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[学位论文] 岳雷温州医科大学 2017年硕士导师: 李仲荣共76页

摘要 : 目的：对哺乳期大鼠回肠灌注不同浓度的丁酸钠作用不同的时间，观察和验证在丁酸钠在活体哺乳期大鼠肠屏障功能保护中的作用及研究在这一过程中 AMPK的变化，建立丁酸钠对活体肠黏膜作用的量效关系。通过这些研究，可为存在肠屏障功能发育不全及... 展开目的：对哺乳期大鼠回肠灌注不同浓度的丁酸钠作用不同的时间，观察和验证在丁酸钠在活体哺乳期大鼠肠屏障功能保护中的作用及研究在这一过程中 AMPK的变化，建立丁酸钠对活体肠黏膜作用的量效关系。通过这些研究，可为存在肠屏障功能发育不全及肠黏膜屏障损伤易发因素的新生儿，寻找可增强肠屏障功能或促进肠屏障功能发育的因子或药物提供新靶点，对探索新生儿坏死性小肠结肠炎或对先天性巨结肠相关性小肠结肠炎的防治新途径具有重要价值和指导意义。方法：回肠灌注实验，同日生9天龄哺乳期大鼠称重后随机分成5组，每组20只；丁酸钠（PH=4.0）的浓度设定为20mM、40mM、80mM、160mM，空白对照用0.9%生理盐水（PH=4.0）；药物的作用时间设定为0h、0.5h、1h、2h、4h；经1%的戊巴比妥钠右下腹腔注射麻醉后固定；手术区域消毒后，在上腹部作一长约1cm横行切口逐层剪开皮肤和腹壁肌层肉暴露回肠末端，向回肠腔内注射生理盐水或丁酸钠（100μL/3cm），沿回肠末端向近端回肠方向（0.5cm）依次结扎，用37℃生理盐水冲洗腹腔后将肠管放回腹腔后将皮肤缝合。取回肠组织测定相关指标，实验方法如下： 1.一般情况观察观察术中乳鼠的呼吸节律及术后乳鼠对刺激的反应，有无腹胀、呕吐等，苏醒后能否正常活动；回肠组织标本肉眼变化，肠管变形扭曲、溃疡、出血，有无缺血缺氧改变。 2.丁酸钠对哺乳期大鼠回肠TER值的影响不同浓度丁酸钠作用不同时间后，将乳鼠回肠组织黏膜层与浆肌层分离后，在Ussing Chamber上测定回肠组织黏膜层跨上皮电阻（TER）值。 3.丁酸钠对哺乳期大鼠回肠上皮形态学结构的影响不同浓度丁酸钠（NS、20mM、40mM、80mM、160mM）作用1h及40mM丁酸钠作用不同时间（0h、0.5h、1h、2h、4h）后，HE法观察回肠组织肠绒毛长度、隐窝的深度、黏膜的厚度、肌层的厚度以及绒毛长度/隐窝深度。 4.丁酸钠影响哺乳期大鼠回肠Occludin表达不同浓度丁酸钠作用1h及40mM丁酸钠作用不同时间后，RT-qPCR法检测各组组织Occludin mRNA表达量，Western blot法检测肠黏膜组织Occludin蛋白水平。 5.丁酸钠影响哺乳期大鼠回肠ZO-1表达不同浓度丁酸钠作用1h及40mM丁酸钠作用不同时间后，RT-qPCR法检测各组组织 ZO-1 mRNA表达量，Western blot法检测肠黏膜组织ZO-1蛋白水平。 6. AMPK在丁酸钠作用于肠黏膜屏障过程中的关系不同浓度丁酸钠作用1h及40mM丁酸钠作用不同时间后，Western blot法检测肠黏膜组织pAMPK、AMPK的蛋白水平。结果： 1.一般情况观察结果实验过程中，乳鼠状态平稳，呼吸节律规整，对刺激反应迟钝，术后无腹胀、呕吐，苏醒后可正常活动；各组回肠组织未见肠管变形扭曲、溃疡、出血，也未显示缺血缺氧改变。 2.丁酸钠以时间和浓度的依赖性方式影响肠黏膜TER值丁酸钠作用时间、药物浓度两个因素分别影响肠黏膜TER值（P＜0.001），且时间与浓度有交互作用，共同影响肠黏膜TER值的变化。40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组作用1h，TER值明显增加（P＜0.05），40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组相比差异不显著（P＞0.05）。 3.丁酸钠对哺乳期大鼠回肠上皮形态学结构的影响不同浓度丁酸钠作用1h后，40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组肠绒毛长度增加，黏膜厚度增加，绒毛长度/隐窝深度的比值增加（P＜0.05）；40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组相比变化不显著（P＞0.05）；肠隐窝深度变化不显著（P＞0.05）；40mM丁酸钠组肌层厚度明显高于其他各组（P＜0.05）。 40mM丁酸钠作用不同时间后，1h组肠绒毛长度明显增加（P＜0.05），绒毛长度/隐窝深度比值变大（P＜0.0001）；隐窝深度、肌层厚度及黏膜的厚度变化不显著（P＞0.05）。 4.丁酸钠影响哺乳期大鼠回肠Occludin表达 40mM丁酸钠作用不同时间后，和0h相比，1h时Occludin mRNA表达增加（P＜0.05），蛋白表达也高于0h组（P＜0.05）；不同浓度的丁酸钠作用1h后，40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组Occludin mRNA表达高于其他各组（P＜0.05），蛋白表达量也明显增加（P＜0.05） 5.丁酸钠影响哺乳期大鼠回肠ZO-1表达 40mM丁酸钠作用不同时间后，和0h相比，1h时ZO-1 mRNA表达增加但不显著（P＞0.05），蛋白表达明显增加（P＜0.05）；不同浓度的丁酸钠作用1h后，40mM丁酸钠组与80mM丁酸钠组ZO-1 mRNA表达不显著，但蛋白表达量较生理盐水组明显增高（P＜0.05） 6. AMPK在丁酸钠作用于肠黏膜屏障过程中的关系 40mM丁酸钠作用不同时间后，1h与2h时pAMPK/AMPK比值显著减少（P＜0.05）；不同浓度的丁酸钠作用1h后，40mM丁酸钠组pAMPK/AMPK比值明显低于其他各组（P＜0.05）结论： 1.丁酸钠以时间和浓度依赖性方式影响肠黏膜屏障功能，调控紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达，但是否涉及 AMPK活化仍需进一步验证。 2.丁酸钠浓度为40mM、作用时间1h时，对肠黏膜屏障的保护作用最明显； 3.丁酸钠在维持肠道形态结构的完整性和促进肠道细胞增殖可能在肠屏障成熟方面有一定的作用。收起

关键词 : 丁酸钠肠黏膜屏障新生儿小肠结肠炎 AMPK

7. 孕期暴露于邻苯二甲酸二戊酯会破坏大鼠胎儿和成年睾丸间质细胞的发育

[学位论文] 陈海琼 2022年硕士导师: 李仲荣共71页

摘要 : 背景和目的：邻苯二甲酸盐（Phthalates）作为一种增塑剂，广泛用于聚氯乙烯、塑料和许多工业材料的溶剂中。已有许多报道证实邻苯二甲酸盐对雄性睾丸有许多毒性作用，尤其是对与雄性睾酮（Testosterone，T）生成及维持雄性特征相关的睾丸间质细... 展开背景和目的：邻苯二甲酸盐（Phthalates）作为一种增塑剂，广泛用于聚氯乙烯、塑料和许多工业材料的溶剂中。已有许多报道证实邻苯二甲酸盐对雄性睾丸有许多毒性作用，尤其是对与雄性睾酮（Testosterone，T）生成及维持雄性特征相关的睾丸间质细胞（Leydigcell，LC）有极大的破坏作用。邻苯二甲酸二戊酯（Di-n-pentylphthalate，DPeP）是邻苯二甲酸盐中广泛应用的一种。目前已有对于孕期暴露DPeP影响雄鼠胎儿睾丸间质细胞的发育及作用的报道，但潜在的机制不清楚；以及孕期暴露于DPeP对胎鼠成年后睾丸间质细胞的发育及作用未见有进一步的追踪研究。在这里，我们研究了DPeP在孕期暴露对雄鼠胎儿以及成年睾丸间质细胞发育的影响。材料与方法：雄仔鼠实验：将Sprague-Dawley（SD）孕鼠分为5组，每组9只，分别在孕期14天（GD14）开始给予0（玉米油），10，50，100和500mg/kg/d浓度的DPeP灌胃，持续8天，灌胃至GD21。母鼠顺产后取大部分雄仔鼠血清测量激素（睾酮）水平。取出雄仔鼠双侧睾丸，将一侧睾丸用Bouin’s固定液浸泡，后进行胆固醇侧链裂解酶（Cholesterolsidechaincleavageenzyme，CYP11A1）标记物免疫组织化学染色，以及增殖细胞核抗原（ProliferatingCellNuclear，PCNA）或凋亡细胞核抗原（TdT-mediatedDutpNick-EndLabeling，TUNEL）标记物免疫荧光染色，用于观察雄仔鼠睾丸间质细胞的数量和形态。另一侧睾丸冰冻后提取RNA、蛋白，分别通过实时荧光定量核酸扩增检测（Quantitativerealtimepolymerasechainreaction，qPCR）和蛋白质印迹（Westernblot，WB）的方法分别测量雄仔鼠睾丸间质细胞基因和蛋白的表达。成年雄鼠实验：上述各组每只母鼠身边留1只雄仔鼠母乳喂养到21天后进行离乳处理，之后再单独养至成年56天，同样取成年雄鼠血清、双侧睾丸、垂体。同以上检测内容外，另外检测成年雄鼠血清促黄体生成素（Luteinizinghormone，LH）的水平，验证下丘脑-垂体-外周性腺轴的作用。以及进行11β-羟基类固醇脱氢酶1（11β-hydroxysteroiddehydrogenase，HSD11B1）标记物免疫组织化学染色观测成熟睾丸间质细胞的数目。从而进一步研究在子宫内暴露邻苯二甲酸二戊酯对成年睾丸间质细胞发育的影响。结果：对于雄仔鼠实验部分，100和500mg/kg/dDPeP剂量组降低了刚出生时雄仔鼠血清睾酮水平。通过CYP11A1免疫组化标记睾丸间质细胞实验，统计细胞数目发现DPeP处理组显著增加CYP11A1阳性（CYP11A1+）的胎儿睾丸间质细胞数量，尤其是在高剂量组（500mg/kg/d）出现了明显的细胞异常聚集情况。qPCR以及WB检测发现许多与睾酮合成相关的基因出现了上调，但通过CYP11A1+的胎儿睾丸间质细胞数量校正后发现DPeP降低单个胎儿睾丸间质细胞中Lhcgr、Scarb1、Star、Cyp11a1、Hsd3b1、Cyp17a1、Hsd17b3、Insl3基因的表达，蛋白表达也是同水平地下调。而后在免疫荧光CYP11A1/PCNA的染色中发现，DPeP高剂量组胎儿睾丸间质细胞明显增加了PCNA阳性率，证实DPeP对胎儿睾丸间质细胞的影响可能是促进细胞的异常增生。对于成年雄鼠实验部分，在100和500mg/kg/dDPeP剂量组同样降低了成年雄鼠血清睾酮水平，并且下调了成年雄鼠血清LH水平。进一步通过提取与LH相关的垂体基因进行检测，发现促黄体生成素配体（Luteinizinghormoneligand，Lhb）有明显的下调但促性腺激素释放激素受体（Gonadotropin-releasinghormonereceptor，Gnrhr）有上升趋势，表明DPeP对成年雄鼠下丘脑-垂体-性腺轴有抑制作用。经免疫组化实验统计成年睾丸间质细胞数目后发现DPeP减少了成年雄鼠CYP11A1+的睾丸间质细胞数目，但不影响HSD11B1+的成熟睾丸间质细胞数目。qPCR以及WB检测发现DPeP降低成年睾丸间质细胞中大部分基因的表达，但同样通过CYP11A1+成年睾丸间质细胞数目校正过后，发现仅下调了单个成年睾丸间质细胞中Lhcgr和Star的表达，蛋白表达相应减少。进一步探究成年睾丸间质细胞基因与数目下调机制，DPeP也降低成年雄性大鼠睾丸中的SIRT1和BCL2蛋白水平，同时在CYP11A1/TUNEL的免疫荧光中也证实了DPeP高剂量组凋亡细胞核阳性率明显高于对照组，表明DPeP对成年雄鼠睾丸间质细胞的作用可能是通过增加细胞调亡从而减少细胞数目和基因的表达。结论： 1.DPeP会引起雄仔鼠睾丸间质细胞异常聚集同时降低单个睾丸间质细胞中睾酮相关基因的表达。 2.DPeP也会抑制成年雄鼠下丘脑-垂体-性腺轴的作用，减少LH的合成；增加成年雄鼠睾丸间质细胞的凋亡从而减少细胞数目和基因的表达。收起

关键词 : 孕期暴露邻苯二甲酸二戊酯睾丸间质细胞发育异常动物实验

8. 叶酸对大鼠肠神经干细胞增殖分化的影响及机制研究

[学位论文] 张田丰温州医科大学 2014年硕士导师: 李仲荣共70页

摘要 : 目的: 叶酸对中枢神经干细胞的增殖和分化有明显影响，对中枢神经系统的正常发育、功能修复起重要作用。肠神经干细胞在生物学特性上与脑神经干细胞有许多相似性又存在差异，叶酸对其作用如何尚不明确。本研究从孕14天(E14)SD胎鼠的消化道提取肠... 展开目的: 叶酸对中枢神经干细胞的增殖和分化有明显影响，对中枢神经系统的正常发育、功能修复起重要作用。肠神经干细胞在生物学特性上与脑神经干细胞有许多相似性又存在差异，叶酸对其作用如何尚不明确。本研究从孕14天(E14)SD胎鼠的消化道提取肠神经干细胞进行体外培养，并进行叶酸干预实验，探讨叶酸对其增殖、分化、凋亡的影响及可能的机制，为将来进行肠神经元发育缺陷性疾病干细胞移植治疗的研究提供理论依据。方法: 1.从孕14天SD胎鼠消化道提取肠神经干细胞，运用改良肠神经干细胞培养法，反复传代培养。 2.观察获得的肠神经干细胞形态，并经干细胞特异性标记物Nestin、Tuj-1、GFAP及Brdu进行细胞免疫学鉴定。 3.实验分组:将传代肠神经干细胞分为7组:①对照组(Control);②4μg/ml叶酸组(Folate-4);③40μg/ml叶酸组(Folate-40);④100μg/ml叶酸组(Folate-100);⑤400μg/ml叶酸组(Folate-400);⑥DMSO+40μg/ml叶酸组(Folate+DMSO);⑦U0126+DMSO+40μg/ml叶酸组(Folate+U0126)。 4.CCK-8法绘制细胞生长曲线:分别于24h、48h、72h、96h、120h五个时间点用酶标仪测量上述分组中肠神经干细胞在450nm处的OD值。 5.各组肠神经干细胞培养48小时后，流式细胞仪检测各组细胞中Nestin、BrduTuj-1及GFAP染色阳性细胞的百分比。 6.各组肠神经干细胞培养48小时后，流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。 7.各组肠神经干细胞培养48小时后，用Western-blot法检测各组总ERK1/2及磷酸化ERK1/2的蛋白表达量。结果: 1.从孕14天胎鼠消化道提取的原代细胞3-4天即能形成典型的神经球，并显示Nestin、Brdu标记蛋白阳性，经血清诱导分化的细胞GFAP、Tuj-1显阳性，证明提取到的原代细胞为肠神经干细胞。 2.肠神经干细胞进行传代培养后，经CCK-8法测得各组(24h、48h、72h、96h、120h)S个时间点的OD值随着时间的增加而升高，同一时间点随着叶酸浓度的递增OD值也相应升高，Folate-100组达到最大，5个时间点的OD值分别为(0.60±0.13，0.78±0.19，0.96±0.23，1.05±0.22，1.14±0.18)，与其它各浓度组相比均有明显差异(P＜0.05)，Folate-400组OD值有所下降。Folate+U0126与Folate+DMSO组相比，Folate+U0126各个时间点的OD值(分别为0.38±0.15，0.42±0.21，0.53±0.23，0.70±0.19，0.74±0.20)显著低于Folate+DMSO组(0.53±0.15，0.68±0.22，0.93±0.26，1.03±0.19，1.06±0.20)(P＜0.05)，提示随着抑制剂U0126的加入，叶酸对肠神经干细胞增殖的促进作用显著减弱。 3.传代培养48小时后，流式检测结果显示，与对照组相比，Folate-4、Folate-40和Folate-100叶酸组Nestin及Brdu阳性细胞百分比随浓度递增，Folate-100叶酸组达最高，分别为(84.26±8.0)％和(44.23±1.40)％，与其它各浓度组比较P＜0.05，而Folate-400叶酸组比值下降。Folate+U0126与Folate+DMSO组相比Nestin及Brdu阳性细胞百分率下降明显(P＜0.05)。 4.流式结果示Folate-100叶酸组Tuj-1阳性细胞百分比为(66.60±8.63)％,相比对照组显著增加(P＜0.05)，Folate-4及Folate-40叶酸组也有所增加，但无统计学意义。Folate+U0126组Tuj-1阳性细胞百分比为(39.40±7.99)％，与Folate+DMSO组比较，下降显著(P＜0.05)。 5.流式检测结果示除Folate-4叶酸组外，其余各浓度组GFAP阳性细胞百分比同对照组相比均有统计学意义(P＜0.05)，其中Folate-100叶酸组GFAP阳性细胞百分比为(55.83±5.15)％，显著高于对照组(P＜0.05)，且与Folate-4、Folate-400组相比存在差异(P＜0.05); Folate+U0126组GFAP阳性细胞百分比为(27.03±1.57)％，与Folate+DMSO组相比，下降显著(P＜0.05)。 6.流式检测各组细胞凋亡率，与对照组相比，除Folate-400组外，其余各组均无显著性差异(P＜0.05)，Folate-400组为(12.39±4.85)％，相较于对照组显著升高(P＜0.05); Folate+U0126与Folate+DMSO组比较，前者细胞凋亡率为(14.64±5.00)％,显著升高(P＜0.05)。 7.Western-blot结果示，和对照组相比Folate-4、Folate-40、Folate-100和Folate-400组磷酸化ERK1/2蛋白表达量均有增加，Folate-100组表达量最高，其相对灰度值为(0.85±0.14)％，除Folate-400组外，与其它各浓度组比较均有统计学意义(P＜0.05)。Folate+U0126组磷酸化ERK1/2蛋白表达量为(0.54±0.07)％,与Folate+DMSO组相比明显下降，有统计学意义(P＜0.05)。结论: 1.本实验可成功从SD胎鼠消化道中提取肠神经干细胞，所得神经球强阳性表达Nestin、Brdu，诱导分化后的神经元Tuj-1染色阳性、神经胶质细胞表达GFAP，说明得到的细胞为肠神经干细胞。 2.适当浓度的叶酸可促进体外肠神经干细胞的增殖和分化;浓度过高其增殖和分化作用减弱，并可能诱导细胞凋亡。 3.ERK1/2特异性抑制剂U0126能通过抑制ERK1/2信号通路来影响肠神经干细胞的增殖分化过程，并促进其凋亡。提示ERK1/2信号通路在叶酸调节大鼠肠神经干细胞增殖分化过程中起重要作用。收起

关键词 : 肠神经干细胞叶酸细胞增殖细胞分化

9. 大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白在发育过程中的变化

[学位论文] 林丰温州医科大学 2019年硕士导师: 李仲荣共68页

摘要 : 【目的】早产儿及新生儿好发坏死性小肠结肠炎，可能与肠屏障结构与功能发育不成熟有关。紧密连接（tightjunctions，TJs）是肠黏膜屏障的主要结构，可能也存在一个不断发育的过程。本研究通过对胎鼠至青春期大鼠间多个发育时期肠黏膜及occludi... 展开【目的】早产儿及新生儿好发坏死性小肠结肠炎，可能与肠屏障结构与功能发育不成熟有关。紧密连接（tightjunctions，TJs）是肠黏膜屏障的主要结构，可能也存在一个不断发育的过程。本研究通过对胎鼠至青春期大鼠间多个发育时期肠黏膜及occludin、claudin-1、claudin-8等紧密连接蛋白的观测，探讨肠黏膜TJs可能的发育规律，以探索TJs发育在肠屏障相关新生儿肠道疾病（如NEC）发生发展中的潜在意义。【材料与方法】实验动物及分组：SD大鼠怀孕第18天（E18组）及出生后1、7、21、28天（P1、P7、P21、P28组），共5组。每组共16只，取末端回肠进行以下实验：（1）苏木素-伊红染色（HE染色）：观察并测量各组肠管直径、肠绒毛长度等。（2）免疫荧光染色：观察各组肠管TJs蛋白occcludin、claudin-1和ZO-1的分布、荧光信号连续性等。（3）免疫蛋白印迹（WB）:检测各组中TJs蛋白occludin、claudin-1和claudin-8的表达水平。（4）透射电镜（TEM）：观察各组TJs结构，测量微绒毛（microvillus，MV）长度、宽度。【结果】 1.SD大鼠末端回肠HE染色结果：E18、P1、P7、P21、P28组的肠绒毛长度分别为100.2±13.4μm、137.5±17.5μm、142.5±18.9μm、311.8±20.2μm、316.7±18.1μm，在整体上绒毛长度随年龄逐渐增长（P＜0.05）；在P1-P7以及P21-P28期间存在两个增长速度较缓的平台期（P＞0.05），而在P7-P21期间，绒毛长度增长速度明显较快（P＜0.05）。测量不同年龄SD大鼠末端回肠横截面直径，发现在出生前后肠管横截面直径无明显变化（E18组与P1组比较，P＞0.05）；出生之后，肠管横截面直径随年龄逐渐增加（P1、P7、P21、P28组间两两比较P＜0.05）。 2.SD大鼠末端回肠免疫荧光染色结果：Occludin、claudin-1、ZO-1均主要分布于肠黏膜层，occludin和claudin-1广泛分布于黏膜层各个部分，而ZO-1几乎只分布于肠上皮细胞顶层；随着年龄的增加，occludin、claudin-1、ZO-1的荧光信号更加连续；定性比较荧光信号强度，随年龄的增加，occludin、claudin-1、ZO-1荧光信号强度逐渐增强。 3.SD大鼠末端回肠WB结果：occludin、claudin-1、claudin-8的表达水平E18组分别为（0.34±0.02、1.00±0.09、1.00±0.05）、P1组分别为（0.16±0.02、0.41±0.06、0.74±0.03）,P1组各项明显低于E18组（P＜0.05）；而在出生后（P1-P28期间）表达水平随年龄逐渐增长（P1、P7、P21、P28组间两两比较P＜0.05），其中occludin和claudin-8表达水平在P7（0.52±0.06、1.32±0.08）时超过E18（0.34±0.02、1.00±0.05）（P＜0.05）。 4.SD大鼠末端回肠TEM结果：观察并测量单个肠上皮细胞微MV长度，可知在P7、P21、P28中分别为0.89±0.13μm、1.15±0.1μm、1.52±0.13μm，表明MV长度随年龄出先增加后减少的趋势（P7、P21、P28组间两两比较P＜0.05）。MV宽度在P7、P21、P28中分别为111.1±16.6nm、116±13.6nm、124.7±8.4nm，三组中宽度未见明显差异（P＞0.05），表明MV宽度与年龄无明显相关性。观察细胞-细胞连接处TJs并比较P7、P21、P28组中其超微结构的差异，发现：P7组中TJs结构的轮廓较模糊，电子密度较高；P21以及P28组中TJs结构的轮廓清晰且表现为一密闭的带状结构，电子密度较P7组更高。反映了TJs的超微结构随年龄增加逐渐完整，轮廓更为清晰。【结论】 1.SD大鼠回肠绒毛长度和肠管横截面直径随年龄增长逐渐增加。 2.SD大鼠回肠紧密连接的完整性和连续性随年龄逐渐增加，提示可能与功能成熟有关。 3.SD大鼠回肠紧密连接蛋白occludin、claudin-1和claudin-8的表达水平随年龄逐渐增加，但在出生后有一过性下降过程，可能与此期易发NEC有一定关系。收起

关键词 : 新生儿肠道疾病肠黏膜上皮紧密连接蛋白发育过程临床治疗

10. 儿童原发性性腺生殖细胞肿瘤的临床分析

[学位论文] 唐文锋温州医科大学 2020年硕士导师: 李仲荣共61页

摘要 : 目的：总结儿童原发性性腺生殖细胞肿瘤的临床特征与诊治经验，并通过免疫组化法检测儿童睾丸卵黄囊瘤中CD147与MCT-1的表达情况并分析其相关性，以期指导临床诊治。方法：收集2010年1月至2019年12月在我院手术治疗的145例原发性性... 展开目的：总结儿童原发性性腺生殖细胞肿瘤的临床特征与诊治经验，并通过免疫组化法检测儿童睾丸卵黄囊瘤中CD147与MCT-1的表达情况并分析其相关性，以期指导临床诊治。方法：收集2010年1月至2019年12月在我院手术治疗的145例原发性性腺生殖细胞肿瘤患儿的临床资料，对发病年龄、病程、侧别、性别、临床症状、体征、术前血清肿瘤标志物、影像结果、病理结果、治疗方法及预后等内容进行回顾性分析，探索其临床特点。收集儿童睾丸卵黄囊瘤及畸胎瘤存档病理蜡块各16例为实验组，16例睾丸外伤或扭转组织蜡块为阴性对照组，并取10例成人睾丸精原细胞瘤蜡块为阳性对照组。将上述病理蜡块分组切片后采用免疫组化法检测CD147与MCT-1在各组中的表达情况并比较其差异与相关性。结果： 1.145例原发性性腺生殖细胞肿瘤中，睾丸肿瘤61例，卵巢肿瘤84例。左侧61例，右侧83例，双侧1例。良性生殖细胞肿瘤115例，恶性生殖细胞肿瘤30例。睾丸成熟性畸胎瘤39例，不成熟性畸胎瘤1例，卵黄囊瘤21例。卵巢成熟性畸胎瘤75例，不成熟性畸胎瘤4例，卵黄囊瘤2例，混合性肿瘤3例。 2.睾丸肿瘤患儿就诊年龄3月-13岁，中位就诊年龄1.5岁。卵巢肿瘤患儿就诊年龄0.5-14岁，中位就诊年龄8岁。睾丸肿瘤平均长径2.67±1.52cm，卵巢肿瘤平均长径6.92±4.15cm。 3.61例睾丸肿瘤中，共59例以阴囊无痛性肿物就诊，合并鞘膜积液6例。84例卵巢肿瘤患儿中，共45例因腹痛就诊，其中27例接受急诊手术治疗，证实卵巢肿瘤蒂扭转24例。 4.AFP在所有卵黄囊瘤与部分畸胎瘤中有升高，但卵黄囊瘤组术前AFP值明显高于畸胎瘤组，差异具有统计学意义（p＜0.05）。 5.75例卵巢良性生殖细胞肿瘤中42例采用腹腔镜手术治疗，另外33例行传统开腹手术。腹腔镜组平均住院日6.8天，传统手术组平均住院日8.1天，差异有统计学意义（p＜0.05）。 6.良性生殖细胞肿瘤采用肿瘤剜除术治疗，恶性睾丸生殖细胞肿瘤采用经腹股沟睾丸肿瘤根治术，恶性卵巢生殖细胞肿瘤行单侧卵巢肿瘤及附件切除术治疗。获随访的睾丸卵黄囊瘤患儿复发1例，无死亡病例；卵巢恶性生殖细胞肿瘤术后复发1例，死亡2例。 7.MCT-1与CD147主要表达在肿瘤细胞膜上，在胞浆中也有一定表达。 8.MCT-1在睾丸卵黄囊瘤中的表达率（81.25%）高于非肿瘤睾丸组织（25%），差异有统计学意义（p＜0.05）。 9.CD147在非肿瘤睾丸组织中很少表达（6.25%），在睾丸卵黄囊瘤（87.5%）与畸胎瘤（43.75%）中均有较高表达，差异有统计学意义(p＜0.05)。 10.CD147在儿童睾丸卵黄囊瘤中的表达率(87.5%)稍高于MCT-1(81.25%),经Spearman等级相关分析发现两者在卵黄囊瘤中的表达呈正相关（r=0.787,p＜0.01）。结论： 1.在儿童性腺生殖细胞肿瘤中成熟性畸胎瘤发病率最高，卵黄囊瘤次之。 2.儿童睾丸生殖细胞肿瘤发病高峰在2岁左右，卵巢生殖细胞肿瘤发病高峰在8岁左右。 3.I期睾丸卵黄囊瘤采用单纯根治性手术治疗效果满意，不必常规化疗。 4.CD147在睾丸生殖细胞肿瘤组织中的表达水平高于非肿瘤睾丸组织，且CD147的表达水平与肿瘤的恶性程度有关。 5.在儿童睾丸卵黄囊瘤中，CD147与MCT-1主要表达在细胞膜上，两者均有较高的表达率且存在联合表达。收起

关键词 : 原发性性腺生殖细胞肿瘤儿童患者流行病学临床治疗 CD147蛋白单羧酸转运蛋白-1