中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 雷南行海军军医大学 2020年博士导师: 潘卫庆共95页

摘要 : 本课题首先应用日本血吸虫虫卵构建虫卵肉芽肿肺模型和小鼠转移瘤模型以验证此假说，通过多次从尾静脉注入纯化的日本血吸虫虫卵以构建虫卵肉芽肿肺模型，同时应用小鼠肺腺癌细胞系(LLC)和黑色素瘤细胞系(B16)构建小鼠血液转移瘤模型，使虫卵与肿瘤细... 展开本课题首先应用日本血吸虫虫卵构建虫卵肉芽肿肺模型和小鼠转移瘤模型以验证此假说，通过多次从尾静脉注入纯化的日本血吸虫虫卵以构建虫卵肉芽肿肺模型，同时应用小鼠肺腺癌细胞系(LLC)和黑色素瘤细胞系(B16)构建小鼠血液转移瘤模型，使虫卵与肿瘤细胞在体内进行相互作用，通过大体标本、肿瘤个数、病理切片、肿瘤增殖指标以及生存期等实验指标分析以确定虫卵对转移瘤形成及生长的影响;在此基础上，通过分析肺部免疫细胞组成以及特定免疫细胞的清除等实验确定了对肿瘤发挥抑制作用的组织巨噬细胞，并通过体外功能实验和体内回输实验进一步验证其功能。最后，通过转录组测序、细胞因子拮抗剂等方法鉴定发挥抗肿瘤作用的效应因子。本研究取得了以下结果: 1.日本血吸虫虫卵抑制肺部转移瘤生长:因为肺部肿瘤模型构建周期短、成功率高，故我们首先应用虫卵探索其与肺部肿瘤的关系。将活虫卵(F-egg)、煮沸灭活死虫卵(D-egg)和PBS通过尾静脉分别注入C57BL/6小鼠，虫卵会沉积在肺脏中，引起肺组织的免疫反应，随后注入LLC肿瘤细胞以形成肺脏转移瘤。结果显示，在F-egg组的6只小鼠中，4只无肿瘤形成，另外2只各有1个瘤体，而D-egg对照组肿瘤数目为9.7±5.6个，而PBS组为24.3±6.6个。这样，F-egg组肿瘤数目比D-egg组和PBS组分别减少了96.6％和98.6％(P＜0.001)。同时F-egg显著延长了小鼠的生存时间。80％的F-egg组小鼠（8只）在实验观察期结束（60天）时仍存活，而D-egg组和PBS组小鼠的死亡时间分别在37天和31天以前。 2.活虫卵介导的抗肿瘤作用是不依赖于T、B细胞:观察到虫卵有抑制肿瘤生长的作用后，为了解上述抗肿瘤活性是否依赖T和B细胞，我们采用缺乏成熟T和B细胞的NOD-SCID小鼠进行类似实验。结果显示，在此免疫缺陷小鼠模型中，F-egg组肿瘤数目（1±0.6）比D-egg组（28.5±10.7）和PBS组（38.2±5.1）分别减少96.5％和97.4％(P＜0.001)。在该模型生存期实验中，83.3％ F-gg组小鼠生存至实验观察期结束（60天），而D-egg组和PBS组小鼠分别在肿瘤细胞接种后第50和42天内死亡。该实验结果表明，F-egg介导的抗肿瘤作用并不依赖于T、B细胞。在此基础上，我们采用更具侵袭性的B16/F10黑色素瘤细胞系(B16)进行类似实验。结果显示，在C57小鼠中，虽然F-egg不能有效抑制肺部B16细胞转移瘤的形成;但在NOD-SCID小鼠模型中，F-egg可以显著抑制肺部转移瘤，其肿瘤数目比D-egg组和PBS组分别减少64.1％和65.1％。该结果说明T细胞和B细胞不仅不是活虫卵抗肿瘤作用的效应细胞，反而可能会减弱虫卵的抗肿瘤作用。 3.F-egg介导的抗肿瘤活性对远处器官肿瘤的作用:在B16细胞转移瘤模型中，除了肺部形成转移瘤外，在肝脏中同样能稳定地形成大量肉眼可见的黑色素瘤转移灶。实验步骤同前，通过尾静脉注射的虫卵卡在肺部，无法通过肺血管网，而我们发现沉积在肺部的F-egg可以显著抑制肝脏黑色素细胞转移瘤。在NOD-SCID小鼠模型中，F-egg组肿瘤数目（2±1.4）比PBS(51.5±23.8)和死虫卵对照组(40.5±25.6)分别减少96.1％和95.1％（P＜0.01）。有趣的是，在C57小鼠模型中，F-egg虽然不能抑制肺脏的肿瘤生长，但是其对肝脏的黑色素转移瘤仍有显著的抑制效果。这些结果表明肺部的F-egg对远处肝脏的肿瘤仍然有明显的抑制作用。另外，在日本血吸虫自然感染小鼠模型中，雌虫会产出大量的虫卵，主要沉积在肝脏和肠壁组织。我们应用日本血吸虫尾蚴感染C57小鼠来构建自然感染模型，之后通过尾静脉注射肿瘤细胞，观察虫卵对肺部肿瘤是否同样有抑制作用。结果显示，在LLC和B16肿瘤模型中，未感染小鼠的肺部肿瘤数目分别为8.7±2.6和37.0±9.4，而感染血吸虫小鼠的肺部肿瘤数目分别为0.2±0.4和0.8±1.0。由此可见，与未感染小鼠相比，血吸虫的感染可以使两种肿瘤细胞模型的肺脏转移瘤数目分别减少98.1％和97.7％（P＜0.001）。这些数据表明活的日本血吸虫虫卵可对体内远处器官的肿瘤发挥抑制作用。 4.活虫卵介导抗肿瘤作用的细胞机制:为阐明肺部虫卵介导的抗肿瘤效应的细胞机制，我们分析了肺部及肺泡灌洗液中的免疫细胞组成。结果显示，注入5000个活虫卵和死虫卵的小鼠，其肺部和肺泡灌洗液中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞和B细胞相比于PBS组都有显著改变，但这些细胞在F-egg组和D-egg组间没有显著差异，而F-egg组肺泡巨噬细胞(AM，F4/80+CD11c+Siglec-F+)的数量比D-egg组明显增加。通过免疫组化分析，肺泡巨噬细胞能浸润在肿瘤结节内。此外，在自然感染小鼠模型中肺部的肺泡巨噬细胞也同样升高。这些结果提示肺泡巨噬细胞可能与F-egg介导的抗肿瘤作用相关。随后，我们对F-egg诱导的肺泡巨噬细胞进行功能研究，通过气管滴注氯膦酸二钠脂质体以清除小鼠肺泡巨噬细胞同时不影响其它类型的细胞。结果显示，在使用清除剂以后，肺泡灌洗液中的肺泡巨噬细胞减少了90％。然而，清除了肺泡巨噬细胞的小鼠失去了F-egg介导的抗肿瘤活性，在B16和LLC肿瘤细胞模型中，F-egg组肺转移瘤数目分别为43.5±12.3和27.3±10.0个，与对照组的肿瘤数目无显著差异(P＞0.05)。我们在自然感染中得到了相似的结果，即清除肺泡巨噬细胞后的感染小鼠对肺部转移瘤的抑制作用几乎完全消失。这些结果提示，虫卵介导的抗肿瘤作用依赖肺泡巨噬细胞。 5.体内外验证肺泡巨噬细胞的抗肿瘤作用:为了验证F-egg诱导肺泡巨噬细胞的抗肿瘤效应，我们从各个处理组的小鼠体内分离肺泡巨噬细胞，将它们与肿瘤细胞共培养，结果显示F-egg组的肿瘤细胞死亡比例明显多于对照组，并且与共培养的巨噬细胞浓度呈依赖关系;同时，在Transwell培养系统中，F-egg组的肿瘤细胞死亡数量比对照组增加近3倍;此外，我们应用荧光标记的B16细胞和Reh细胞来检验肺泡巨噬细胞的吞噬功能。在mCherry标记的B16细胞模型中，F-egg组中有14.3±1.9％的肺泡巨噬细胞吞噬了mCherry标签，显著高于其他两个对照组的肺泡巨噬细胞（分别为2.8±0.7％和3.5±1.3％）。随后，我们通过回输实验来验证肺泡巨噬细胞的体内抗肿瘤效应，将从不同虫卵处理的小鼠中分离的肺泡巨噬细胞通过气管滴注的方式回输给已注入肿瘤细胞的小鼠体内，以观察激活的肺泡巨噬细胞对小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果显示，在LLC模型中，回输F-egg组巨噬细胞的小鼠肺部肿瘤数目相比于PBS组和D-egg组分别减少40.1％和40.3％。这些数据说明，F-egg诱导的肺泡巨噬细胞在体内外都具有抗肿瘤的作用。 6.虫卵分泌物介导的抗肿瘤作用:综合上述结果，沉积在肺部或者肝脏中的虫卵对远处器官的转移瘤具有抗肿瘤作用，同时虫卵介导的抗肿瘤作用需要活的日本血吸虫虫卵，提示我们虫卵的抗肿瘤作用可能是由其分泌物介导的。因此，我们制备了浓缩的无血清虫卵培养上清，通过尾静脉在第0，3，6，9天注入小鼠体内，与此同时，在第7天注入B16肿瘤细胞，在第27天时收集样本。检测发现，相比于对照组，F-egg上清能减少63.6％的肺部转移瘤和95.4％的肝脏转移瘤。在生存期实验中，应用活虫卵分泌物免疫后的小鼠，平均生存时间为36天，而死虫卵上清和无血清培养基对照组为27天和29天(P＜0.05)。以上结果表明了，虫卵分泌物具有显著的抗肿瘤作用，并提示虫卵介导的抗肿瘤作用是通过其分泌物介导并发挥作用的。 7.虫卵激活的肺泡巨噬细胞的表型:巨噬细胞具有高度可塑性，其功能与其被活化后的表型相关，故我们对虫卵活化的肺泡巨噬细胞表型进行分析。首先，我们将3组小鼠分离的肺泡巨噬细胞进行转录谱测序，然后用一些经典的M1和M2型标记物对它们分析。 8.虫卵介导抗肿瘤效应分子的鉴定小结:本课题是基于日本血吸虫感染能诱导宿主产生抗肿瘤活性的科学假说，并通过日本血吸虫虫卵肉芽肿肺模型和自然感染模型，证实了活的虫卵在体内发挥强大的抗肿瘤作用。在B16和LLC两种肿瘤细胞模型中，主要实验结果均显示，F-egg可以显著抑制肺脏和肝脏的转移瘤形成，同时这种抑制作用并不依赖于T细胞和B细胞。我们通过鉴定虫卵诱导小鼠肺部的肺部免疫应答，观察几种主要的免疫细胞在虫卵进入体内后的动态变化;同时，应用特定免疫细胞清除剂等，最终锁定虫卵发挥抗肿瘤作用的效应细胞为肺泡巨噬细胞。我们的研究还表明，虫卵介导的抗肿瘤活性是通过活虫卵排出的分泌物介导的，还可以对远处器官的肿瘤产生抑制作用。在抗肿瘤效应分子方面，初步阐明IL-1β在F-egg介导抗肿瘤中发挥了重要作用。本课题实验结果为日本血吸虫感染能够诱导宿主产生抗肿瘤免疫提供实验依据。此外，基于活虫卵活化的组织巨噬细胞具有抑制体内转移瘤的作用，这为肿瘤的治疗和预防提供新的潜在手段和途径。更为重要的是，本课题为进一步发现和鉴定诱导宿主产生抗肿瘤免疫的虫源分子提供重要基础。收起

关键词 : 恶性肿瘤免疫疗法日本血吸虫虫卵日本血吸虫分泌物

2. 日本血吸虫尾蚴体棘多尺度结构及其仿生结构构筑

[学位论文] 彭超赣南师范大学 2020年硕士导师: 范小林;彭云共57页

摘要 : 日本血吸虫病是影响我国人民健康和经济发展的一类顽疾，经过专业结构和科研工作者们多年的努力，中国在有效控制血吸虫病方面取得了巨大成就，并被世界公认和钦佩，要在2025年全国力争消除血吸虫病。然而，日本血吸虫尾蚴自身体积较小，关于尾蚴在水... 展开日本血吸虫病是影响我国人民健康和经济发展的一类顽疾，经过专业结构和科研工作者们多年的努力，中国在有效控制血吸虫病方面取得了巨大成就，并被世界公认和钦佩，要在2025年全国力争消除血吸虫病。然而，日本血吸虫尾蚴自身体积较小，关于尾蚴在水中的运动形态、尾蚴表面的微观结构和入侵机制等科学问题研究较少。因此，本论文采用仿生学的思路，研究尾蚴在水环境中的运动规律和尾蚴体棘多尺度结构与钻穿皮肤的构效关系，进一步揭示快速钻穿皮肤机制，为仿生智能材料提供新思路。主要研究内容包括： 1.日本血吸虫尾蚴体棘多尺度结构研究。利用锇酸/戊二醛固定液固定从钉螺中逸出的尾蚴，并利用叔丁醇梯度置换防治尾蚴脱水变形，制作成尾蚴SEM样品。利用扫描电子显微镜对（SEM)对尾蚴样品进行观察，发现尾蚴如蝌蚪状结构，可以把其身体分为头部与尾部。其头部含有腹吸盘与头器等器官，且尾蚴全身布满体棘，不同部位体棘尺寸不同，头部体棘较短小，尾部较细长。系统研究日本血吸虫尾蚴体棘多尺度结构为揭示尾蚴钻穿皮肤机制奠定基础。 2.日本血吸虫尾蚴水环境中运动规律研究。利用电子显微镜和CCD相机对尾蚴从钉螺中逸出运动到水面这个过程进行观察。研究发现：尾蚴头朝下尾朝上，通过尾部摆动向水面运动。对尾蚴游动速度与摆动速度统计分析，证明其摆动速度与游动速度呈正相关，进一步分析向上运动的驱动力来源于尾蚴尾部连续摆动与恢复过程中产生向上的阻力差。观察尾蚴钻穿进入老鼠皮过程，尾蚴通过头部不断伸缩、尾部摆动钻穿老鼠皮肤。对尾蚴头部伸缩周期进行统计分析，并建立模型分析，揭示尾蚴快速钻穿皮肤机制，为仿生智能界面材料提供新思路。 3.仿生血吸虫尾蚴体棘柔性锥阵列的构筑。利用磁场诱导磁流体产生锥状结构，用184胶与钴粒子配置磁流体，通过控制184胶与钴粒子比例和磁场强度来调节磁锥的形状，使其与尾蚴头部体棘相似。测定其增阻效果，验证尾蚴体棘的增阻效果。收起

关键词 : 日本血吸虫病日本血吸虫尾蚴多尺度体棘仿生学结构

3. 日本血吸虫22.6kDa表膜蛋白功能的初步研究

[学位论文] 朱绍春安徽医科大学 2008年硕士导师: 沈际佳共56页

摘要 : 日本血吸虫病是中国严重的寄生虫病之一，政府每年投入大量资金用于血吸虫的防治工作，然而由于血吸虫生活史的复杂性，血吸虫病的仍然没有得到很好的控制。血吸虫病控制的重要措施之一在于建立准确而又灵敏的诊断方法。本研究即以寻找新的诊断抗原为... 展开

关键词 : 日本血吸虫表膜蛋白功能

4. 蒿甲醚对日本血吸虫核酸代谢的影响

[学位论文] 翟自立中国疾病预防控制中心 1998年硕士导师: 肖树华共35页

关键词 : 日本血吸虫核酸蒿甲醚

5. iNOS的基因表达及其产物NO在抗日本血吸虫感染免疫中的作用

[学位论文] 龙小纯华中科技大学 2003年博士导师: 李雍龙共118页

摘要 : NO的合成有赖于一氧化氮合酶(NOS)的催化作用,机体内的NOS有结构型一氧化氮合酶(cNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)两类. 有关NO对日本血吸虫的细胞毒作用、NO对感染日本血吸虫宿主肝脏病理变化的影响以及日本血吸虫本身iNOS的表达,尚未见报道.该文研究... 展开

关键词 : 日本血吸虫基因表达 NO

6. 日本血吸虫新基因的发现及Sj16的功能研究

[学位论文] 卞国武中山大学 2002年博士导师: 余新炳共115页

摘要 : 研究目的：研究目的包括二方面.一方面,用运用EST技术快速经济地发现日本血吸虫（中国大陆株）新基因,丰富有关日本血吸虫（中国大陆株）新基因,丰富有关日本血吸虫（中国大陆林）表达基因知识,为血吸虫疫苗研究打下坚实基础;另一方面,在日本血吸虫（... 展开

关键词 : 日本血吸虫 DNA免疫 Sj16基因

7. 日本血吸虫磷酸丙糖异构酶重组蛋白与核酸疫苗的研究

[学位论文] 孙文宇中国疾病预防控制中心 2000年博士导师: 刘述先共72页

摘要 : 日本血吸虫病是中国的一个重要的公共卫生问题.我们实验室研究了日本血吸虫天然TPI在小鼠中的保护作用,发现它有显著的减卵效果.一.重组日本血吸虫的TPI基因,在引物中插入适当的限制性内切酶位点,将TPI基因克隆进pQE30原核表达载体,以IPTG诱导重组TP... 展开

关键词 : PCR方法日本血吸虫 TPE基因

8. 日本血吸虫性相关Tsunagi基因的克隆、表达及初步鉴定

[学位论文] 王晓楠安徽医科大学 2008年硕士导师: 沈际佳共59页

摘要 : 血吸虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。血吸虫致病主要是由于性成熟雌虫所产虫卵在人畜肝脏大量沉积形成的虫卵肉芽肿和纤维化，而沉积在肠壁的虫卵排出体外是该病流行传播的重要途径。另一方面，血吸虫雌雄合抱是雌虫生殖系统正常发... 展开血吸虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。血吸虫致病主要是由于性成熟雌虫所产虫卵在人畜肝脏大量沉积形成的虫卵肉芽肿和纤维化，而沉积在肠壁的虫卵排出体外是该病流行传播的重要途径。另一方面，血吸虫雌雄合抱是雌虫生殖系统正常发育和产卵的前提条件，雌虫的发育成熟又是雄虫依赖性的。因此，控制血吸虫性别分化、性成熟及雌虫产卵成为防治血吸虫病的重要策略。Magonashi基因在模式生物如果蝇和秀丽隐杆线虫中是调节雌雄同体性别决定基因即决定生殖细胞雄性化作用的基因，该基因的蛋自产物与Tsunagi(或Y14)蛋白结合成复合物共同行使功能。已有实验报道这两种蛋白在进化过程中均高度保守表达。本课题组在前期工作中已经用RNAi方法研究了日本血吸虫Magonashi基因(登录号BM735619)干扰后血吸虫的表型变化，发现部分实验组雄虫睾丸小叶中的精母细胞表现出泛雄性化表型。但是日本血吸虫Tsunagi基因至今未有报导，本文旨在获得日本血吸虫Tsunagi基因序列并对该基因的功能进行初步鉴定。根据遗传密码的简并性，本文利用黑腹果蝇和秀丽隐杆线虫Tsunagi蛋白高度保守的60个氨基酸序列，使用blastp，blockmarker，CodeHop等网络工具及数据库设计一对简并引物，从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出了一段长180bp的PCR产物，测序后经blastx检索GenBank，发现这段基因的氨基酸序列与黑腹果蝇和秀丽隐杆线虫Tsunagi蛋白的氨基酸序列高度同源。然后利用5'端和3'端锚定PCR方法分别从日本血吸虫童虫cDNA文库中扩增出日本血吸虫Tsunagi蛋白基因上、下游的未知序列。再根据锚定PCR产物序列设计一对特异性引物，并在引物5'端分别引入BamI和XhoI酶切位点，从日本血吸虫童虫cDNA文库和日本血吸虫成虫cDNA中均扩增出了日本血吸虫Tsunagi基因的开放阅读框(Openreadingframe，ORF)。经基因测序分析后该cDNA长度为531bp，编码177个氨基酸，蛋白的理论分子量为20.078KD，等电点为6.195。SjTsunagi基因同源性比对后发现其编码的氨基酸序列与其它物种的Tsunagi蛋白有很高的相似性：与黑腹果蝇Tsunagi蛋自的氨基酸序列有55.9%的同源性和67.2%的相似性；与秀丽隐杆线虫Tsunagi蛋白的氨基酸序列有40.6%的同源性和51.4%的相似性。蛋白功能分析预测该蛋自含有一个保守的RNA识别模序，理论上是RNA结合蛋白。将获得的日本血吸虫Tsunagi基因的完整ORF亚克隆入原核表达载体pET28a(+)中，构建的重组质粒pET28a-SjTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达。用纯化后的融合蛋白免疫小鼠，经ELISA鉴定获得的多克隆抗体效价为1:51200，免疫印迹证实抗体可特异性识别目的蛋白。为了观察天然Tsunagi蛋白在日本血吸虫体内的定位，我们首先制备了日本血吸虫成虫HE染色切片，掌握了日本血吸虫成虫在光学显微镜下的形态特点后，用间接免疫荧光法观察到日本血吸虫Tsunagi蛋白仅在雌虫卵巢的卵母细胞内高表达。利用免疫印迹观察SjTsunagi蛋白在虫卵、雌虫、雄虫和混合成虫等不同阶段的表达水平，结果发现该蛋白也仅在雌虫阶段表达，提示Tsunagi蛋白可能是血吸虫的性别相关基因。利用Pull-down和免疫共沉淀实验，证实了日本血吸虫Tsunagi和Magonashi蛋白的相互作用关系。本论文率先开展了血吸虫Tsunagi基因的研究，首次获得编码Tsunagi蛋白的基因，成功将Tsunagi基因在大肠杆菌中进行表达并获得了特异性的多克隆抗体；免疫荧光观察到天然Tsunagi蛋白在雌虫的卵母细胞内高表达；免疫印迹发现该蛋白仅在雌虫阶段表达；Pull-down和免疫共沉淀实验证实Tsunagi与Magonashi蛋白的相互作用，提示这两种保守表达的蛋白在日本血吸虫中可能与模式生物一样也是性别发育相关基因。收起

关键词 : 日本血吸虫基因克隆表达初步

9. Tk3在日本血吸虫生殖发育中的功能研究

[学位论文] 吴菲安徽医科大学 2018年硕士导师: 刘淼共55页

摘要 : 目的：血吸虫病是全球最常见的人兽共患病之一，血吸虫卵为血吸虫致病和流行的最关健因子，因此，掌握血吸虫生殖发育与产卵的生物学分子机制，发现可供干预的关键靶点，对于制定预防和治疗这些感染的新策略至关重要。TK3是细胞酪氨酸激酶家族的成员，... 展开目的：血吸虫病是全球最常见的人兽共患病之一，血吸虫卵为血吸虫致病和流行的最关健因子，因此，掌握血吸虫生殖发育与产卵的生物学分子机制，发现可供干预的关键靶点，对于制定预防和治疗这些感染的新策略至关重要。TK3是细胞酪氨酸激酶家族的成员，曼氏血吸虫SmTK3主要定位于血吸虫雌虫的卵黄腺和卵母细胞以及雄虫的精原细胞中，推测其可能参与曼氏血吸虫的生殖活动，然而日本血吸虫TK3在其生殖过程中的作用却尚不明确。本研究的目的是探讨TK3在日本血吸虫生殖发育中的作用。方法:根据SmTK3设计引物，以日本血吸虫cDNA为模板，扩增获得日本血吸虫SjTK3全长序列。用DNAMAN软件分析其氨基酸序列，了解SjTK3蛋白在各个物种中的同源，利用MEGA5软件建立了SjTK3详细的系统进化树。使用TRIzol方法提取虫体总RNA，用荧光定量PCR的方法分别检测日本血吸虫虫卵、尾蚴、童虫期、24天雄虫和雌虫以及42天雄虫和雌虫SjTK3的表达情况。Dihydrochloride是一种Src激酶抑制剂，在体外应用于日本血吸虫。Dihydrochloride处理日本血吸虫7天后，收集血吸虫虫体和虫卵，观察不同处理量的实验组与空白组虫卵的数量变化；同时利用共聚焦激光扫描显微镜下拍摄血吸虫生殖器官形态图片并分析。最后使用qPCR分析了一些与虫卵形成相关基因的变化情况。结果:利用PCR扩增出SjTK3基因全长，经测序和初步分析该基因共编码647个氨基酸。用TK3所在几个代表物种构建进化树，通过对进化树的观察，日本血吸虫此基因与其他物种TK3基因并为一条进化支，因此确认日本血吸虫TK3基因属于Src家族成员，通过DNAMAN软件分析TK3蛋白同源性，发现日本血吸虫TK3蛋白与曼氏血吸虫TK3蛋白（即SjTK3和SmTK3）同源性很高，为91.6%，故将其命名为日本血吸虫SjTK3。SjTK3 mRNA在日本血吸虫的生活史各个阶段中呈现差异表达。在Src抑制剂Dihydrochloride处理后，激光共聚焦显微镜的观察结果显示，在日本血吸虫的生殖器官，尤其是在雌虫的卵巢和雄虫的睾丸，其生殖细胞形态有所改变，可观察到孔状结构；随Dihydrochloride处理的浓度上升，分别加入25μM，50μM，75μM的量，在处理第7天时用普通光学显微镜计数虫卵数量，发现雌虫产卵数量在50μM，75μM浓度处理下各下降了约18％和31％，此外，在Dihydrochloride处理后第7天，一些重要的虫卵形成相关基因（P14，P48和Fs800）的表达水平也发生了变化。结论：根据本实验我们推断，SjTK3在日本血吸虫生殖器官的成熟和虫卵的发育和产生中发挥相当重要的功能。这些发现有助于我们更好地了解日本血吸虫的生殖生物学，发现调控日本血吸虫生殖发育信号通路中的重要分子，通过干预其关键靶点从而有效抑制血吸虫生殖发育，可实现对血吸虫致病和流行进行有效的控制。收起

关键词 : 日本血吸虫生殖发育 SjTk3基因

10. 日本血吸虫云南品系和皖鄂品系对家兔致病性的比较研究

[学位论文] 金亮昆明医学院 2006年硕士导师: 李飞共45页

摘要 : [目的] 观察和比较家兔在同等条件下分别感染日本血吸虫云南品系和皖鄂品系后，其肝功能的动态变化以及肝肠病理学改变和异位寄生情况，探讨不同地域的两种品系日本血吸虫对宿主致病性的差异。 [方法]22只成年健康家兔随机分为对照组、大理组和皖... 展开 [目的] 观察和比较家兔在同等条件下分别感染日本血吸虫云南品系和皖鄂品系后，其肝功能的动态变化以及肝肠病理学改变和异位寄生情况，探讨不同地域的两种品系日本血吸虫对宿主致病性的差异。 [方法]22只成年健康家兔随机分为对照组、大理组和皖鄂组，分别用大理钉螺和江苏钉螺逸出的血吸虫尾蚴(150±2条)以腹部贴片法攻击感染。用全自动生化分析仪于感染后不同时间分别检测对照组和实验组家兔血清总蛋白，白蛋白和球蛋白，丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)及血清总胆红素和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)等肝功能指标，并进行统计分析；于感染后不同时间分别剖杀实验动物，观察肝表面虫卵结节的密度及大小；在光学显微镜下观察肝脏、小肠和大肠等组织的病理学变化；用放射免疫法(RIA)检测感染后12W各组家兔血清透明质酸(HA)，Ⅲ型前胶原(PCⅢ)，IV型胶原(IV-C)等肝纤维化指标；压片观察肺脏和脑组织观察异位寄生情况。 [结果] 本实验中，实验组家兔血清白蛋白持续下降，而血清球蛋白持续上升，整个实验过程中血清总蛋白无明显变化，两种转氨酶及γ-谷氨酰转肽酶活性都以增高－－进一步增高－－恢复的形式变化，胆红素则一直升高。除胆红素外，其它的肝功能指标变化均以大理组为著。肝脏结构损害主要表现为：感染后2周，肝血窦扩张充血，肝细胞水肿，少数肝细胞脂肪变性；感染后6周，门脉区有充血及炎细胞浸润，大部分成熟虫卵周围均有密集的以嗜酸性粒细胞为主的炎细胞浸润，有的则因炎细胞坏死崩解而形成急性虫卵脓肿；感染后12周，未见假小叶形成，汇管区有较多的虫卵结节，伴有纤维组织增生及慢性炎细胞浸润，小肠、结肠的病理改变为进行性加重的炎症反应，结肠可见不同时期的急性、慢性虫卵结节，周围有少量细胞成分及纤维组织围绕，以上病理改变两实验组无明显差异。虫卵结节密度在感染后6周时以皖鄂组为大，在感染后12周以大理组为大，虫卵结节大小在感染后5周、12周均以大理组为大。肝纤维化指标检测的结果为：大理组血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、浓度均高于皖鄂组。本实验过程中，除在感染后6周时，皖鄂组家兔中发现一例肺部异位寄生外，其余家兔均未发现有异位寄生。 [结论] 日本血吸虫云南品系对宿主肝功能的损害比皖鄂品系严重；两种品系血吸虫在宿主体内的发育及产卵高峰时间可能不同；日本血吸虫云南品系所诱发的炎症反应重于皖鄂品系；同本血吸虫云南品系对宿主形成的肝纤维化比皖鄂品系严重；日本血吸虫云南品系的致病性似高于皖鄂品系。收起

关键词 : 日本血吸虫品系致病性