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排序：

[学位论文] 陈昌喆北京协和医学院中国医学科学院 2018年博士导师: 窦克非共102页

摘要 : 本文主要从以下几个部分展开论述：（一）白藜芦醇与阿托伐他汀单独或联合用药对新西兰兔腹主动脉药物洗脱支架植入后新生内膜及再内皮化的影响目的：复制新西兰兔腹主动脉球囊损伤模型并植入药物洗脱支架，应用光学相干断层扫描技术观察... 展开本文主要从以下几个部分展开论述：（一）白藜芦醇与阿托伐他汀单独或联合用药对新西兰兔腹主动脉药物洗脱支架植入后新生内膜及再内皮化的影响目的：复制新西兰兔腹主动脉球囊损伤模型并植入药物洗脱支架，应用光学相干断层扫描技术观察白藜芦醇与阿托伐他汀单独或联合用药对支架植入段血管再内皮化的干预作用，为防治支架后血栓形成的临床用药选择提供实验依据。方法：选取6月龄雄性健康新西兰兔，体重2.5-3.5kg。高脂饮食饲养3周后，所有实验动物行腹主动脉球囊损伤术。第8周时，将药物洗脱支架(DES)(Firebird23.5*13mm)植入新西兰兔腹主动脉损伤后狭窄明显处。复制DES植入模型后，将存活的94只新西兰兔随机分为4组：空白对照组(n=22)、阿托伐他汀组(2.0mg/kg/day，n=24)、白藜芦醇组(50mg/kg/d，n=24)、联合用药组(阿托伐他汀2.0mg/kg/day+白藜芦醇50mg/kg/d，n=24)。各实验组动物按实验方案给予药物干预至实验终点（术后28天）。支架植入术后第28天对DES植入段血管的内膜覆盖及再内皮化情况进行检测，通过光学相干断层扫描技术(OCT)分析新生内膜增生/厚度(Neointimal hyperplasia，NIH，mm)及新生内膜面积(mean NIH area，mm2)。取支架覆盖段血管组织，扫描电镜下观察靶血管内皮化程度。结果：OCT成像显示：与对照组相比，各实验组DES支架段新生内膜厚度及新生内膜面积均有所增加，差异有统计学意义;联合用药组相较于RV、Ator单独用药时，新生内膜厚度(211.42±24.96vs182.03±19.1，211.42±24.96vs196.64±24.07，P＜0.05)及新生内膜面积（1.56±0.09vs1.44±0.10，1.56±0.09vs1.50±0.10，P＜0.05）均增加更为明显，支架内皮覆盖程度更高。扫描电镜定性结果显示：对照组新生内膜的形成较各实验组明显延迟;RV组支架小梁表面新生内膜覆盖不完全;Ator组及联合用药组可观察到支架小梁表面及支架小梁间区域均呈高内皮覆盖状态。说明RV及Ator单独或联合治疗增加了新生内膜及再内皮化程度。结论：白藜芦醇与阿托伐他联合用药可促进药物洗脱支架植入后血管内膜的再内皮化过程，其作用优于单独用药，对于预防支架植入后血栓形成具有重要的临床意义。（二）白藜芦醇与阿托伐他汀单独或联合应用对大鼠骨髓间充质干细胞的影响及机制研究目的:分离并提纯大鼠BMSC细胞，观察RV与Ator单独或联合应用对大鼠BMSC细胞的影响，并初步探讨RV与Ator联合用药对大鼠骨髓间充质干细胞作用的发生机制，为二者联合应用于临床提供理论依据。方法:取4-6周龄SD大鼠（120g-160g），无菌条件下分离出后肢胫骨和股骨，提取全骨髓细胞。采用全骨髓贴壁方法分离并培养大鼠BMSC细胞，培养过程中应用倒置相差显微镜观察细胞形态。取培养至第3代且状态良好的BMSC细胞，流式细胞术检测其表面标志物CD90，CD45的阳性表达率;分别定向诱导BMSC细胞成脂和成骨分化，并用油红O及茜素红染色鉴定分化后细胞。取良好生长的第3代BMSC细胞，分别与阿托伐他汀、白藜芦醇及雷帕霉素共培养并分组。根据干预药物浓度的不同，将阿托伐他汀分为6组:对照组(0.1％DMSO)、0.001μ、0.01μM、0.1μM、1μM和10μM;白藜芦醇分为7组:对照组(0.1％DMSO)、0.1μM、0.SμM、1μM、2.5μM、5μM、10μM;雷帕霉素分为8组:对照组(0.1％DMSO)、0.1μM、1μM、10μM、100μM、1μM、10μM、100μM。采用CCK-8法观察不同时间点各组BMSC细胞的增殖情况，以筛选出最适的药物作用浓度及培养时间;Western Blot检测RV及Ator单独或联合用药对RPM环境下BMSC细胞Bax及Bcl-2蛋白的表达情况;应用流式细胞技术检测RV及Ator单独或联合用药对RPM环境下BMSC细胞凋亡情况。应用Transwell装置观察BMSC细胞迁移情况。采用Western Blot法检测联合用药组BMSC细胞的VE-Cadherin、CD31 (PECAM-1);同样，在各实验药物干预前用或不用PI3K抑制剂LY294002(30μmol/L)预处理2小时后，采用Western Blot法检测各实验组Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS、CXCR4蛋白的表达情况。结果:流式细胞术对第3代BMSC细胞表面抗原标志物进行检测，结果显示:CD90表达呈阳性，阳性率为83.6％; CD45表达呈阴性，阳性率为0.0％。经成脂诱导培养后，BMSC细胞中出现被油红O染为红色的脂肪滴;经成骨诱导培养后，BMSC细胞经茜素红染色可见呈红色的矿化结节。CCK-8结果显示:各实验组在第48小时细胞存活率最高，在该时间点RV浓度为1μM、Ator浓度为0.1μM、联合用药浓度为 RV1μM+Ator0.1μM时细胞存活率最高;而在RPM环境下培养48小时，联合用药时（RV2.5μM+Ator1 μM）细胞存活率显著高于单独用药时(RV1μM、Ator1μM)时，差异均有统计学意义。同样在RPM环境下流式细胞仪检测凋亡情况，结果显示:与Control组相比，Ator组与联合用药组BMSC细胞凋亡明显减少，差异有统计学意义，P ＜0.05。Wester blot结果显示:与Control组相比，各实验组BMSC细胞用RPM处理后Bax表达下调、Bcl-2表达上调，差异有统计学意义，p＜0.05，这种现象在联合用药时更加明显。Transwell结果显示:与Control组相比，各干预组迁移细胞数量明显增多，差异有统计学意义，p＜0.01;实验组间比较发现，相比于RV组，联合用药组及Ator组细胞迁移数量增加。RV与Ator联合干预BMSC细胞12天后，应用Westerblot检测内皮标志物，结果显示:与Control组相比，联合用药组CD31及VE-Cadherin表达增高，差异有统计学意义，p＜0.05。Wester blot检测RV与Ator单独或联合应用对BMSC细胞Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS、CXCR4蛋白的表达影响，结果显示:与Control组比较，各实验组BMSC细胞的p-Akt、p-eNOS、CXCR4蛋白表达均上调，联合用药组BMSC细胞的p-Akt、p-eNOS蛋白表达高于单独用药组，差异有统计学意义;而PI3K抑制剂LY294002可下调p-Akt、p-eNOS、CXCR4蛋白表达，并使联合用药组BMSC细胞增殖及迁移能力下降。结论:白藜芦醇与阿托伐他汀单独或联合用药可促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖，抑制细胞凋亡，并增强细胞的迁移能力，其机制可能与药物激活PI3K/Akt/eNOS通路有关。收起

关键词 : 白藜芦醇阿托伐他汀药物洗脱支架血管内皮化骨髓间充质干细胞

2. 光伏并网发电系统的仿真研究与设计

[学位论文] 陈昌喆武汉理工大学 2010年硕士导师: 徐华中共75页

摘要 : 太阳能光伏发电是新能源和可再生能源的重要组成部分，被认为是当前世界上最有发展前景的新能源技术，各发达国家均投入巨额资金竞相研究开发，并积极推进产业化进程，大力开拓市场应用。因此，光伏逆变并网系统是绿色新能源开发中一个不容忽视的研究... 展开太阳能光伏发电是新能源和可再生能源的重要组成部分，被认为是当前世界上最有发展前景的新能源技术，各发达国家均投入巨额资金竞相研究开发，并积极推进产业化进程，大力开拓市场应用。因此，光伏逆变并网系统是绿色新能源开发中一个不容忽视的研究热点。以往的光伏电池仿真都是通过对开路电压Voc和短路电流Isc的匹配来设置的光伏电池仿真参数，这种方式使得曲线的中间部分很难反映电池实际的I-V特征。本文通过使用拟合实际测量曲线的方法，自动寻找合适仿真参数，使得仿真结果与实际曲线更接近，更能反映实际情况。传统的光伏逆变系统是使用三相三线制系统，为了解决三相不平衡问题，大多使用带NFT(中性点变压器)的方法，但是工频下的变压器过于笨重，在大功率场合下难以发展。本文使用三相四线制的逆变系统，通过三维空间矢量变换解决了第四桥臂的牵制问题，使得负载不平衡的问题得到了很好的解决。本文首先对光伏电池的输出特性做了深入的研究，并给出了其数学描述。介绍了MATLAB的光伏电池SolarCell模块，并提出了一种能根据实际数据校正仿真模块的方法。并对光伏的特性进行了仿真。其次，针对三相三线制逆变系统在并网过程中遇到的非平衡负载问题，引入了三相四线制逆变系统。并对三相四线系统进行了空间矢量建模，使用三维矢量变换解决了中性点桥臂牵制的问题，并选用SVPWM调制方法和PID控制策略，并对其进行了仿真，证明了该方法的可行性。另外，介绍了光伏MPPT的相关原理。详细讨论了适用于光伏MPPT的DC-DC拓扑，并对MPPT算法进行了对比选择。最后使用合适的DC-DC拓扑及跟踪算法对光伏的MPPT进行了仿真。最后，从在前文仿真的基础上对系统的关键硬件做了详细的讨论。并对部分硬件做了仿真实验，实验证明关键硬件系统原理正确，为将来的继续深入研究铺平道路。文章最后对全文进行了总结，并提出下一步工作的展望。收起

关键词 : 逆变并网三相四桥臂光伏并网发电系统可再生能源输出特性数学描述

3. “痰瘀同治”方药对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、迁移及分泌VEGF的影响

[学位论文] 陈昌喆第二军医大学 2015年硕士导师: 吴宗贵共61页

摘要 : 近年来，随着人们对组织工程及细胞治疗领域关注度的提升，骨髓间充质干细胞(BMSCs)已成为研究的焦点之一。BMSCs是属于骨髓来源的非造血干细胞，具有诸多生物学特性，如来源广泛并易于分离扩增、低免疫源性且不易引起免疫损伤、作为“种子”细胞具有... 展开近年来，随着人们对组织工程及细胞治疗领域关注度的提升，骨髓间充质干细胞(BMSCs)已成为研究的焦点之一。BMSCs是属于骨髓来源的非造血干细胞，具有诸多生物学特性，如来源广泛并易于分离扩增、低免疫源性且不易引起免疫损伤、作为“种子”细胞具有多向分化能力、可分泌多种细胞因子并通过自分泌或旁分泌功能影响自体或其他细胞多种生物学功能并可调节炎性反应等。BMSCs应用于心血管疾病已有大量的基础及临床研究报道。研究显示，BMSCs可以增加梗死心肌局部血流量及毛细血管密度，缩小梗死心肌面积，并在梗死心肌内发现了存活的移植细胞。也有实验发现，BMSCs可被招募到损伤的血管部位并分化为内皮细胞及平滑肌细胞，同时对损伤血管进行修复。而BMSCs通过分泌细胞因子刺激血管新生、发挥抗炎作用、诱导其迁移至损伤组织并参与损伤组织的修复也有大量研究报道。动脉粥样硬化(AS)为多发病，其发生机制不清，可能与多因素、多发病环节密切相关。众多学者认为，动脉粥样硬化病变的发生是动脉对血管内皮、内膜损伤做出的炎症—纤维增生性反应。而BMSCs的生物学特性，使其为AS临床应用提供可能性。 “痰瘀同治”方药的主要成分为红曲、瓜萎、薤白和三七，此前我们实验小组已经对其进行了动物急性毒理实验和对动脉粥样硬化影响的实验研究。结果表明，“痰瘀同治”方药可以明显降低血脂水平、稳定斑块，抑制动脉粥样硬化的进展且安全无毒性作用。本实验拟观察“痰瘀同治”方药对BMSCs增殖、凋亡、迁移等方面的影响，为“痰瘀同治”方药与BMSCs联合应用治疗AS提供理论基础。目的：体外实验观察“痰瘀同治”方药对大鼠BMSCs增殖、凋亡、迁移及分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响，并初步探讨BMSCs迁移的可能机制。方法：取4周龄SD大鼠，分离其后肢胫骨和股骨，提取全骨髓细胞。采用全骨髓贴壁法分离并培养大鼠BMSCs，培养过程中应用倒置显微镜观察细胞形态。取培养纯化至第3代后的BMSCs进行鉴定:对培养细胞进行形态学观察;流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90，CD34、CD45阳性表达率;分别用成脂和成骨培养基定向诱导BMSCs分化，并用油红O及茜素红染色鉴定分化后的细胞。用20mlDMSO将10mg“痰瘀同治”方药完全溶解，完全培养基将其浓度稀释为10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、150μg/L，并相应分为10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、150μg/L药物组及对照组。用不同浓度“痰瘀同治”方药与生长良好的第3代BMSCs分别干预培养12h、24h、36h、48h、60h、72h，应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测各组BMSCs的增殖情况，并筛选出最适药物作用浓度及时间。应用流式细胞技术及transwell小室检测不同药物浓度在最适培养时间点时BMSCs的凋亡情况及BMSCs的迁移能力。在最适浓度及时间点干预培养第3代BMSCs，应用Western Blot检测CXCR4蛋白的表达。ELISA法检测不同干预浓度培养的BMSCs在最适培养时间VEGF分泌水平。结果： 1.大鼠BMSCs的形态学观察及鉴定全骨髓贴壁方法所获得的BMSCs培养14～21日即可传代，传代后增殖速度较原代明显增快，7d左右可融合达80％。第3至第6代细胞纯化程度高，细胞增殖能力强;传代后培养的BMSCs呈纺锤形或多角形，细胞数目多、排列紧密时可呈漩涡状排列。经流式细胞仪检测，培养的BMSCs均一表达CD29、CD90，阳性率分别为98.23％、98.69％;而CD34、CD45，阳性表达率分别为2.47％、1.94％;成脂诱导培养基诱导培养BMSCs后，观察到脂滴被红染的细胞;成骨诱导培养基诱导培养BMSCs后，可见红色矿化结节。上述结果均符合BMSCs的鉴定特征。 2.“痰瘀同治”方药对BMSCs增殖及凋亡的影响以不同浓度“痰瘀同治”方药与BMSCs共培养后，根据不同时间点测定的OD值绘制增殖曲线。与对照组曲线比较，曲线上药物浓度为10ug/L、25ug/L及50ug/L有增殖效果，曲线下药物浓度为100ug/L及150ug/L组抑制增殖。在药物浓度为50ug/L而培养时间为24h、36h、48h、60h、72h，25ug/L培养时间在48h、60h、72h，10ug/L培养时间在60h、72h时，细胞生存率均明显高于同时间点对照组，其差异均有统计学意义，P＜0.05;而50ug/L药物组自36h后各时间点细胞生存率均显著高于同时间点的10ug/L和25ug/L药物浓度组，差异有统计学意义，P＜0.05。经流式细胞仪检测，当“痰瘀同治”方药内容物溶解液与BMSCs共培养48h后，药物浓度为25μg/L、50μg/L时对BMSCs凋亡有显著抑制作用，与对照组比较差异均有统计学意义，P＜0.05。 3.“痰瘀同治”方药对BMSCs迁移的影响“痰瘀同治”方药药物浓度10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L干预培养BMSCs48h，与对照组比较，各浓度药物组迁移细胞数目均明显多于对照组(P＜0.05)，其中药物浓度为50μg/L时对BMSCs的迁移促进作用最为显著。Western blot结果显示，各实验组CXCR4蛋白表达均有少量的增加，与对照组比较，50μg/L药物干预组CXCR4蛋白表达量增高明显，差异有统计学意义，P＜0.05。 4.“痰瘀同治”方药对BMSCs分泌VEGF的影响当“痰瘀同治”方药浓度为25μg/L、50μg/L，培养时间为48h时，BMSCs培养上清液中VEGF浓度分别为（406.22±10.71）pg/ml、（410.44±12.15）pg/ml，与对照组（387.56±10.25）pg/ml比较明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论： “痰瘀同治”方药可促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖，抑制其凋亡，促进血管内皮生长因子的分泌，并可能通过促进CXCR4的表达而促进BMSCs的迁移。收起

关键词 : 动脉粥样硬化痰瘀同治方药骨髓间充质干细胞细胞增殖细胞凋亡血管内皮生长因子组织工程