料转化率及氮沉积均最佳,且显著的高于36％的高蛋白质日粮组。结论:育成期水貂可消化蛋白质水平为24.0％,日粮代谢能为20.73 MJ／kg,日粮蛋氨酸水平为1.39％,总含硫氨基酸水平为2.70％,水貂可获得最佳生产性能。 2.在水貂育成期试验基础上,每组留取14只健康公水貂,总计112只,各组水貂初始体重差异不显著。前五组分别饲喂日粮粗蛋白质水平为32％、28％、24％、20％和16％的日粮,后三组在日粮蛋白质水平为24％的日粮中分别添加0.4％、0.8％和1.2％的DL-蛋氨酸,试验期85天。结果显示:当日粮蛋白质水平降至24％补充0.8％的蛋氨酸时,水貂生产性能有提高的趋势,且能够使水貂试验末体重、氮沉积和干皮长均达到最大。结论:冬毛期水貂可消化蛋白质水平为19.7％,日粮代谢能为21.66MJ／kg,日粮中蛋氨酸水平为1.54％,总含硫氨基酸水平为2.82％,水貂可获得最佳生产性能。 3.分别从饲喂日粮蛋白质水平为32％、24％、16％和24％+0.8％蛋氨酸的处理组,每组采集4只水貂皮肤样品进行石蜡切片。结果显示:水貂毛囊多为三毛型,初级毛囊有规律的排列在毛囊群的一侧,冬毛期水貂次级毛囊与初级毛囊的平均比例(S／P)为20～22:1；水貂皮肤经Sacpic法染色后,将有活性的毛囊内根鞘染成红色；高蛋白质水平和适宜的蛋氨酸水平日粮组水貂针绒毛活性低。结论:Sacpic染色法适宜水貂皮肤的染色；针毛和绒毛毛囊的活性周期不同步；高蛋白质水平和适宜蛋氨酸水平日粮对水貂毛囊发育有正向调节作用；水貂打皮季节其毛囊正处于退行期。 4.分别从饲喂蛋白质水平为32％、24％、16％和24％+0.8％蛋氨酸的处理组,每组采集4只水貂皮肤样品,对水貂皮肤中IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和EGF mRNA进行相对定量研究。结果显示:随着日粮蛋白质水平的降低,各基因mRNA的表达量有显著的下降趋势,当低蛋白质日粮中添加蛋氨酸后,可以提高各基因mRNA的表达量；IGF-Ⅰ、IGE-ⅠR基因的表达量与水貂的针毛长度、绒毛长度、S／P等毛皮性能指标有显著的相关性,EGF和IGF-ⅠR的表达量有呈显著的正关性。结论:高蛋白质水平和适宜蛋氨酸水平日粮对水貂皮肤中IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和EGF基因的表达量有显著的提高作用；IGF-Ⅰ与IGF-ⅠR基因表达量与水貂毛皮性能指标存在显著的相关关系。 5.通过冰冻切片和免疫组织化学方法对水貂皮肤中的EGF、IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR基因的分布规律进行了研究。结果显示:处于打皮季节的水貂,皮肤中IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和EGF基因广泛分布在毛囊外根鞘细胞和皮肤表皮细胞的胞质中。结论:IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和EGF基因在水貂皮肤表皮和毛囊外根鞘细胞中广泛表达,直接参与调控皮肤和毛囊的发育,日粮蛋白质和蛋氨酸通过调控水貂皮肤内IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和EGF基因的表达水平,从而作为影响水貂毛皮品质的一个重要途径。收起

关键词 : 水貂基因表达生产性能免疫组织化学日粮蛋白质蛋氨酸毛皮品质

4. 赤狐和银黑狐毛色差异分析、色素基因克隆及TYRP1功能初步研究

[学位论文] 鲍加荣中国农业科学院 2015年博士导师: 杨福合共121页

摘要 : 赤狐和银黑狐是狐属毛皮动物，具有显著不同的毛色。银黑狐是赤狐在自然条件下的毛色突变狐，这种毛色变异的分子机理至今未明。毛色是影响狐皮价格的重要因素，是狐的重要经济性状，也是重要的育种目标。研究狐的毛色变异为培育新毛色品种狐提供了重... 展开赤狐和银黑狐是狐属毛皮动物，具有显著不同的毛色。银黑狐是赤狐在自然条件下的毛色突变狐，这种毛色变异的分子机理至今未明。毛色是影响狐皮价格的重要因素，是狐的重要经济性状，也是重要的育种目标。研究狐的毛色变异为培育新毛色品种狐提供了重要的理论基础和技术支持。挖掘毛色相关基因，研究毛色形成的信号通路，探索毛色变异的分子机理，推动毛皮动物的分子育种研究，加快新品种狐的培育。本试验选用赤狐和其毛色突变狐—银黑狐作为研究对象。开展的试验有：一是分析赤狐和银黑狐被毛中黑色素的组分和含量，同时从染色体核型的角度研究这两种狐的差异。二是采用RNA-seq对赤狐和银黑狐体侧部皮肤组织进行高通量测序，利用生物信息学手段分析挖掘这两种狐皮肤组织的差异表达基因，并通过生物信息学手段筛选与色素形成密切相关的差异表达基因和信号通路。三是利用Small RNA测序技术筛选赤狐和银黑狐体侧部皮肤组织的差异表达的miRNAs，对其靶基因进行预测和分析，并对靶基因进行通路富集。四是对候选色素基因MC1R、MITF和TYRP1进行分子克隆，获取其CDS序列，并构建系统进化树，还通过生物信息学数据库和软件预测其编码蛋白的结构和功能。五是建立分离和体外培养狐皮肤黑素细胞的技术程序。六是构建TYRP1-PiggyBac载体，过表达差异表达基因TYRP1，研究其在体外培养的黑素细胞中的功能，为后续研究毛色相关基因和miRNAs的功能提供技术支持。主要研究结论如下： 1.狐皮肤组织切片表明狐皮肤毛囊是复合毛囊，三毛囊群占大部分。狐被毛的色素含量分析表明银黑狐被毛的总黑色素含量极显著高于赤狐被毛的总黑色素含量（p<0.01）；银黑狐被毛的真黑色素含量极显著高于赤狐被毛的真黑色素含量（p<0.01）；银黑狐针毛、绒毛的真黑色素含量显著高于赤狐针绒毛的真黑色素含量（p<0.05）。银黑狐和赤狐其他类型毛的总黑色素、真黑色素和棕黑色素含量均无显著差异（p>0.05）。 2.赤狐和银黑狐的染色体无明显差异，染色体数均为2n=32+X,Y，有0-4个B型染色体，中央着丝粒染色体(M)有12对常染色体和X染色体，亚中央着丝粒染色体(SM)有4对常染色体和Y染色体。 3.经RNA-seq测序分析表明：与色素形成紧密相关的受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶U（PTPRU, protein tyrosine phosphatase, receptor-type,U）上调表达，酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）下调表达，暗示着PTPRU和TYRP1在赤狐和银黑狐毛色变异中有着重要作用。差异显著的信号通路有细胞外基质受体互作通路（ECM receptor interaction）和酪氨酸代谢通路(Tyrosine metabolism)。此外，PTPRU在膜内区域含有与 Cadherins高度保守同源结构域 juxtamembrane，暗示着PTPRU通过其Juxtamembrane域与β-catenin相互作用，传递细胞信号，从而参与调控狐的毛色变异。 4. Small RNA测序筛选出差异表达miRNAs共23个，其中上调表达16个，下调表达7个。上调表达的miR-125b和miR-145在赤狐和银黑狐毛色变异中有着重要的作用。筛选到与色素形成密切相关的靶基因富集信号通路共8条，分别为: TGF-beta signaling pathway、Endocytosis、Lysosome、Cysteine and methionine metabolism、Tyrosine metabolism、Phenylalanine, tyrosine and tryptophan biosynthesis、Phenylalanine metabolism、Glutathione metabolism。 5.银黑狐MC1R的CDS序列954bp，是7次跨膜蛋白，含有3个糖基化为点，3个磷酸化位点和1个G蛋白耦联受体信号位点，广泛磷酸化位点6个，T-157位是特异性磷酸化位点；银黑狐MITF的CDS序列1260bp，非膜结合蛋白，含有9个蛋白激酶磷酸化位点和1个亮氨酸拉链结构域，广泛磷酸化位点26个，T-38位是特异性磷酸化位点；银黑狐 TYRP1的 CDS序列1614bp，是2次跨膜蛋白，含有8个糖基化位点，17个蛋白激酶磷酸化位点，2个生长因子样结构域位点，2个Cu结合位点，广泛磷酸化位点27个，T-128位是特异性磷酸化位点。这三个色素基因均可用于物种亲缘关系分析。 6.建立了从狐皮肤组织分离黑素细胞，并进行原代培养、纯化培养、细胞冻存和复苏等技术优化，成功地培养了狐皮肤黑素细胞。 7.构建了TYRP1-PiggyBac过表达质粒载体，并成功转染了体外培养的黑素细胞，建立了在体外研究色素相关基因和miRNAs功能的技术平台。收起

关键词 : 赤狐银黑狐毛色差异色素基因黑素细胞

5. 蓝狐自咬症及遗传学基础研究

[学位论文] 任二军中国农业科学院 2011年博士导师: 杨福合共106页

摘要 : 蓝狐是世界上广泛饲养的珍贵毛皮动物,狐皮是制作高档裘皮服装和饰品的重要原料。自咬症的发生,严重影响了蓝狐的生长发育和毛皮质量,给蓝狐养殖业带来巨大的经济损失。本研究从行为学、环境因素、遗传因素等方面分析自咬症的发病机理,筛选自咬症蓝狐... 展开蓝狐是世界上广泛饲养的珍贵毛皮动物,狐皮是制作高档裘皮服装和饰品的重要原料。自咬症的发生,严重影响了蓝狐的生长发育和毛皮质量,给蓝狐养殖业带来巨大的经济损失。本研究从行为学、环境因素、遗传因素等方面分析自咬症的发病机理,筛选自咬症蓝狐RAPD分子标记,探讨DRD1、DRD2、5-HT1AR候选基因与自咬症的关联性。主要结果如下: 1.选用体重相近的健康蓝狐90只(公母各半),其中试验组60只,对照组30只,模拟蓝狐在饲养管理过程中不良环境,采用摇床、转移栋舍、限制、拥挤、饥饿、休息等6种不同的应激诱导方式并结合10种血液生化指标探讨蓝狐自咬症的发病原因。应激诱导30d,试验组血清中GPT、ALP、GSH-PX和CAT活性极显著低于对照组(P＜0.01),MDA含量显著低于对照组(P＜0.05),SOD活性极显著高于对照组(P＜0.01)；应激诱导60d,ALP、CK、GSH—PX、CAT和MDA活性极显著高于对照组(P＜0.01),SOD活性极显著低于对照组(P＜0.01),GPT活性显著低于对照组(P＜0.05)；GOT、LDH、GLU活性在整个应激诱导过程中没有显著差异(P＞0.05):应激诱导组与对照组蓝狐自咬症发病率没有显著差异(P＞0.05)。 2.选用4只健康蓝狐和4只自咬蓝狐相间放置,用监控摄像头进行行为学观察,在蓝狐的各类行为中,所占观测时间百分比由高到低依次为趴卧、走动、玩耍、采食、站立、梳理、抖毛；健康蓝狐的趴卧行为、玩耍行为明显高于自咬蓝狐；走动、抖毛和梳理行为明显低于自咬蓝狐。自咬蓝狐单次自咬持续时间在10秒钟以下的占70％以上,超过40秒的在5％以下；病情较重的自咬蓝狐自咬次数和持续时间都明显高于病情较轻的蓝狐。 3.选用自咬蓝狐15只,健康蓝狐10只,分为三组进行繁殖,探讨自咬症与遗传的关系,并对试验基地蓝狐自咬发生情况进行统计分析。试验基地蓝狐自咬发病时间主要集中在8～10月份,基地蓝狐群的发病率为2.28％,发病较高的栋舍达4.17％,环境应激诱导试验群发病率为5.56％。30天分窝,自咬蓝狐存活的2窝后代全部自咬,发病率为100％,最早出现自咬的时间为44日龄,2窝健康蓝狐后代发病率为16.67％,蓝狐自咬症的发生受遗传影响比受环境影响要大。 4.以DRD1、DRD2、5-HT1AR基因为候选基因,采用直接测序方法探讨基因多态性与自咬症的关联。克隆测序得到蓝狐DRD1、DRD2、5-HT1AR基因部分外显子序列长度分别为864bp、819bp和611bp。在DRD1、DRD2、5-HT1AR基因部分外显子序列共检测到8个突变位点,其中DRD1基因T206C位点处碱基突变导致的基因多态与蓝狐自咬症有极显著关联(P＜0.01)；DRD2基因T356C位点、DRD2基因T457c位点、5-HT1AR基因C351G位点处碱基突变导致的基因多态与蓝狐自咬症有显著关联(P＜0.05)；DRD1基因C314T位点、DRD1基因C668T位点、DRD2基因G115A位点、DRD2基因G400T位点处碱基突变导致的基因多态与蓝狐自咬症没有关联(P＞0.05)。 5.采用RAPD技术,研究与自咬症紧密连锁的遗传标记,从120条随机引物中,筛选出30条能产生清晰、稳定扩增产物且具多态性的随机引物,在自咬和健康蓝狐群中多态率为39.17％。其中6条随机引物在健康蓝狐和自咬蓝狐DNA池扩增出了差异条带,经个体验证,引物S472、S485在健康蓝狐和自咬蓝狐出现差异条带的个体数量差异达极显著水平(P＜0.01),可以用作蓝狐自咬症的分子标记。收起

关键词 : 蓝狐自咬症应激诱导基因多态性随机扩增多态性分子标记

6. 银黑狐和蓝狐杂交一代公狐不育机制的初步研究

[学位论文] 杨童奥中国农业科学院 2016年博士导师: 杨福合共105页

摘要 : 银黑狐和蓝狐杂交属于属间远缘杂交，杂交一代银霜狐（蓝狐♂×银黑狐♀，HBS）和蓝霜狐（银黑狐♂×蓝狐♀，HSB）公狐表现为完全或部分不育，不能产生精子。近年来，转录组学技术被应用于马和驴杂交、黄牛和牦牛远缘杂交雄性不育，筛选得到调控精子... 展开银黑狐和蓝狐杂交属于属间远缘杂交，杂交一代银霜狐（蓝狐♂×银黑狐♀，HBS）和蓝霜狐（银黑狐♂×蓝狐♀，HSB）公狐表现为完全或部分不育，不能产生精子。近年来，转录组学技术被应用于马和驴杂交、黄牛和牦牛远缘杂交雄性不育，筛选得到调控精子发生的关键基因。本研究利用准备配种期和配种期银黑狐、蓝狐和银霜狐、蓝霜狐公狐作为试验材料，通过比较分析正常可育的银黑狐、蓝狐，以及不育的杂交狐精液品质、血清激素水平和睾丸、附睾的组织形态学差异，寻找杂交狐雄性不育的可能原因。以准备配种期和配种期银黑狐、蓝狐、杂交狐的睾丸组织为研究对象，采用转录组测序技术，建立银黑狐、蓝狐、杂交狐的转录组数据库，针对4种狐狸2个不同发育时期、同一发育时期4种不同的狐狸之间进行差异基因分析，筛选杂交狐和银黑狐、蓝狐调控精子发生过程的差异表达基因，确定精子发生关键基因，揭示杂交狐雄性不育的生理学差异和分子调控机制。结果表明配种期银黑狐、蓝狐、银霜狐和蓝霜狐的单次射精量之间差异不显著（P>0.05）。银黑狐和蓝狐精液中存在大量精子，两种杂交狐银霜狐和蓝霜狐精液中没有精子存在，杂交狐精子发生过程停滞。银霜狐和蓝霜狐生精细胞由初级精母细胞阶段向次级精母细胞阶段发育的过程发生了障碍，精子发生过程停滞在次级精母细胞阶段。准备配种期银霜狐和蓝霜狐低浓度的睾酮和雌二醇，高浓度的FSH、LH和PRL引起睾丸和生精小管发育不完全。配种期银霜狐和蓝霜狐低浓度的睾酮，高浓度的LH和PRL引起睾丸和生精小管发育不完全，导致杂交狐生精过程障碍，进而导致不育。对4种狐狸准备配种期和配种期睾丸组织进行高通量测序及序列组装，共获得 Clean bases175.36G，1142703819条Transcripts，673146243条 Unigenes，建立了较为全面的狐狸睾丸转录组数据库，与NR、NT、SwissProt数据库注释比对，分别注释了76243、276899、56851条Unigenes。对转录组测序获得的差异基因进行分析，将4种狐狸同一个发育时期以及同一种狐狸准备配种期和配种期比较发现，筛选到调控精子发生的差异基因有151个。进一步分析发现，有26个基因主要在第一次减数分裂由初级精母细胞向次级精母细胞发育阶段发挥作用，这26个基因分别是ASPM，BAG6，BRDT，CCNA1，DDX4，GGN，GGNBP2，GMCL1，HSF2，HSF2BP， KHDRBS3，MAEL，MAK，MEIG1，MLH1，MNS1，NDRG3，PACRG，PAFAH1B1，PGAM2， RAD51C，SCMH1，SOX30，SUN5，TDRD9和 TEX15。还有两个基因对于精子发生很重要， KATNAL1基因于睾丸支持细胞特异表达，ACSBG2基因于睾丸间质细胞特异表达。对18个差异表达基因进行荧光定量PCR验证发现，差异基因荧光定量PCR表达趋势与转录组测序结果基本一致，说明转录组测序结果基本反映了杂交狐和银黑狐、蓝狐睾丸中基因真实的表达水平。综上所述，银黑狐和蓝狐杂交一代银霜狐和蓝霜狐精子发生过程停滞在初级精母细胞向次级精母细胞发育阶段，筛选得到的28个基因可以作为后续研究银黑狐和蓝狐杂交雄性不育机制的候选关键基因。而这28个基因在银霜狐和蓝霜狐精子发生过程中的具体功能和相互作用关系有待于进一步验证。本研究获得的研究结果对系统研究杂交狐雄性不育的分子机制奠定了基础。收起

关键词 : 银黑狐蓝狐杂交不育精液品质激素水平

7. 水貂胰蛋白酶消化模型的建立及外源酶对水貂消化和生产性能的影响

[学位论文] 刘伟中国农业科学院 2007年博士导师: 杨福合共97页

摘要 : 本文通过四个试验对水貂消化道参数与生产性能的研究,来建立水貂胰蛋白酶消化模型及确定外源酶对水貂消化和生产性能的影响,分为以下几个主要部分: 试验1：水貂胰蛋白酶作用模型的建立.试验采用66只水貂,采食后每隔30分钟测定300分钟内消化道内蛋... 展开本文通过四个试验对水貂消化道参数与生产性能的研究,来建立水貂胰蛋白酶消化模型及确定外源酶对水貂消化和生产性能的影响,分为以下几个主要部分: 试验1：水貂胰蛋白酶作用模型的建立.试验采用66只水貂,采食后每隔30分钟测定300分钟内消化道内蛋白酶活性与pH值,反映水貂采食后消化道内消化规律的变化.由试验结果可知,水貂采食后消化道前段pH值为酸性,随采食时间的延长,pH值呈现先升高后降低的变化,但一直保持酸性pH值;消化道后段pH值为碱性,采食后其pH值随时间变化规律与消化道前段则正相反,呈现先变低,后升高的趋势,但一直保持碱性pH值;pH值转变时间大约在采食后90～120分钟:水貂采食后消化道各部位蛋白酶活性逐渐升高,大约在采食后60～120分钟时间段内达到最高,以后逐渐降低,在降低的过程中存在活性升高的波峰出现:水貂消化道各部位蛋白酶活性以回肠部位最高. 试验2：外源酶对水貂生产性能及肠道主要消化参数的影响.试验采用3 × 3复因子试验设计,在水貂传统日粮中添加外源酶,通过生产性能指标、消化道各部位的胰蛋白酶活性与pH值来验证添加外源酶对水貂生产性能与对水貂消化的影响.试验结果表明,添加外源酶对水貂的总体生产性能未产生明显影响,但对公貂活体长产生了极显著的影响,中水平蛋白酶添加组比对照组公貂活体长提高了9.15%;对水貂母貂胃蛋白酶活性并无显著影响:对公貂间胃蛋白活性的影响达到极显著水平,添加脂肪酶组公貂胃蛋白活性最高:对水貂十二指肠胰蛋白活性、回肠胰蛋白活性、公貂空肠胰蛋白活性并无显著影响:对母貂间空肠胰蛋白活性影响达显著水平,添加低水平淀粉酶与蛋白酶组显著高于其他组;对水貂结肠胰蛋白活性影响达极显著水平,添加蛋白酶与脂肪酶的最高水平组显著高于添加淀粉酶的中低水平组;对水貂公貂直肠胰蛋白活性并无显著影响;对水貂母貂直肠胰蛋白活性影响达极显著水平;对水貂胃内pH值、母貂肠内各部位pH值并无显著影响;对水貂公貂肠内各部位pH值的影响均达极显著水平,添加脂肪酶组与对照组在肠道内以回肠为分界线,回肠以前较高,以后较低:添加淀粉酶组正相反.添加蛋白酶组则在小肠各部位pH值一直保持较低水平. 试验3：外源酶对水貂糖代谢的影响.本试验采用56只16周龄健康短毛黑水貂,采用2 × 3复因子试验设计,研究添加外源淀粉酶与蛋白酶对水貂糖代谢水平的影响.结果表明,在育成期与冬毛生长期水貂传统日粮类型条件下,添加试验用淀粉酶与蛋白酶,对各试验组水貂肝糖元含量、公貂血糖水平影响不显著;对各试验组水貂母貂血糖水平影响显著(P<0.05).添加高水平淀粉酶组效果最明显,其血糖水平高于对照组46.83%. 试验4：外源酶的添加与水貂日粮类型之间的关系.试验采用3×3复因子试验设计,在水貂特定日粮中添加外源酶,通过生产性能指标、营养物质消化率来验证适宜的试验日粮类型及在该日粮类型条件下适宜添加的外源酶类型.结果表明,在水貂冬毛生长期,在本试验日粮类型条件下,添加试验用酶对水貂活体长无显著影响;对各组水貂体重影响达极显著水平.植物性蛋白替代水平越高,水貂越冬体重损失越大;对饲料蛋白质消化率的影响达极显著水平,表现为植物性蛋白质替代水平越高,水貂对饲料中蛋白质的消化率越低,中性蛋白酶可极显著的提高水貂对饲料中蛋白质的消化率.其中添加中性蛋白酶的30%植物性蛋白替代试验组的饲料蛋白质消化率比不添加酶60%植物性蛋白替代试验组提高44.03%; 对水貂饲料脂肪消化率的影响达极显著水平,其中添加中性蛋白酶的30%植物性蛋白替代试验组的饲料脂肪消化率比不添加酶60%植物性蛋白替代试验组提高129.45%. 收起

关键词 : 水貂胰蛋白酶外源酶消化能力生产性能

8. 梅花鹿、水貂、蓝狐及貉-牛异种体细胞核移植技术研究

[学位论文] 王士勇中国农业科学院 2014年博士导师: 杨福合共91页

摘要 : 为了探索梅花鹿-牛异种体细胞核移植技术，为梅花鹿胚胎工程研究奠定技术基础，本论文对其供核细胞的培养和冷冻保存、受体卵母细胞的体外成熟、显微操作、重组胚胎外培养等技术环节进行了探索研究，并在水貂、蓝狐和貉等毛皮动物上验证了建立的异种体... 展开为了探索梅花鹿-牛异种体细胞核移植技术，为梅花鹿胚胎工程研究奠定技术基础，本论文对其供核细胞的培养和冷冻保存、受体卵母细胞的体外成熟、显微操作、重组胚胎外培养等技术环节进行了探索研究，并在水貂、蓝狐和貉等毛皮动物上验证了建立的异种体细胞核移植技术体系。主要内容如下：（1）梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞（Ear Skin Fibriblasts，ESF）经组织块法原代培养，利用酶消化时间差与贴壁时间差法处理3～5次纯化，结果显示细胞生长特点为贴壁生长、呈梭形、具伪足，F5 代细胞生长曲线呈“潜伏期-对数生长期-停滞期”的模式。DMSO作为抗冻保护剂时，梅花鹿、水貂、蓝狐和貉ESF解冻复苏后复苏率分别为89.64%、92.44、91.24和91.04，显著高于甘油作为抗冻保护剂。结论：梅花鹿、水貂、蓝狐和貉ESF具有典型的皮肤成纤维细胞生长特点，通过酶消化时间与贴壁时间差的方法对其纯化可行，冷冻保存时可采用10% DMSO作为抗冻保护剂。（2）牛卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus Oocyte Complexes，COCs）经22h体外成熟培养之后，LH+FSH和PMSG+HCG组成熟率分别为79.1%和75.2%，差异不显著，但是两组成熟率均显著高于对照组；牛COCs经（Brilliant Cresyl Blue, BCB）染色染色90 min后卵母细胞着色率为68.1%，显著高于30、60 min组，辨识难度为“中”；牛COCs经39μM的BCB染色后，着色率为64.5%，显著高于13μM组的29.3%；BCB+组和BCB-组的成熟率与对照组比较差异均不显著；在体外成熟培养液中添加50ng/mL表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）后培养牛的COCs，22h后成熟率为77.4%，显著高于0、10、20ng/mL组。结论：在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加国产激素10IU/mL PMSG、15IU/mL HCG和50 ng/mL的EGF能显著提高其体外成熟率；BCB法筛选优质卵母细胞在本试验体系下不适用。（3）牛COCs经体外成熟20、21、22h后，0.4μg/mL脱羰秋水仙碱（Demecolcine，DEME）诱导显核率分别为61.0%、65.3%和66.7%，差异不显著；经0.4μg/mL DEME处理60、120 min后，显核率分别为70.0%和71.9%，显著高于30min组；经0.5μg/mL DEME处理60 min之后，显核率为78.9%，显著高于0.3、0.4μg/mL组；DEME辅助法的去核率为100.0%，显著高于挤压法和盲吸法，三种去核方法的去核时间差异不显著；带下注核与全细胞胞质内注核的成功率分别为100%和94.8%，注核时间分别为31.0s和35.1s，与破膜后胞质内注核比较差异均显著；一步操作和两步操作的相同注核方法处理组之间在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异；0、0.25、0.50 和1.00μM白藜芦醇对梅花鹿-牛ISCNT胚胎卵裂率没有显著影响，0.50 和1.00μM组囊胚发育率分别为38.0%和36.7%，显著高于0、0.25μM组；梅花鹿-牛ISCNT胚胎用体细胞共培养时，水貂ESF组的卵裂率为55.7%，显著高于对照组，牛卵丘细胞组囊胚发育率为59.4%，显著高于对照组和其他两组。结论：梅花鹿-牛ISCNT研究可采用下面的技术程序：牛卵母细胞经IVM20～22h后，用0.5μg/mL DEME处理60 min诱导显核，Pizeo辅助破膜胞质内注核的一步显微操作核移植，激活后的重组胚用牛卵丘细胞共培养。（4）采用Pizeo辅助全细胞胞质内注核的方法构建毛皮动物-牛ISCNT胚胎时，水貂、蓝狐和貉ESF作为供核细胞，在注核成功率、卵裂率和囊胚率之间差异不显著；牛卵丘细胞作为共培养细胞时，水貂、蓝狐、貉-牛ISCNT胚胎的囊胚率分别为43.6%、40.1%和42.1%，均显著高于对照组。结论：梅花鹿-牛ISCNT技术程序同样适用于水貂、蓝狐和貉等三种毛皮动物与牛的ISCNT。收起

关键词 : 异种体细胞核移植冷冻保存重组胚显微操作

9. 重组IGFBP-4蛋白的表达、纯化、晶体生长及其对鹿茸细胞增殖抑制的研究

[学位论文] 王桂武中国农业科学院 2008年博士导师: 杨福合共90页

摘要 : 研究背景与目的：胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-likegrowthfactorbindingprotein-4，IGFBP-4)作为一个重要的细胞因子，具有多种重要的生理功能。它既是构成动物GH/IGF生长轴的一个重要成员，同时又是一个重要的抗癌蛋白，对绝大多数体外... 展开研究背景与目的：胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-likegrowthfactorbindingprotein-4，IGFBP-4)作为一个重要的细胞因子，具有多种重要的生理功能。它既是构成动物GH/IGF生长轴的一个重要成员，同时又是一个重要的抗癌蛋白，对绝大多数体外培养肿瘤细胞具有抑制生长和促进细胞凋亡的作用。对IGFBP-4的研究受到越来越广泛的重视。鹿茸是一种神奇的名贵中药，不仅具有其独特的药用价值，而且具有重要的科学研究意义。在动物的进化过程中，脊椎动物逐渐失去了肢体附属器官再生的能力，但鹿茸角作为一种复杂的哺乳动物附属器官，却能每年从角柄上脱落和完全再生。而且鹿茸生长速度之快在哺乳动物组织生长中也是绝无仅有的。鹿茸角为我们研究哺乳动物组织器官的再生、创伤修复以及癌症发生等提供了理想模型。本研究通过克隆人IGFBP－4cDNA、构建原核表达载体、并进行高效表达和纯化，利用基因工程技术来生产重组蛋白；利用纯化的重组IGFBP-4蛋白进行晶体生长，为进一步解析其三维结构、研究其结构与功能的关系奠定基础；利用体外细胞培养实验，研究其对鹿茸细胞增殖分裂及凋亡的影响，为进行鹿茸再生机理的深入研究开辟了新的途径。材料与方法：根据GenBank中人IGFBP-4成熟肽的cDNA序列，结合表达载体pGEX-6P-1的特点设计、合成一对特异性引物。采用PER的方法扩增人成熟IGFBP-4蛋白cDNA片段，然后将其定向克隆剑载体pGEX-6P-1中，构建原核表达重组载体pGEX-6p-1-BP4；重组载体转入大肠杆菌DH5α扩增、提取后，用PCR、限制性内切酶酶切以及DNA序列测定等方法进行鉴定。鉴定正确的阳性pGEX-6p-1-BP4重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过Amp抗性筛选获得稳定表达的阳性工程菌；以IPTG诱导工程菌高效表达重组蛋白IGFBP-4，利用GST亲合层析、琼脂糖凝胶层析对重组IGFBP4蛋白进行分离纯化，并进行Westernblot检测；最后通过晶体生长和体外细胞培养实验对重组IGFBP4蛋白进行结构和功能的研究。实验结果： 1、成功的构建了IGFBP-4cDNA原核表达载体pGEX-6p-1-BP4；建立了稳定转化pGEX-6p-1-BP4重组质粒的大肠杆菌细胞株BL21-pGEX-6p-1-BP4，并使IGFBP-4cDNA在转化细胞内获得高效稳定表达。 2、确立了工程菌以可溶性形式高效表达重组IGFBP4蛋白的培养条件。重组工程菌pGEX-IGFBP-4/BL21(DE3)的最佳表达条件确定为；温度16℃、IPTG浓度为0.6mM、诱导时间为20小时。建立了高效纯化重组IGFBP4蛋白的工艺，较好地纯化出了IGFBP-4蛋白，蛋白质纯度达到97％以上，为以后进行IGFBP4蛋白结构和功能的研究创造了条件。 3、本研究在生长温度为13℃，18％聚乙二醇8000，0.2mol/L醋酸钙，0.1M二甲胂酸钠，pH6.5条件下，成功地生长了重组IGFBP-4蛋白的晶体，并进行了晶体生长条件的优化，得到了可供蛋白质三维结构解析所需要的蛋白质晶体。 4、首次发现IGFBP－4蛋白对鹿茸细胞的增殖抑制作用，为进一步研究其在鹿茸生长和再生中的作用、阐明GH/IGF轴的生长调控机理开辟了新的可能途径。结论：本研究利用基因工程技术成功的构建了IGFBP-4cDNA原核表达载体，获得了稳定高效表达可溶性重组IGFBP-4的工程菌；经过GST亲合层析和琼脂糖凝胶过滤层析对重组IGFBP4蛋白进行分离纯化，获得了高纯度的有生物活性的目的蛋白；利用纯化的目的蛋白成功地生长出了可供三维结构解析的优良晶体，并证明了重组IGFBP-4对鹿茸细胞增殖具有抑制活性。为进一步深入研究IGFBP－4的结构与功能，研究鹿茸生长及再生的分子机理奠定了基础。收起

关键词 : 鹿茸细胞增殖抑制蛋白表达

10. 水貂微卫星多态性与经济性状相关的研究

[学位论文] 王雷中国农业科学院 2007年博士导师: 杨福合共88页

摘要 : 本文利用20个微卫星标记对8个水貂群体和类型的488个个体进行DNA多态性测定和统计分析.计算了等位基因频率、遗传杂合度、多态信息含量、奈氏遗传距离和奈氏标准遗传距离,采用NJ法构建了聚类分析图.结果表明：有Mvi389、Mvi355、Mvi1271和Mvi4032位点... 展开本文利用20个微卫星标记对8个水貂群体和类型的488个个体进行DNA多态性测定和统计分析.计算了等位基因频率、遗传杂合度、多态信息含量、奈氏遗传距离和奈氏标准遗传距离,采用NJ法构建了聚类分析图.结果表明：有Mvi389、Mvi355、Mvi1271和Mvi4032位点没有多态性,,其它的16个位点分别有不同程度的多态；Mvi4026、Mvi586、Mvi4051、Mvi4025、Mvi4039、Mvi4030、Mvi1273和Mvi1302是由三个等位基因A、B、C控制、Mvi2243、Mvi4015、Mvi1342、Mvi4013、Mvi4030和Mvi4001都是由两个等位基因A和B控制、Mvi4006和Mvi4042是由四个等位基因A、B、C和D控制.8个群体的平均杂合度在0.4458～0.4915,多态信息含量在0.4846～0.8775,平均为0.6926.从计算所得的奈氏遗传距离、奈氏标准遗传距离和NJ聚类图来看,银蓝色水貂和珍珠色水貂聚为一类,丹麦红眼白貂和丹麦标准貂聚为一类,符合实际,说明利用微卫星遗传标记识别和探讨水貂品种、类群间的亲缘关系是可行的.为水貂遗传资源的合理利用和保护提供科学依据. 方差分析表明:5个群体的体重,最高的是珍珠色水貂(公母分别为2.5707和1.1601),其次是金州黑(2.5533和1.1578)、银蓝色水貂 (2.4783和1.1280)、丹麦标准貂 (2.4577和1.1247),最小的美国短毛黑(2.0658和1.1089),体长最高的是金州黑公母分别为 (48.1333和39.6333),其次是珍珠色水貂公母分别为(47.3677和39.1333)、银蓝色水貂公母分别为(47.1333和39.0667)、丹麦标准貂公母分别为(46.2667和38.3667),最小的美国短毛黑公母分别为(44.9000和36.6333)针毛长度最高的是银蓝色水貂(27.3600),其次是珍珠色水貂(26.3467)、金州黑(23.4917)和丹麦标准貂(23.0000),最小的是美国短毛黑(20.1250).绒毛长度最长的是银蓝色水貂(16.8967),依次为珍珠色水貂(16.7217)、金州黑(16.4500)和美国短毛黑(16.3533),最小的是丹麦标准黑(16.0867),针毛直径和绒毛直径顺序都是最大的是珍珠色水貂(75.967和14.3667),依次为银蓝色水貂(73.183和14.1708)、金州黑(64.767和13.6733)和丹麦标准貂(63.667和13.4958),最小的是美国短毛黑(56.167和13.3667). 文中通过建立一般线性模型对美国短毛黑、大连金州黑、银蓝色水貂、珍珠色水貂和丹麦标准貂遗传标记的筛选,Mvi4004位点对金州黑水貂的体重影响较为显著,Mvi4015和Mvi4013位点对银蓝色水貂绒毛长度都有显著影响.最小二乘均数结果表明:金州黑Mvi4004的从型与AB型间的体重差异显著,金州黑Mvi4006的AC与BB基因型间的体重差异显著,A基因起正面效应,银蓝色水貂的Mvi4004的AA和BB基因型间体重差异显著,A基因起正面效应.丹麦标准貂Mvi4006的从型与AB型问的体长差异显著.珍珠色水貂的Mvi4013的AA和BB针毛长度差异显著,A基因起正面效应.珍珠色水貂Mvi586的BB和CC、BC和CC之间的针毛直径差异显著,银蓝色水貂Mvi4015的从和BB基因型、AB和BB基因型的绒毛长度之间差异显著,A基因起正面效应;Mvi4013的AA和AB基因型、AB和BB基因型的绒毛长度之间差异显著,Mvi4001 BB基因型的绒毛长度显著高于其它两种类型,B基因起正面效应.在金州黑水貂群体中Mvi4006的AC型与BD、CC型的绒毛直径有显著的差异,A基因起正面效应.在银蓝色水貂,Mvi2243的AA型和AB型绒毛直径差异显著,Mvi4001从型绒毛直径和AB基因型差异显著,B基因起负面效应. 收起

关键词 : 水貂微卫星标记基因多态性经济性状