中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 沙明辽宁中医药大学 1999年博士导师: 杨松松共355页

摘要 : 该文首次采用植物形态与显微鉴别法;高效液相指纹图谱与聚类分析法;高效液相色谱与质谱联用法;尤其是DNA分子指纹图谱技术对独活及同属植物进行综合性与专属性的鉴别研究,并取得了新的研究进展.

关键词 : 中药质量标准规范化

[学位论文] 崔长乐辽宁中医药大学 2022年博士导师: 成泽东共259页

摘要 : 目的：十二募穴在临床中应用较多，是针灸穴位研究中重要的组成部分。募穴的主治病证种类较多，其配穴规律较为复杂，募穴配伍在疾病诊疗中发挥重要作用，但募穴的标准化应用一直未有相关研究。因此在针灸标准化体系具体内容的研究中，对十二募... 展开目的：十二募穴在临床中应用较多，是针灸穴位研究中重要的组成部分。募穴的主治病证种类较多，其配穴规律较为复杂，募穴配伍在疾病诊疗中发挥重要作用，但募穴的标准化应用一直未有相关研究。因此在针灸标准化体系具体内容的研究中，对十二募穴针灸理论研究及临床实践各个环节制定标准化的修订是必然的。故本研究分为3个部分对募穴的标准化应用进行初探。 1.基于CiteSpace软件对募穴总体及分属十二募穴的研究文献进行知识图谱可视化分析，探索募穴总体及分属十二募穴的研究热点和发展趋势。 2.通过CNKI、万方、维普、CBM、Pubmed数据库中的募穴使用的情况进行筛选与分析，总结募穴主治病证和穴位配伍规律。 3.基于十二募穴针灸理论研究及临床实践各个环节构建针灸标准化体系；应用测评工具对募穴针灸标准化体系的可靠性和有效性进行验证。. 方法： 1.以中国知网（CNKI）作为文献数据来源，检索建库以来到2021年12月有关募穴研究的相关文献，应用CiteSpace5.7.R5软件对发文量、作者、机构、关键词进行分析，绘制相关知识图谱并进行分析。 2.通过对CNKI、万方、维普等各大数据库文献的筛选，应用Excel收集和整理十二募穴临床应用的相关文献，基于数据挖掘技术对穴位的主治病证及穴位应用的频次及配伍等进行统计分析。 3.基于德尔菲法构建募穴临床应用标准的量表研究，对募穴针灸标准化体系各指标项目进行修正和调整，通过专家评分和意见反馈的整理、归纳、分析、总结，最终获得较为客观、完善的关于募穴针灸标准化体系专家共识。通过问卷调查的形式进行信度、效度的测量学属性评价，验证本标准体系的科学性和合理性。结果： 1.CiteSpace文献计量研究，基于CNKI数据库最终纳入募穴453篇、中府33篇、巨阙33篇、期门151篇、章门43篇、京门9篇、膻中529篇、中脘1065篇、日月110篇、天枢785篇、中极533篇、关元1113篇、石门25篇。募穴总体及分属十二募穴的研究文献量在近期均有不同程度的增加，募穴总体及分属十二募穴的发文量自2000年以后明显升高，发文量高的机构多为各区域的中医药大学，研究重点从前期的理论研究及个案研究逐渐向临床随机对照研究、病例对照研究及临床应用配穴规律研究发展。 2.经过CNKI、万方、维普等数据库筛选，最终得到6460篇的合格文献，分别进行12个募穴的主治病证及配穴规律的数据挖掘研究。十二募穴由于其分布及主治脏腑的特征不同，对不同系统的疾病均有治疗作用，其中中府擅于治疗呼吸系疾病中哮喘、支气管炎、咳嗽等肺系疾病，配穴多与肺俞、膻中、天突等相伍；巨阙擅于治疗胸痹、冠心病、心绞痛、心律失常等心系疾病，配穴多与内关、心俞、膻中等相伍；期门擅于治疗肝炎、肝硬化、胁痛等肝胆系统疾病，配穴多与章门、关元、支沟等相伍；章门擅于治疗肥胖、肝炎、肝硬化等代谢性疾病及消化系统疾病，配穴多与中脘、天枢、足三里、期门、肝俞、日月等相伍；京门擅于治疗肾绞痛、IgA肾病、尿路结石等泌尿系统疾病，配穴多与足三里、三阴交、肾俞等相伍；膻中擅于治疗咳嗽、咳喘、呃逆、胸痹、心痛等肺系、心系疾病，配穴多与肺俞、膈俞、天突等相伍；中脘擅于治疗胃脘痛、纳差、肥胖等消化系统及代谢性疾病，配穴多与足三里、天枢、脾俞相伍；日月擅于治疗胆囊炎、胆石症、肝炎、肝硬化等肝胆系统疾病，配穴多与期门、阳陵泉、肝俞、胆俞等相伍；天枢擅于治疗便秘、腹泻、肥胖等消化系统及代谢性疾病，配穴多与神阙、关元、足三里、中脘等相伍；中极擅于治疗癃闭、遗尿、痛经等泌尿系统及妇科疾病，配穴多与关元、三阴交、足三里等相伍；关元擅于治疗癃闭、月经不调、尿失禁等泌尿系统及妇科疾病，配穴多与神阙、气海、中极等相伍；石门擅于治疗癃闭、肥胖、盆腔炎等泌尿系统、代谢性疾病、妇科疾病等，配穴多与中极、关元、气海等相伍。 3.两轮专家积极系数均为100%；两轮专家对问卷各条目的熟悉程度（Cs）分别为0.860和0.888，对指标的判断依据、影响程度（Ca）分别为0.84和0.87，根据专家权威程度公式权威系数分别为0.85和0.879；专家协调程度第一轮W值在0.46-0.82之间，第二轮W值在0.53-0.93之间，第二轮各指标的W值高于第一轮，具有统计学意义（P＜0.05），说明专家对于十二募穴标准化体系的条目和能力评分是具有较好的协调一致；对问卷的各条目的主成分分析结果显示研究构建的十二募穴标准化问卷具有较好的信度、效度；经过两轮专家咨询，专家从规范十二募穴穴位标准化项目、精简各穴位系统疾病和优势病种、统一优势病种的中医或西医病名、配穴形式规范化、增加“穴位理论基础”中对穴位特性的标准化研究、标准化问卷的整体条理、对需要标准化项目类别进行适当说明和解释等7项总体建议，专家对问卷中涉及的十二募穴各条目的内容进行了评分，提示专家对问卷中十二穴位的调查内容的重要性较为认可。中府穴多用于咳嗽、喘促、肺胀、肺痈等肺系疾患，优选配穴以选取手太阴肺经和足太阴脾经上的穴位为主；巨阙穴多用于治疗心痛、心悸、心烦不眠等心胸病证，优选配穴为合谷、三阴交、商丘等；期门穴多用于治疗肝病、心肺疾病等，优选配穴为肝俞、支沟、阳陵泉、足三里等；章门穴多用于胸胁支满、黄疸、饮食积滞等脾胃肝胆疾病，优选配穴以肝脾穴位配伍为主；京门穴多用于遗精、早泄、腰膝疼痛、小便不利等肾系疾病，优选配穴以肾俞为主；膻中穴多用于治疗咳嗽喘促、乳痈、胸痹心痛等疾病，优选配穴为足三里、中脘，次选配穴为肺俞、大陵、太冲、合谷、三阴交等；中脘穴多用于各类腑病，优选配穴以天枢、神阙、足三里等为主；日月穴多用于肝胆系疾患，优选配穴以期门、肝俞、胆俞穴、阳陵泉等为主；天枢穴多用于治疗腹泻、腹痛、腹胀、消化不良等脾胃大肠疾病，优选配穴以中脘、关元、神阙、足三里等为主；中极穴多用于治疗生殖系统、泌尿系统的疾病，优选配穴为三阴交、气海、足三里等；关元穴多用于治疗少腹挛急、淋证、尿频尿急、泄利不止等，优选配穴气海、三阴交、神阙、天枢、中脘等为主；石门穴多用于治疗脘腹胀满、便秘、崩漏等疾病，优选配穴需临证进行辨证。结论： 1.基于CiteSpace，募穴总体研究方法为电针、针刺、针灸等，研究的重点领域主要包括募穴的临床应用及其与其他穴位的配伍规律研究。 2.募穴临床应用效果显著，擅于治疗脏腑病证，穴位配伍的协同作用突出，具有重要的研究价值。十二募穴的主治病证涉及肺系、心系、肾系、妇科、代谢性疾病等诸多门类，募穴的配伍规律以俞募配穴、募募配穴、合募配穴、原募配穴、交会穴配穴、募穴与局部腧穴配伍为主。 3.基于德尔菲法，专家对十二募穴的问卷各条目的重要性较为认可，从募穴穴位理论基础、穴位实际操作、临床应用等方面，构建募穴临床辨治的标准化体系。对指导临床募穴的应用和促进业内共识性中医募穴辨治标准化体系形成有重要意义。收起

关键词 : 十二募穴知识图谱主治病证取穴规律

4. 基于中医古籍的月经不调核心概念与诊疗理论研究

[学位论文] 马丹辽宁中医药大学 2019年博士导师: 傅海燕共246页

摘要 : 月经不调作为最常见的妇科病，近年来的发病率不断上升，极大地威胁着女性的身心健康，如若迁延治疗，或失治误治，可致闭经、崩漏、贫血、不孕等病的发生，严重影响女性的工作和生活。因此医家和学者从自身的诊疗经验出发，对月经不调某一类证候的辨... 展开月经不调作为最常见的妇科病，近年来的发病率不断上升，极大地威胁着女性的身心健康，如若迁延治疗，或失治误治，可致闭经、崩漏、贫血、不孕等病的发生，严重影响女性的工作和生活。因此医家和学者从自身的诊疗经验出发，对月经不调某一类证候的辨治及见解较丰富，但尚缺乏系统的梳理。且近年来专家与学者发现对于月经不调疾病的治疗，中医有着自身独特的优势，疗效显著。故本文针对月经不调诊疗理论的发展与演变进行深入研究，构建月经不调中医诊疗理论框架，为指导月经不调的理论研究与临床诊治，提供帮助。全文分为五个部分：第一部分绪论。从研究方法的角度，明确文献资料的选择原则与方法，选取先秦两汉至清末历代医籍中，有关月经病理论的文献进行收集整理，包括四大经典、官修医籍、历代妇产科专著，以及综合性医书，确定入选古籍书目59部。以理论思维为主导，综合运用文献学、术语学和框架研究等方法开展相关研究。其次，确定核心概念、各家专论的选择原则，明确核心概念体系的建立方法。第二部分月经不调诊疗理论的历史发展研究。以时间维度为主轴，纵向梳理历代医籍中有关月经不调的理论。以疾病为主线，横向研究月经不调总论、月经先期、月经后期、月经先后无定期、月经过多、月经过少的病名、因机证治等发展概况。第三部分月经不调诊疗理论核心概念研究。以国家973项目确定的研究方法为依托，系统梳理并确定月经不调总论及各病的病名、因机证治等核心概念，共计179个，明确核心概念的内涵与外延，深化对月经不调理论体系内在结构的认识和表述，按照概念之间的层级关系，梳理出月经不调因机证治诊疗理论层次清楚的核心概念体系。第四部分月经不调诊疗理论核心专论研究。选取历代医家具有代表性、原创性的月经不调专论，深入挖掘其中内涵，阐释其学术渊源及价值。第五部分对历代月经不调及各病诊疗理论的既有框架进行研究整理，完成以病机为中心，因、机、证、治齐备的月经不调及其各病诊疗理论框架结构的搭建。综合以上研究总述如下： 1.月经不调病名的演变 “月经不调”的病名始见于《备急千金要方》，此时已经认识到月经不调包括月经周期的异常和经量的异常。宋金元时期出现了“月水不调”“月候不调”“经候不调”等相关病名，但并不规范。明清时期基本沿用前代病名，较少出现新的名称。究其原因，主要是宋金元时期的医家们逐渐将月经不调的各病作为独立的疾病进行阐述，提出单独的病名，对各病的命名贡献极大。 “月经先期”之名首见于《校注妇人良方》。此外还有“经行先期”“经水不及期”“经早”等名称。“月经后期”之名始见于《女科秘要》。医家多称之为“过期”与“后期”。《圣济总录》最早将其称为“月水过期”“后期而至”。月经先后无定期的病名有“或前或后”“经乱”“愆期”“经水先后无定期”等不同。孙思邈最早使用“月水或前或后”之名来描述月经先后无定期。此后医家大多沿袭“或前或后”之说。“经乱”之名最早见于《景岳全书》。“经水先后无定期”最早见于《傅青主女科》。 “愆期”之名，最早见于《产育宝庆集》，在《女科百问》《妇人大全良方》《女科证治准绳》《医宗金鉴》等著作中均有“愆期”之称，却并非专指月经先后无定期。宋以前“愆期”之名，多指月经后期。《济阴纲目》将“愆期”之名作为月经先期与月经后期两病的统称。《医宗金鉴》明确指出经行或前或后，无定期之证为“愆期”。后世多沿用“愆期”指月经先后无定期。故“愆期”之名应予明确区分。 “月经过多”之名最早见于《圣济总录》，但只是作为一类证候。至刘完素最早将月经过多作为独立的疾病，首次提出“经水过多”之病名。月经过少的病名出现较早，《脉经》中最早提出“经水少”。后世也均以“少、涩少、微少”指代月经过少。 2.月经不调的病因先秦两汉时期，主张人体经脉与天地相应，外感寒暑之邪可致月经不调。晋唐时期开始注重外感、内伤合而致病。《诸病源候论》最早明确提出月经不调的病因在于劳伤气血兼外感风冷之邪。宋金元时期大多沿袭此说。《圣济总录》则补充了情志致病的因素，指出月经不调可因心气抑滞，情志不畅，血气郁结而致。明代以后，对月经不调病因的认识有了极大的突破。《女科撮要》首次从内伤七情、外感六淫、饮食失节、起居失常四方面论述了月经不调的病因。《景岳全书》将月经不调的病因归结为情志、劳倦、冲任不守、外感、误治、先天禀弱、纵情亏损等七个方面，且以情志致病为首。《医宗金鉴》以三因致病说为基础，认为外因经病多因于寒、热、风邪所致，内因经病主要在于七情所伤，不内外因经病则包括脾胃损伤、房劳损伤和产子过多等。月经先期、月经后期、月经先后无定期、月经过多、月经过少因独立成为专病较晚，因此病因的认识以明清为主，基本与月经不调总的病因认识相近，各病略有侧重。 3.月经不调的病机有关月经不调病机的论述，最早见于《金匮要略》，书中首次提出因虚、寒、结气所伤，血寒积结胞门，寒伤经络的观点。《圣济总录》最早提出妇人“以血为本，以气为用”的理论，认为月经不调总的病机在于气血失调，损伤冲任。《普济本事方》认为阴阳的偏胜偏衰是导致月经不调的重要原因。两种观点均被后世广泛遵循。朱震亨从体质方面强调病机在于痰湿。薛己最早提出“心脾平和，经候如常”的观点。此观点被后世医家所认可，并广泛沿用。万全将病机概括为脾虚、冲任损伤、脂痰凝塞三个方面，全面总结了历代医家对月经不调的病机认识。对于月经不调各病的病机认识，总体来说明清时期更加准确而丰富。有关月经先期的病机认识，始于朱丹溪。他提出血热、气血俱热而致月经先期，后世医家多沿袭“先期属血热”之说。《万氏女科》提出血热又分血盛有热和血虚有热。《苍生司命》又补充了气虚病机。至《景岳全书》则全面概括月经先期病机在于血热和气虚，血热又分虚热和实热，气虚又分心脾气虚、脾肾气虚。明清时期，由于受到命门学说的影响，一些医家开始从肾论治。如《古今医统大全》认为月经先期为肾阴虚，不能镇守。《傅青主女科》指出病机在于肾中水火太旺，或肾中火旺水亏而致。对于月经后期的病机认识，亦始于朱丹溪。他提出血虚、血热、痰湿和气血虚均可致病。《苍生司命》又提出病机为气寒、血少和气逆。《景岳全书》提出血寒又有外感寒邪和阳虚内寒之分。《傅青主女科》根据月经量多少来辨别实寒、虚寒。指出月经后期而至量少者，为血寒而不足;月经后期而至量多者，为血寒而有余。总体来说，对月经后期病机的认识可以概括为血虚、气血虚、阳虚、血寒、血热、气滞和痰湿。对月经先后无定期的病机认识较晚，大致可以概括为血虚、肾虚、脾虚和肝郁。《万氏女科》提出月经先后无定期因虚所致。《景岳全书》认为病机可分血虚和肾虚，肾虚又有肾阳虚、肾阴虚之分。《傅青主女科》有创见性地提出病机在于肝肾之郁。《叶氏女科证治》《竹林寺女科证治》等书认为病机在于脾胃虚弱。《顾松园医镜》认为病机在于气乱。对月经过多病机的认识，可概括为血热、虚热、气虚、血虚和痰多。《丹溪心法》指出痰多壅滞，血不循经而致经水过多。《万氏女科》提出血热之病机。《医学纲目》提出病机在于虚热和气虚。《傅青主女科》提出血虚而不归经致月经过多。对于月经过少的病机认识较早，《黄帝内经》最早提出“月事衰少”，指出其病机为气竭肝伤。《脉经》指出月经过少由“亡其津液”而致。此后医家大多以血虚、痰凝和寒滞为其病机。总体上分为虚、实两个方面，虚者包含肾水不足、血虚、中气虚、气血虚、阴虚和阳虚，实者包含痰凝、气郁肝伤、气滞血瘀、火烁津液和血寒壅滞。 4.月经不调的辨证论治对于月经不调的辨证论治，分为气血辨治和脏腑辨治两方面。历代医家多重视“养血调气”，并以此发展出多种治则治法。如《普济本事方》指出调其气血，以平为福。《济生方》指出气血同治，但调气重于调血。《济阴纲目》指出调经当抑气。《孕育玄机》指出调经顺气，养血为先。《女科经纶》概括前人医论，提出“调经养血，莫先以顺气为主”“调经莫先于养血，养血莫先于调气”。脏腑辨治方面，分为心脾辨治、从肾辨治和从肝辨治。《万氏女科》指出“调经，专以理气补心脾为主”。《医宗粹言》强调调经不可独耗其气，应养心实脾的观点。《女科经纶》指出调经以补养脾胃为大法。张介宾言“调经之要，贵在补脾胃以资血之源;养肾气以安血之室”。赵献可提出“调经必须滋水为主”“滋水更当养火”，发展了以补肾来论治月经不调的理论。明确从肝辨治月经不调，则见于《傅青主女科》。 5.月经不调共性诊疗理论框架对月经不调因、机、证、治共性诊疗理论框架结构进行梳理，形成以“热扰冲任”“冲任不固”“血海空虚”“冲任阻滞”“封藏疏泄失司”“血海蓄溢失常”“冲任紊乱”为核心病机，以“血热证”“血寒证”“气滞血瘀证”“痰阻证”“阴虚证”“阳虚证”“脾虚证”“肾虚证”“肝郁证”为核心病证，以“清热凉血”“温经养血”“活血化瘀”“健脾祛湿”“滋阴清热”“补脾益肾”“疏肝解郁”为核心治法的月经不调共性诊疗理论框架。本研究对月经不调的系统梳理，理清了月经不调中医诊疗理论的源流、核心概念与核心专论与共性诊疗理论，对于现代月经不调疾病的诊治具有临床指导价值。收起

关键词 : 月经不调核心概念诊疗理论文献研究

5. 手部井穴临床应用规律的古代文献研究

[学位论文] 王鹰辽宁中医药大学 2018年博士导师: 陈以国共245页

摘要 : 目的：整理手部六井穴在古代文献中的临床应用条文，探究其适宜病症和配伍应用规律，为阐释手部井穴理论内容及临床适宜病症和配穴应用提供文献学依据；归纳手部各井穴临床应用配伍规律，为临床和科研探究和使用手部井穴提供指导。方法：... 展开

关键词 : 手部井穴配伍规律临床应用

6. 丹蒌片治疗稳定型心绞痛痰瘀互结证疗效评价与网络药理学机制研究

[学位论文] 李增辽宁中医药大学 2023年博士导师: 张明雪共234页

摘要 : 目的：基于数据挖掘技术总结导师临床治疗稳定型心绞痛证治规律，为稳定型心绞痛的治疗提供方法和依据；基于网状Meta分析探究不同种类中药复方制剂治疗稳定型心绞痛痰瘀互结证的临床疗效并进行排序，明确稳定型心绞痛痰瘀互结证临床治疗的优效干预措... 展开目的：基于数据挖掘技术总结导师临床治疗稳定型心绞痛证治规律，为稳定型心绞痛的治疗提供方法和依据；基于网状Meta分析探究不同种类中药复方制剂治疗稳定型心绞痛痰瘀互结证的临床疗效并进行排序，明确稳定型心绞痛痰瘀互结证临床治疗的优效干预措施；通过临床随机对照研究评价丹蒌片治疗稳定型心绞痛痰瘀互结证的有效性及安全性并为稳定型心绞痛中医辨证治疗方案的优化提供循证医学证据；基于复方网络药理学预测丹蒌片的有效成分及治疗冠心病的核心靶点，阐述丹蒌片治疗稳定型心绞痛的分子作用机制并通过分子对接进行验证，为丹蒌片临床研究提供现代理论依据。材料与方法： 1.收集张明雪教授2018年1月至2022年12月于辽宁中医药大学附属医院诊治的稳定型心绞痛患者，依据纳排标准纳入病例，并提取相关数据建立数据库，通过运用MicrosoftOfficeExcel2022对患者一般资料、证素、单味药使用频次、性味、归经频次及频率进行统计分析，通过SPSSModeler18.0软件进行关联规则分析并制作可视化图表。通过SPSSStatistics26.0软件进行聚类分析并将分析结果可视化，以总结导师治疗稳定型心绞痛的证治规律。 2.以“冠心病”、“心绞痛”、“稳定型心绞痛”“胸痹”及“痰瘀互结”、“痰瘀”等为主题词，采取主题词与自由词结合方式进行检索，依据纳排标准检索各数据库自建库-2022年10月，CNKI、万方、VIP、Pubmed、CochraneLibrary、Embase、Webofscience，剔除重复文献并通过阅读摘要和全文将最终纳入的文献进行网状Meta分析获得治疗稳定型心绞痛痰瘀互结证的有效中药复方制剂，并比较各药物之间的疗效差异。 3.以辽宁中医药大学为牵头单位，在东北、华北、西北、华中、华东、华南、西南12个国家中医临床研究基地进行多中心实用性随机对照研究。研究对象为稳定型心绞痛痰瘀互结证患者（共计304例），以稳定型心绞痛西医常规治疗为对照组（152例），中医辨治干预组为试验组（152例）。两组均接受西医常规治疗，根据中医辨证分为痰瘀互结本证、痰瘀互结兼气虚、痰瘀互结兼气滞、痰瘀互结兼毒蕴4个亚组。试验组依据辨证结果在西医常规治疗的基础上采用丹蒌片或丹蒌片加味干预治疗（痰瘀互结兼气虚+党参、茯苓、法半夏；痰瘀互结兼气滞+元胡、枳实、法半夏；痰瘀互结兼毒蕴+酒大黄、虎杖、法半夏）。由中央随机系统产生静态区组化随机序列，受试者按分配到的随机序列进入对应组。采用中心化随机序列分配，以达到分配隐藏原则，随机中心的管理员不参与试验实施和随访的任何环节。以每周心绞痛发作频次为主要疗效评价指标，次要疗效评价指标包括西医疗效（a.症状体征：心绞痛症状积分、SAQ量表；b.理化指标：心电图疗效评定、心脏彩超、运动试验、血脂、血糖、凝血四项、血液流变学、Hcy、hs-CRP或CRP）、中医证候（证候积分、舌象、脉象）、远期预后（终点结局、心血管事件）。为分别于治疗开始后的第0、4、12、24周进行现场随访评估疗效，电话随访为治疗结束后的第36周、第48周。并对第0周（治疗前）和第24周（治疗后）数据进行统计分析，以P＜0.05认为差异具有统计学意义。 4.基于网络药理学方法，通过TCMSP平台检索并筛选筛选丹蒌片药物活性成分；基于SwissTargetPredictiion数据库预测活性成分潜在作用靶点；通过Cytoscape3.8.0软件实现“药物－活性成分－作用靶点”网络可视化并筛选丹蒌片治冠心病主要活性成分；通过Drugbank和Genecards数据库收集冠心病基因靶点；将药物潜在作用靶点与疾病靶点取交集并导入String数据库进行蛋白互作网络分析（PPI），进一步筛选丹蒌片治疗冠心病的核心靶点；将交集靶点导入Metascape数据库进行GO及KEGG富集分析以分析药物治疗疾病靶点的生物学功能及可能的作用通路；最终筛选并获得丹蒌片治疗冠心病的活性物质与分子作用机制。应用R3.6.1软件实现富集分析结果可视化；通过AutoDockTools1.5.6软件进行分子对接验证并通过PyMol软件实现分子对接结果可视化。结论： 1.基于数据挖掘结果可知，稳定型心绞痛病机总属本虚标实，以气虚为本，痰浊、瘀血、气滞、火（热）为标，病位在心，与肺、肝、脾三脏密切相关。导师临床治疗稳定型心绞痛常以益气活血化痰为基本治法，痰瘀同治，气血同调，标本兼顾。核心处方为西洋参、黄芪、法半夏、瓜蒌、薤白、桃仁、柴胡，临证之时偏于气虚或大气下陷者，以核心处方合升陷汤加减；偏于阴虚者，合生脉饮加减；以瘀血为主者，合血府逐瘀汤加减；以痰浊为主者加茯苓等祛湿化痰药；以气滞为主者，加香附、郁金等行气活血类药；以火（热）为主者，加白茅根等清热凉血类药。结合证素频次统计分析以及导师核心处方及主要治法可推断出稳定型心绞痛主要证型为痰瘀互结证。 2.基于网状Meta分析结果可知，在西药常规基础上加用中药复方制剂在一定程度上可以显著提高稳定型心绞痛痰瘀互结证患者的临床总有效率，改善心绞痛症状，提高心电图疗效，减少硝酸甘油用量。其中丹蒌片+常规治疗、瓜蒌薤白半夏汤+常规治疗在提高稳定型心绞痛患者临床总有效率、心绞痛症状疗效、心电图疗效、硝酸甘油停减率方面较其它干预措施具有显著优势，可能为最佳干预治疗方式。在降低hs-CRP水平方面，各中药复方制剂干预措施与常规西药治疗效果差异不明显，根据SUCRA概率排序，表明丹蒌片+常规治疗可能是降低hs-CRP水平的最佳干预措施。同时瓜蒌薤白半夏汤加减+常规治疗在临床总有效率、心绞痛症状疗效、心电图疗效、硝酸甘油减停率方面的疗效优势也进一步表明了论文一研究中导师临床治疗本病核心处方“西洋参-黄芪-法半夏-瓜蒌-薤白-桃仁-柴胡”的有效性，且与丹蒌片临床疗效相当，处方思路相同，均以活血化痰为治疗原则。 3.由临床试验统计分析结果可知，在中医辨证基础上采用丹蒌片及其加味应证治疗可显著降低稳定型心绞痛痰瘀互结证及其兼证受试者的每周心绞痛发作频次，提高心绞痛症状疗效及中医证候积分疗效和心电图疗效，延长活化部分凝血活酶时间，降低甘油三酯水平和同型半胱氨酸水平，提高西雅图心绞痛量表评分和健康状况简表评分，较单纯西医治疗具有明显优势，且安全性和远期预后良好。值得进一步深入研究和临床进一步应用和推广。此外，本研究采取在主病主证干预方案基础上结合应证干预措施充分体现了“据象辨证、病证结合”的中医特色辨证思维和“法象尽意、方证相应”的中医特色临证思维，凸显了中医辨证论治特色的诊疗优势，也揭示了pRCT在中医药临床试验中的优效性，在中医药临床试验中采取pRCT研究方法更能加强中医辨治干预与疗效判定的因果联系，从而完善中医临床证据，提高证据水平。本研究通过多中心实用性随机对照临床试验设计，用符合循证要求的严格科研设计，揭示了活血化痰法和应证中医治法的疗效优势，保证了证据的实证性和适用性，为中医药临床研究提供了方法学创新应用示例。明确了中医据象辨治的适宜人群，明确冠心病早期干预的疗效优势，为优化稳定型心绞痛中医药防治方案提供了高质量的循证依据。 4由网络药理学结果可知，丹蒌片治疗冠心病的作用机制可能为：丹蒌片药物活性成分主要通过抑制性调控AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路的表达，从而减少NF-κB的激活，抑制黏附分子、血管内皮生长因子（VEGF）、炎细胞因子等的表达和释放，从而减轻氧化应激和炎性反应，延缓冠状动脉粥样硬化进程，保护血管内皮功能，发挥冠心病的治疗作用。收起

关键词 : 稳定型心绞痛丹蒌片痰瘀互结证网络药理学

7. 针刺对SAH小鼠脑中CARD9表达的调节在早期脑损伤中的作用及机制研究

[学位论文] 邹正辽宁中医药大学 2023年博士导师: 董宝强共232页

摘要 : 目的：本研究旨在探究针刺对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤的作用及机制。研究利用线穿法制备蛛网膜下腔出血动物模型，以CARD9蛋白及其下游通路为切入点，观察针刺水沟、百会、内关、合谷、足三里穴位后蛛网膜下腔出血小鼠的神经功能、组织... 展开目的：本研究旨在探究针刺对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤的作用及机制。研究利用线穿法制备蛛网膜下腔出血动物模型，以CARD9蛋白及其下游通路为切入点，观察针刺水沟、百会、内关、合谷、足三里穴位后蛛网膜下腔出血小鼠的神经功能、组织病理以及早期脑损伤相关炎症因子和血脑屏障通透性的改变，进而探究针刺减轻蛛网膜下腔出血后早期脑损伤和保护血脑屏障的作用机制，为临床应用针刺治疗蛛网膜下腔出血后早期脑损伤提供实验依据。材料与方法：本研究所使用的共412只C57BL/6J小鼠全部于12h光照/12h无光照的循环环境中饲养，在论文一中选用62只，随机按实验内容分为Sham组，SAH组，SAH+AC组。SAH组采用线穿法准备蛛网膜下腔出血小鼠模型，SAH+AC组给予针刺干预。论文二使用150只小鼠，小鼠随机分组和干预方法同论文一。论文三使用共200只小鼠，随机分为Sham组，SAH+NS组，SAH+AC+NS组，SAH+AC+CARD9组，SAH+AC+CARD9siRNA组。通过侧脑室注射的方式给予溶剂、CARD9重组蛋白和CARD9小干扰RNA。伦理委员会通过了所有实验流程和实验方案。论文一 CARD9在SAH后的小鼠脑中表达时间高峰及针刺之后的变化 1.评估SAH后CARD9在时间进程和细胞位置上的蛋白表达差异。42只小鼠随机分为7组(n=6)：Sham组，SAH3小时组，SAH6小时组，SAH12小时组，SAH24小时组，SAH48小时组和SAH72小时组。并通过Westernblotting(WB)检测半球皮层中CARD9的表达情况。 2.针灸穴位选取：水沟、百会、内关、合谷、足三里五个穴位。通过动物穴位转化明确对应位置，之后并分别于造模后将小鼠每日固定于固定器上0小时，12小时，24小时，36小时，48小时用针灸针刺小鼠，平补平泻，留针20min，每10min捻转1次。转化后选穴位置如下：水沟：鼻尖下正中处，直刺或向上斜刺1mm；百会：头骨正中，向后刺1mm；内关：前肢内侧，腕关节上方0.3mm处的桡、尺骨之间，直刺1-2mm；合谷：前肢第一、二掌骨之间，直接刺1mm；足三里：膝关节下方，腓骨小头下0.3mm肌沟中直接刺3mm。 3.选取30只C57B6J成年小鼠被随机分成3组：Sham组，SAH组，SAH+AC组，其中每组成功6只即可，总数为18只，各组分别给予上述刺激及时间点，WB检测CARD9蛋白的表达量。论文二针刺调节炎症反应对小鼠SAH后早期脑损伤的作用第一部分针刺对小鼠SAH后早期脑损伤及神经功能的改善作用研究第二部分针刺对小鼠SAH后早期脑损伤中炎症的抑制作用研究论文三针刺调节CARD9表达抑制炎症对小鼠SAH后早期BBB损伤的作用及信号通路研究 1.侧脑室注射有效剂量CARD9重组蛋白和CARD9siRNA。200只成年C57B6J小鼠被随机分成5组：Sham(n=12)，SAH+NS(2μLDMSO与生理盐水按1:9比例混合)，(n=12)，SAH+AC+NS(针刺时间同论文一，n=12，SAH+AC+CARD9重组蛋白(n=12)，SAH+AC+CARD9siRNA(n=12)。此外，在SAH后48小时进行Evansblue通透性评估对血脑屏障损伤进行分析。同时在SAH后针刺48小时采用免疫染色法检测皮层内皮细胞的连续性(n=3)。 2.采用WB和PCR从基因及蛋白层面上检测CARD9表达情况，为了探究BBB破坏的作用机制，采用免疫荧光分别检测NLRP3和CARD9在给予CARD9重组蛋白和CARD9siRNA之后的表达量。 3.为了探明CARD9抑制SAH炎症反应修复BBB损伤的信号通路，使用WB检测NLRP3、GSDMD-G、GSDMD-N、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β。ELISA检测IL-1β、IL-18、TNF-a、IL-6。 4.血脑屏障通透性检测，取50只小鼠，分为Sham，SAH+NS，SAH+AC+NS，SAH+AC+CARD9，SAH+AC+CARD9siRNA五组，小鼠注射依文思蓝后，通过将测得数值代入公式中计算样本依文思蓝含量(Evansblue)评估血脑屏障通透性。 5.针刺后给予CARD9抑制剂和重组蛋白后免疫荧光共标检测collageniv、lectin。判断血脑屏障的损伤情况，查看血管内皮的断裂程度是否减轻，探讨调节CARD9表达对小鼠SAH后早期血脑屏障损伤的作用。结果：论文一 CARD9在SAH后的小鼠脑中表达时间高峰及针刺之后的变化 1.CARD9蛋白的表达量在造模的3h、6h、12h、24h、48h和72h组显著增加。同时在蛛网膜下腔出血后48小时左右达到表达高峰。 2.在蛛网膜下腔出血48h后CARD9蛋白表达明显增加，给予在造模后0小时，12小时，24小时，36小时，48小时用针灸针针刺刺激小鼠水沟、百会、内关、合谷、足三里五个穴位20min后，CARD9蛋白表达明显降低(P＜0.05)。论文二针刺调节炎症反应对小鼠SAH后早期脑损伤的作用第一部分：针刺对小鼠SAH后早期脑损伤及神经功能的改善作用研究第二部分：针刺对小鼠SAH后早期脑损伤中炎症的抑制作用研究论文三针刺调节CARD9表达抑制炎症对小鼠SAH后早期BBB损伤的作用及信号通路研究 1.WB及PCR检测结果显示CARD9siRNA可以有效的抑制SAH后CARD9的表达,注射重组蛋白的CARD950ng/Μlke提高CARD9的表达。 2.免疫荧光检测NLRP3和CARD9，提示在CARD9表达增加后，NLRP3表达明显增加，在CARD9表达减少时其表达减少。同时针刺治疗后NLRP3表达明显减低，荧光分析后有统计学差异：SAH+NS组中CARD9的表达高于Sham组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9组的表达高于SAH+AC+NS组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9siRNA组低于SAH+AC+NS组(P＜0.05)。同时SAH+NS组中NLRP3的表达高于Sham组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9组的表达高于SAH+AC+NS组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9siRNA组低于SAH+AC+NS组(P＜0.05)。 3.用WB检测NLRP3、GSDMD-G、GSDMD-N、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β、NF-κB蛋白在各种干预因素下的表达情况。 4.通过ELISA定量检测IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6蛋白含量。SAH+NS组的表达高于Sham组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9组的表达高于SAH+AC+NS组(P＜0.05)，SAH+AC+CARD9siRNA组低于SAH+AC+NS组(P＜0.05)，SAH+NS组的表达均高于Sham组(P＜0.05)；SAH+AC+NS组低于SAH+NS组(P＜0.05)。 5.伊文思蓝(Evansblue)含量彻定结果，SAH+NS组的血脑屏障通透性明显高于Sham组(P＜0.05)，SAH+AC+NS组低于SAH+NS组(P＜0.05)且SAH+AC+CARD9组通透性高于SAH+AC+NS组(P＜0.05)而SAH+AC+CARD9siRNA组低SAH+AC+NS组(P＜0.05)。 6.通过免疫荧光共标检测collageniv和lectin。在Sham组血管内皮完整，在SAH后标记染色显示内皮细胞和紧密连接蛋白的完整性破坏，针刺干预之后内皮的连续性增强，断裂程度和断裂数量明显减少。结论： 1.在小鼠SAH后脑组织中CARD9蛋白在48h为表达高峰。 2.针刺水沟、百会、内关、合谷、足三里可降低SAH后小鼠脑中CARD9蛋白的表达进而对小鼠SAH后早期脑损伤中炎症起到抑制作用。 3.针刺可减轻SAH小鼠脑组织水肿，减少脑组织细胞凋亡和血管内皮损伤，并降低小鼠SAH后血脑屏障的通透性进而改善神经功能。 4.CARD9可通过增强NF-κB和NLRP3的表达，同时激活caspase-1和IL-1β等下游炎症因子造成血脑屏障损伤。 5.针刺水沟、百会、内关、合谷、足三里可减轻小鼠SAH后早期脑损伤，同时CARD9可能是保护SAH后血脑屏障的潜在靶点。收起

关键词 : 蛛网膜下腔出血早期脑损伤针刺疗法 CARD9蛋白蛋白表达

8. HIF-1 α通路参与“养血益心”针刺调控抑郁症合并冠心病大鼠机制研究

[学位论文] 马原辽宁中医药大学 2022年博士导师: 任路共230页

摘要 : 目的：抑郁症属于情感精神障碍疾病，临床表现以情绪低落、精神迟滞为核心症状，伴有记忆力减退等认知症状，以及食欲不佳、疲劳乏力等躯体症状，具有高复发率。临床上抑郁症与冠心病可互为因果、相互影响，抑郁症合并冠心病属于“双心病”的范畴，是... 展开目的：抑郁症属于情感精神障碍疾病，临床表现以情绪低落、精神迟滞为核心症状，伴有记忆力减退等认知症状，以及食欲不佳、疲劳乏力等躯体症状，具有高复发率。临床上抑郁症与冠心病可互为因果、相互影响，抑郁症合并冠心病属于“双心病”的范畴，是双心医学中常见病与多发病，本研究以中医理论“心脑相关”为基础，“气血相关”为纲纪，认识“双心病”(即抑郁症合并冠心病)发病机理及“养血益心”针刺疗法治疗作用；并开展体内实验验证“养血益心”针刺疗法对“双心病”的作用疗效，主要选择以缺氧、血管新生、神经营养因子等可能映射中医“气、血”的分子指标来探究心脑间各因子间的相关性及该疗法调控影响；以及基于缺氧诱导因子(Hypoxiainduciblefactor1α,HIF-1α)信号通路揭示“养血益心”针刺疗法治疗双心病大鼠的可能作用机制，旨在为“双心病”的防治及中医“心脑相关”、“气血相关”理论体系寻求现代科学证据支持。材料与方法： 1.论文一：梳理古今中外双心病相关文献，综合分析“双心病”(即抑郁症合并冠心病)的发病机理及“养血益心”针刺疗法治疗作用。 2.论文二：“养血益心”针刺疗法对双心病模型大鼠心功能与抑郁状态的作用研究。构建双心病模型大鼠，将60只雄性SD大鼠随机分为五组：空白组、模型组、针刺组、中药组、西药组，每组12只。空白组与模型组采用同针刺组相同时间，相同强度的抓取及捆绑固定，除空白组外，模型组、针刺组、中药组、西药组的大鼠均采用慢性不可预知温和刺激(Chronicunpredictablemildstress,CUMS)进行抑郁症大鼠模型造模，对抑郁模型造模成功的大鼠进行冠心病模型造模，制备冠心病模型采用一次性多点位(双腹股沟区)注射盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)溶液，随机选取两只进行模型评价，将双心病模型造模成功的大鼠，除模型组外，分针刺组、中药组、西药组进行干预治疗，针刺组穴位为每日针刺“百会”、“内关”、“足三里”、“三阴交”、“太冲”五穴，采用疏密波，频率2-20HZ，电流2-3mA，电流强度以大鼠前后肢出现与电针频率相一致的轻微颤动为宜，留针15min，连续21天。西药组采用舍曲林组每日8时2mg·100g-1·d-1剂量灌服，连续21天。中药组采用“双心病”经验方，每日8时按2mg·100g-1·d-1剂量灌服中药煎剂，连续21天。模型组每日8时灌服等体积生理盐水，连续21天，应用糖水偏嗜实验(Sucrosepreferencetest,SCT)、强迫游泳实验(Forcedswimmingtest,FST)、旷场实验(Openfieldtest,OFT)观察各组大鼠的行为学及运动模式变化。运用苏木精伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE)观察心肌细胞形态学变化；酶联免疫法(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,Elisa)检测血浆精氨酸加压素(ArginineVasopressin,AVP)、心钠素(Atrialnatriureticpeptide,ANP)的表达水平；采用Elisa法检测心肌组织血管紧张素(AngiotensinⅡ,ANGⅡ)、B型钠尿肽(Brainnatriureticpeptide,BNP)的表达水平、运用HE染色法观察海马神经元形态学变化；检测心电图ST段变化。蛋白质免疫印迹(Westernblot,WB)检测海马脑源性神经营养因子(Brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)、神经生长因子(Nervegrowthfactor,NGF)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(Dopamine,DA)含量；免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测海马BDNF、NGF；逆转录聚合酶链式反应(ReverseTranscription-PolymeraseChain,RT-PCR)检测海马BDNFmRNA表达水平。 3.论文三：“养血益心”针刺疗法对双心病大鼠“气血失调，心脑失通”相关指标的作用研究。构建双心病模型大鼠，造模及干预方法同论文二。检测血清凝血因子(CoagulationFactor,Ⅷ)、血小板-内皮细胞粘附分子(Plateletendothelialcelladhesionmolecule-1,PECAM-1/CD31)、CD34含量、IHC与WB法检测心肌、血清以及海马中细胞HIF-1α水平。 4.论文四：基于HIF-1α信号通路探究养血益心法针刺疗法对双心病大鼠的作用机制。构建双心病模型大鼠，造模及干预方法同论文二。IHC与WB法检测心肌以及海马中胞内磷脂酰肌醇激酶(Phosphoinositide3-Kinase,PI3K)、丝氨酸／苏氨酸激酶激酶(serine／threonine-proteinkinase,AKT)、HIF-1α、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达水平；Elisa法检测心肌、血清以及海马中PI3K、AKT蛋白总量、HIF-1α、VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGF-Receptor2,VEGFR-2)水平。结果： 1.论文一：从中医“双心病”的形成和发展、中医“双心病”的发病机理认识、“气血调和、心脑互通”对“双心病”治疗的重要性、基于“心脑相关、气血相关”理论“养血益心”针刺疗法对“双心病”的有效性四个方面论证了“双心病”的病机与“养血益心”针刺疗法的可行性。 2.论文二：成功复制双心病大鼠模型；SCT检测结果显示，经过治疗后，与模型组比较，针刺组大鼠糖水偏爱指数显著上升(P＜0.01)；OFT结果显示与模型组比较，针刺组总运动格子数、站立次数、水平穿越格子均呈现增加(P＜0.01)，以水平穿越格子次数增加最显著(P＜0.01)；提示“养血益心”针刺疗法能有效改善双心病模型大鼠抑郁状态。各组大鼠心肌AVP、ANP检测结果显示：与空白组比较，模型组AVP、ANP表达水平升高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与模型组比较，针刺组、中药组、西药组AVP、ANP表达水平降低(P＜0.01)，差异有统计学意义，提示“养血益心”针刺对心功能具有改善作用。各组大鼠血管紧张素(ANGⅡ)、B型钠尿肽(BNP)检测结果显示：与空白组比较，模型组ANGⅡ、BNP表达水平升高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与模型组比较，针刺组、中药组、西药组ANGⅡ、BNP表达水平降低(P＜0.01)，针刺组尤以BNP降低最为显著，差异有统计学意义，提示“养血益心”针刺疗法、中药及西药可以有效改善双心病模型大鼠的心肌缺氧、血管紧张状态。与模型组相比，针刺组大鼠海马区BDNF、NGF、5-HT、DA表达高于模型组(P＜0.05)，IHC与WB结果显示与Elisa检测结果一致，提示“养血益心”针刺疗法对脑有保护作用，同时提示“养血益心”针刺疗法可能是影响BDNF在海马神经元内表达的重要影响因素。 3.论文三：与模型组比较，针刺组、中药组和西药组的大鼠血清中Ⅷ、CD31、CD34含量显著升高(P＜0.01)，差异有统计学意义；提示“养血益心”针刺法对大鼠心功能的改善可能是通过增强“气血失调，心脑失通”相关的指标表达实现的，与模型组比较，“养血益心”针刺疗法可以提高心肌、海马、血清中HIF-1α水平，提示“养血益心”针刺疗法对心缺氧状态的改善可能是通过氧感受器HIF-1α调控实现的，同时提示“养血益心”针刺疗法对“气血失调，心脑失通”相关指标BDNF、NGF、5-HT、DA等脑源性营养因子与神经递质的表达的影响，与氧感受器HIF-1α的表达密切相关。 4.论文四：与模型组相比，针刺组、中药组与西药组可调控PI3K/AKT表达，提高心肌、海马、血清中HIF-1α水平，上调VEGF、VEGFR-2水平(P＜0.01；P＜0.05)，提示PI3K/AKT/HIF-1α可能是“养血益心”针刺疗法调控“气血失调，心脑失通”相关的指标，从而改善双心病模型大鼠抑郁状态与改善心功能，治疗双心病的潜在深层作用机制。结论： 1.“心脑失调，气血失和”为“双心病”的基本病机，当以“心脑互通、气血调和”为治疗原则以达身心同调。 2.结合经穴-经脉-脏腑相关性原理的“养血益心”针刺疗法能改善双心病模型大鼠心功能、抑郁行为及保护脑组织损伤。 3.基于氧感受器的功能接近“气”的功能生物学实质，CD31、CD34相关指标接近于“血”的功能生物学实质，得出“养血益心”针刺疗法可能是通过调节氧感受器HIF-1α、血管新生指标VEGF以及Ⅷ、CD31、CD34实现“心主神明”功能的恢复的结论。 4.HIF-1α起中间介导作用，引起级联反应，“养血益心”针刺疗法深层作用机制可能是通过PI3K/AKT/HIF-1α信号通路发挥行气活血的功能，从而实现心脑互通。收起

关键词 : 抑郁症冠心病 HIF-1 &alpha 通路养血益心针刺动物实验

9. 牛蒡子生态适宜性及质量规范化研究

[学位论文] 许亮辽宁中医药大学 2010年博士导师: 康廷国;窦德强共222页

摘要 : 目的：本论文是国家科技部“十一五”攻关项目“中药资源可持续利用与产业共性技术研究”之子课题“牛蒡子生态适宜性分析技术研究及适宜生产区区划”（子课题编号：2006BAI09802-6）和《中国药典》2010版一部质量标准研究之子课题“牛蒡子及炒制牛蒡... 展开目的：本论文是国家科技部“十一五”攻关项目“中药资源可持续利用与产业共性技术研究”之子课题“牛蒡子生态适宜性分析技术研究及适宜生产区区划”（子课题编号：2006BAI09802-6）和《中国药典》2010版一部质量标准研究之子课题“牛蒡子及炒制牛蒡子的质量标准修订”（子课题编号：YD101，YD102）的主要内容，同时也是国家科技部基础平台项目“药用植物种质资源标准化整理、整合及共享试点”之子课题“牛蒡种质资源标准化整理、整合及共享试点”（项目编号：2005DKA21004）的部分内容。本研究包括牛蒡子资源调查、产地生态因子分析、药材品质评价、生态适宜性与TCMGIS产区区划分析、牛蒡子和炒牛蒡子质量标准修订等五方面，为牛蒡子优良品种的培育、规范化栽培、质量评价等提供参考。方法与结果：按统一规范标准实地进行牛蒡子资源调查与样品采集，使用GPS仪对经度、纬度进行测定，并记录相关信息，对收集的牛蒡种质资源进行保存，置于国家药用植物种质资源库，并进行网络共享平台“中国药用植物种质资源信息共享系统”中牛蒡相关内容的建设。依据经度、纬度坐标在TCMGIS系统数据库中获取湿度、日照、年降水量等生态因子。采用各行业标准对牛蒡子土壤样品进行多指标测定分析，对牛蒡根际土壤微生物、牛蒡内生菌进行初步分析研究。对牛蒡种质进行发芽率、千粒重、染色体数目、染色体核型、ITS序列等多指标的分析，对牛蒡子药材进行HPLC法测定指标性成分牛蒡苷含量等质量评价，通过灰色关联分析对其进行质量排序，探讨种质和生态等不同因素对牛蒡子药材质量的影响。通过统计分析对牛蒡子生态适宜性进行研究，结合实际调查与生态适宜性的分析结果，采用TCMGIS系统进行牛蒡子药材生产区区划，并且制定了关大力规范化栽培技术草案，对2005版药典中牛蒡子的质量标准进行修订，制定了牛蒡子和炒牛蒡子的质量标准，并为2010版药典所收录。结论：对12个省51个地区的牛蒡资源进行了调查，发现牛蒡子药材以野生获得为主，有少量栽培，市场价格较低，在野生资源中，分布在东北的“关大力”蕴藏量最大。牛蒡的根作为保健蔬菜在山东、江苏等省有大量栽培，出口到日本、韩国、东南亚等地。浙江桐乡产者称为“杜大力”，文献记载质量佳，在调查中我们发现该地区经济高速发展，原来曾大量栽培，但由于价格低现已不再生产了。牛蒡根际土壤真菌分布其常见类群主要有木霉、镰刀菌、青霉、毛霉等。水培实验发现，对牛蒡致害的镰刀菌F130和F131毒性作用最为明显，结合形态学特征和ITS序列分析，鉴定F130和F131均为Fusarium solani。镰刀菌F131接种48天后使牛蒡幼苗发病，镰刀菌数可达5.8×104cfu/g，通过生物防治实验发现，海洋枯草芽胞杆菌3512A能够在牛蒡根际有效定殖并有效抑制镰刀菌F131，降低发病率。从牛蒡的根、茎、叶、总苞、果实中分离纯化了57株内生菌。以牛蒡子干粉为底物，采用高效液相色谱法测定转化培养液中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量，筛选得到6株转化牛蒡苷的内生菌。其中L2的转化率最高，可达76.9％。利用HPLC-MS等方法对其转化产物牛蒡苷元进行了验证。L2经过形态观察、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析，鉴定为氧化微杆菌Microbacterium oxydans。对牛蒡子千粒重、粒数百分比、重量百分比、发芽势、发芽率等进行测定比较，东北产的“关大力”质量好。细胞学研究发现不同产地牛蒡体细胞染色体数目为2n=36。其伪品新疆产毛头牛蒡体细胞染色体数目为2n=36，新疆产大翅蓟体细胞染色体数目2n=34，大连产紫穗槐体细胞染色体数目为2n=410，沈阳产水飞蓟体细胞染色体数目为2n=36。中国牛蒡属植物有牛蒡与毛头牛蒡两种，其染色体核型均为“2B”型。牛蒡染色体相对长度组成为2n=36=6L+6M2+16M1+8S，核型公式是K（2n）=2X=36=18m+18sm。毛头牛蒡染色体相对长度组成为2n=36=6L+4M2+20M1+6S，核型公式是K（2n）=2X=36=20m+16sm。毛头牛蒡的核型不对称系数为62.01，比牛蒡的62.62略小。毛头牛蒡染色体总长和长臂总长比牛蒡略大，而染色体体积比牛蒡的大5.03μm3，毛头牛蒡18对染色体中m型有10对，占55.56％，sm型有8对，占44.44％，而牛蒡18对染色体中m型有9对，占50％，sm型有9对占50％。分子生物学研究，成功扩增并测定26个产地牛蒡ITS序列，其序列有14个位点具多样性，通过建立系统树26份样品被分成两组，以此牛蒡可分为两种基因型，经过SPSS13.0统计分析，在0.05显著水平下，两种基因型的牛蒡子药材中牛蒡苷含量具有显著性差异。并对牛蒡的伪品10个样品进行ITS序列测定，通过分析比较，系统树重建聚类，能够有效的进行真伪鉴定，ITS序列可以作为标准序列进行中药牛蒡子的分子鉴别。采用HPLC法对不同产地的牛蒡子进行牛蒡苷和苷元的含量测定，测定千粒重、发现东北产的“关大力”质量好，牛蒡苷含量高。灰色关联分析，表明产于吉林梅河口的牛蒡子药材样品质量最好。“关大力”资源最丰富，质量评价最好，为牛蒡子中的道地药材。牛蒡子药材质量相关性分析，牛蒡子千粒重和牛蒡苷含量在0.01水平下呈极显著正相关（r=0.774**），说明传统的牛蒡子评价标准与指标性成分的含量评价相符，牛蒡根际土壤、牛蒡营养器官、牛蒡子药材中12种元素的相关分析，在0.05水平下牛蒡子药材与牛蒡营养器官中Mg元素含量呈显著正相关（r=0.419*），药材中的Mg元素含量比根际土壤中的Mg元素含量高，且具有显著性，牛蒡子药材中Mg元素平均值为7553.59ug/g，根际土壤中Mg元素平均值为5923.60ug/g，说明牛蒡子有从土壤中富积Mg元素的作用。在0.05水平下牛蒡子药材与牛蒡营养器官中Ca元素含量呈显著正相关（r=0.446*）。在0.05水平下根际土壤与营养器官中Fe元素含量呈显著正相关（r=0.407*）。在0.05水平下根际土壤与牛蒡子药材中Pb元素含量呈显著正相关（r=0.476*）。在牛蒡根际土壤、牛蒡营养器官、牛蒡子药材中Na、Cu、Zn、As、Cd、Hg、Mn、K等元素的含量无相关性。 “诸药所生，皆有其境”。经统计分析，影响牛蒡子药材质量的主导生态因子为年降水量、7月最高温和7月平均温。“关大力”品质评价以吉林省梅河口市和辽宁省岫岩县样品为佳，其生态适宜性主导因子范围是年降水量：724～755mm；7月最高温：26.9～27.0℃；7月平均温：22.3～22.9℃。全国范围内牛蒡子生态适宜主导因子范围是年降水量：700～800mm；7月最高温为：25.1～28.0℃；7月平均温为：21.1～24.0℃。中药材产地适宜性分析地理信息系统（TCMGIS）是我国首次开发的以基础地理信息、气候、土壤数据库及第3次全国中药资源普查数据库为后台支撑的快速分析系统。对牛蒡子药材适宜产区区划进行分析，包括全国范围取样的牛蒡子药材适宜区分析、“关大力”药材适宜区分析、“川大力”药材适宜区分析，经过加权和非加权两种方法进行数据运算，经过比较认为经加权的分析结果更为理想。生态适宜性分析及生产区区划以科学理论和方法指导中药材种植地的选择，是中药材资源可持续生产和引种栽培的基础，对于保证中药材的质量以及实现规模化、特色化、品牌化具有十分重要的意义。但中药材的生产也受到经济因素、人为因素、历史因素等的影响，“杜大力”主产区为浙江桐乡，该地区历史上有较大规模的栽培，通过资源调查，现今没有“杜大力”商品药材了。经TCMGIS分析得到的适宜生产区还要和当地的经济、文化、历史等多方面因素结合，制定更好的适宜中药材产区区划。按我国中药材GAP要求，制定了辽宁产的“关大力”规范化栽培技术草案。对牛蒡子和炒牛蒡子进行了质里规范化研究，对2005版药典中牛蒡子项下内容进行修订，增加了炒牛蒡子项，牛蒡子药材水分测定项、灰分测定项、以干品计算牛蒡苷的含量测定项等，并己被2010版药典所收录。收起

关键词 : 牛蒡子生态适宜性质量评价生产区区划

10. 基于肠道菌群及其代谢改变探讨针刺APP/PS1小鼠干预阿尔茨海默病的机理

[学位论文] 杨波辽宁中医药大学 2022年博士导师: 成泽东共217页

摘要 : 目的：研究“补肾健脾，填精益髓”针法对APP/PS1双转基因小鼠（经典阿尔茨海默病模型）学习记忆能力以及对小鼠脑海马Aβ、Tau蛋白表达和形态损伤的干预作用；进一步从炎症因子IL-1β、IL-10、TNF-α和LPS表达以及肠道菌群及代谢改变探讨针刺改善阿尔... 展开目的：研究“补肾健脾，填精益髓”针法对APP/PS1双转基因小鼠（经典阿尔茨海默病模型）学习记忆能力以及对小鼠脑海马Aβ、Tau蛋白表达和形态损伤的干预作用；进一步从炎症因子IL-1β、IL-10、TNF-α和LPS表达以及肠道菌群及代谢改变探讨针刺改善阿尔茨海默病（Alzheimer''sdisease，AD）的机理，为针灸干预AD的理论研究和临床应用提供依据。材料与方法： 1.针灸治疗AD的临床选穴规律总结文献检索近八年来在CNKI、PubMed中发表的有关针灸治疗阿尔茨海默病的临床文献，检索范围为2013年1月1日-2021年1月1日。运用“中医传承辅助平台”软件和SPSS20.0统计学软件对数据进行分析，总结针灸治疗AD的临床选穴规律并探讨基于脑肠轴理论运用“补肾健脾，填精益髓”针法治疗AD的取穴处方。 2.基于肠道菌群及其代谢改变探讨针刺APP/PS1小鼠干预阿尔茨海默病的机理 2.1材料选择APP/PS1双转基因小鼠24只，随机分为针刺治疗组8只，模型对照组8只，阳性药对照组8只，同期相同条件下饲养C57BL/6野生小鼠6只作为正常对照组，共4组。 2.2方法 2.2.1各组干预方法正常对照组：同等饲养条件下不做任何处理，但在其他各组进行干预时抓取一次，并用自制鼠板固定，以保证干预条件相同，每日1次，每次20min，共治疗4周，每周干预5日，休息2日。AD模型组干预方法同正常对照组。阳性药对照组：盐酸美金刚片按20mg/kg剂量灌胃给药，每日1次，共治疗4周，每周干预5日，休息2日。针刺治疗组：选取小鼠头部百会穴，背部的肺俞、脾俞、肾俞，上肢部的合谷、下肢部的足三里和三阴交进行治疗，20min/次，每日1次，针刺5日，休息2日，治疗4周。 2.2.2Morris水迷宫实验（MWM）水迷宫实验分为两部分，分别是隐藏平台训练实验和空间探索实验，一共需要5天。在本研究中，首先进行4天的水迷宫隐藏平台训练实验。然后第五天进行空间探索实验，实验1天。最终整理数据评估针刺对AD小鼠空间学习和记忆能力的影响。 2.2.3检测指标及方法于水迷宫实验后取小鼠脑组织、血清、肠内容物置于-80℃冰箱保存备检。 2.2.3.1海马区病理切片制备采用苏木精-伊红（HE）染色制作小鼠脑海马区组织病理切片。 2.2.3.2小鼠海马区β淀粉样蛋白（Aβ）和Tau蛋白检测采用免疫印迹（Westernblot，WB）依次检测分析海马区Aβ和Tau蛋白表达，以β-actin为内参。依次进行组织蛋白提取、样品制备、电泳、分析。 2.2.3.3小鼠血清炎症因子水平检测采用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，ELISA），按照试剂盒步骤检测小鼠炎症因子白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）、肿瘤坏死因子（TumorNecrosisFactor，TNF-α）和脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）水平。 2.2.3.4小鼠肠内容物微生物表达检测采用QIAampFastDNAStoolMiniKit试剂盒对肠内容物样本进行总DNA抽提和质控，之后用16SrDNA基因组学技术检测小鼠肠内容物中的肠道菌群表达，分析α多样性、β多样性、组间菌群表达差异；使用PICRUSt2分析工具，对其物种功能进行预测和分析；基于Spearman相关性分析肠道菌群与炎症因子的相关性。 2.2.3.5小鼠粪便代谢物分析通过液相色谱和质谱联用对小鼠的代谢产物进行了非靶向研究。使用MetaboAnalyst5.0在线分析工具筛选并分析差异代谢物及代谢通路，基于Spearman相关性分析肠道菌群与重要通路上代谢物的相关性。 2.3统计方法：结果应用SPSS20.0统计学软件进行分析。结果： 1.针灸临床治疗AD的取穴规律近八年来临床上应用针灸临床治疗AD使用频次最多的腧穴依次为百会、风府、大椎等；取穴所属经脉主要集中于督脉和足太阳膀胱经；取穴部位集中于头颈部；选取的特定穴集中于交会穴和五输穴；穴位配伍中以百会配大椎最为常用。 2.“补肾健脾，填精益髓”针法可能改善了APP/PS1小鼠的学习记忆能力 2.1“补肾健脾，填精益髓”针法可能改善了APP/PS1小鼠空间学习能力前四天进行水迷宫隐藏平台实验，观察“补肾健脾，填精益髓”针法对APP/PS1小鼠空间学习能力的影响。在训练第一天，各组小鼠都较难找到平台，但在第四天，它们基本都能够很快找到平台，路径也越来越短；正常对照组和针刺治疗组小鼠到达平台的路径最短，模型组小鼠到达平台的路径最长、最复杂。各组小鼠的逃避潜伏期随着训练时间的增加而减小。而且，在训练第3天显著缩短，在训练的第三天和第四天，针刺组小鼠对平台的逃避潜伏期与正常对照组最接近。各组找到目标象限平台的距离随着训练次数的增多而逐渐减小，但寻找平台的平均速度没有明显变化。 2.2“补肾健脾，填精益髓”针法可能改善了APP/PS1小鼠空间记忆能力第五天进行水迷宫空间探索实验，观察“补肾健脾，填精益髓”针法对APP/PS1小鼠空间记忆能力的影响。在经过了四天的训练后，小鼠基本能够快速地找到目标象限，模型组逃避潜伏期最长，高于正常对照组（P＜0.05），差异具有统计学意义；针刺组的逃避潜伏期与模型组和正常对照组差异无统计学意义，但针刺组的逃避潜伏期更接近正常对照组。小鼠游泳的平均速度、通过目标象限的频率、在目标象限游泳时间百分比、路程百分比均与逃避潜伏期的结果相似。针刺组的上述指标与模型组相比更接近正常对照组和阳性药对照组。 3.“补肾健脾，填精益髓”针法可能改善了APP/PS1小鼠脑海马区的病理损伤及Aβ和Tau蛋白表达 3.1“补肾健脾，填精益髓”针法能够减轻APP/PS1小鼠脑海马区的病理损伤正常对照组海马区组织完好，神经元细胞体积较大，排列比较整齐，结构清晰，细胞质着色较浅且均匀；与正常对照组相比，APP/PS1小鼠神经元数量较少，体积变小，结构稀疏、不规则，神经元大量坏死和损伤，部分空泡变性；与模型组比较，针刺治疗组海马区的神经元细胞数量增多，而且结构较为紧密，病理改变水平较低，细胞排列紊乱、变性等病理损伤有所减轻。 3.2“补肾健脾，填精益髓”针法能够调节APP/PS1小鼠脑海马区Aβ和Tau蛋白的表达 WB分析显示，与正常对照组比较，模型组小鼠脑海马组织中Aβ蛋白表达明显增加（P＜0.01），“补肾健脾，填精益髓”针法治疗可降低Aβ蛋白表达（P＜0.05）。与正常对照组比较，模型组小鼠海马组织中Tau蛋白表达增加（P＜0.05），针刺后，海马区Tau蛋白表达较模型组降低，虽无显著性差异，但针刺对Tau蛋白的调整与正常对照组具有相同趋势。针刺组对Aβ和Tau蛋白表达的治疗作用与正常对照组相似。 4.“补肾健脾，填精益髓”针法可能改善APP/PS1小鼠血清炎症因子水平 ELISA分析结果显示，与正常对照组比较，模型组小鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-10和LPS表达增强，LPS表达具有显著性差异（P＜0.01）。与模型组比较，阳性药对照组和针刺治疗组均能显著降低小鼠血清IL-10（P＜0.01），阳性药对照组能显著降低小鼠血清LPS（P＜0.01）水平，针刺治疗组能降低小鼠血清LPS（P＜0.05）水平。但各组间IL-1β和TNF-α含量无显著差异。 5.“补肾健脾，填精益髓”针法能够改善APP/PS1小鼠肠道菌群多样性及结构组成 5.1α多样性 Shannon指数显示，与正常对照组相比，模型组小鼠的Shannon指数下降，表明肠道菌群多样性较低，“补肾健脾，填精益髓”针法提高了Shannon指数，增加了肠道菌群多样性趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。Simpson指数显示，与正常对照组相比，模型组小鼠的Simpson指数上升，表明肠道菌群多样性较低，“补肾健脾，填精益髓”针法降低了Simpson指数，增加了肠道菌群多样性趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。 5.2β多样性 PCA和PCoA分析结果显示：与模型组比较，针刺治疗组PCA和PCoA评分接近正常对照组。 5.3正常对照组、模型组与针刺治疗组小鼠肠道菌群的比较三组在门、纲、目、科、属各水平比较后具有显著性差异的菌群有35种，“补肾健脾，填精益髓”针法治疗后，小鼠的肠道菌群在门纲目科属等各水平上的变化显示了回调作用的27种（占77.14%），其中具有显著性回调作用的有14种（占51.85%），分别是放线菌门（Actinobacteria）、梭菌纲（Clostridia）、梭菌目（Clostridiales）、理研菌科（Rikenellaceae）、普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、拟杆菌科（Bacteroidaceae）、紫单胞菌科（Porphyromonadaceae）、梭菌科（Clostridiaceae_1）、普氏菌属（Prevotella）、拟杆菌属（Bacteroides）、拟普雷沃氏菌属（Alloprevotella）、艾森伯格属（Eisenbergiella）、Alistipes、颤螺菌属（Oscillibacter）；具有回调趋势的有13种（占48.15%），分别是放线菌纲（Actinobacteria）、红蝽菌目（Coriobacteriales）、蛭弧菌目（Bdellovibrionales）、脱硫弧菌目（Desulfovibrionales）、瘤胃菌科（Ruminococcaceae）、蛭弧菌科（Bdellovibrionaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）、红蝽菌科（Coriobacteriaceae）、脱硫弧菌科（Desulfovibrionaceae）、吸血弧菌属（Vampirovibrio）、Intestinimonas、厌氧杆菌属（Anaerobacterium）、肠杆菌属（Enterorhabdus）。 5.4小鼠肠道菌群代谢功能预测三组间有103条代谢途径发生显著变化，其中有6条代谢通路与代谢组学检测中出现的差异代谢通路一致，分别是：嘧啶代谢（Pyrimidinemetabolism）；苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的生物合成（Phenylalanine，tyrosineandtryptophanbiosynthesis）；亚油酸代谢（Linoleicacidmetabolism）；D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢（D-GlutamineandD-glutamatemetabolism）；牛磺酸和亚牛磺酸代谢（Taurineandhypotaurinemetabolism）；苯丙氨酸代谢（Phenylalaninemetabolism）。正常对照组和模型组间具有差异（P＜0.05）的代谢通路有95条，模型组和针刺治疗组间具有差异（P＜0.05）的代谢通路有8条，其中同时出现的差异代谢通路是4条，分别是：烟酸和烟酰胺代谢（Nicotinateandnicotinamidemetabolism）（P＜0.01）、甲烷代谢（Methanemetabolism）（P＜0.01）、脂肪酸生物合成（Fattyacidbiosynthesis）（P＜0.01）以及磷酸盐和次磷酸盐代谢（Phosphonateandphosphinatemetabolism）（P＜0.01）。其中，针刺增加了烟酸和烟收起

关键词 : 针刺治疗阿尔茨海默病肠道菌群 16SrDNA 代谢组学