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排序：

[学位论文] 贾贺堂重庆医科大学 2005年博士导师: 张素华共91页

摘要 : 　　本研究探讨了MDOY基因在早发家族性2型糖尿病发病中作用，本实验通过收集100个2型糖尿病家系，先证者均在40岁前被诊断为糖尿病，且至少还有一个一级亲属在45岁之前被诊断糖尿病。提取先证者血DNA，用PCR产物分别扩增MDOY1、MDOY2、MDOY3、MDOY4、... 展开

关键词 : 2型糖尿病遗传学基因缺陷分子筛查家族性疾病

2. Shh与Wnt5a基因在NIPBL+/-小鼠模型肢芽的表达研究

[学位论文] 邢蓬蕊石河子大学 2019年硕士导师: 张惠荣共45页

摘要 : 目的：CorneliadeLange综合征（Cdls）为基因缺陷性疾病，多认为NIPBL基因突变可引起Cdls。NIPBL基因的突变可能对其调控的相关Shh、Wnt5a基因转录发生变化，从而对Wnt信号通路中关键因子功能产生影响，从而改变了成骨细胞的分化的方向等，最终导致长... 展开目的：CorneliadeLange综合征（Cdls）为基因缺陷性疾病，多认为NIPBL基因突变可引起Cdls。NIPBL基因的突变可能对其调控的相关Shh、Wnt5a基因转录发生变化，从而对Wnt信号通路中关键因子功能产生影响，从而改变了成骨细胞的分化的方向等，最终导致长骨发育异常。因此，本研究以小鼠胚胎肢芽组织为研究对象，研究Shh、Wnt5a基因在NIPBL基因缺陷小鼠肢芽的表达情况，揭示Wnt信号通路相关因子在NIPBL+/-基因敲除小鼠中的作用，探讨两个基因与Cdls综合征的关系，从而为Cdls综合征的发病机制提供相关理论依据。方法：选择实验动物为NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠的背景品系小鼠，57BL/6J，SPF级，购于浙江大学动物实验中心，动物饲养于石河子大学药学院动物实验中心，饲养条件平均温度25℃，湿度40%左右。NIPBL+/-小鼠，雄性体重35g，雌性体重30g，20：00时将雌雄小鼠按2∶1合笼，晨8:00检查雌鼠的阴栓，阳性阴栓小鼠当天12:00作为其胚胎0.5天。分别于胚胎10天、11天、12天取胎鼠进行实验验证。实验组，利用RT-PCR逆转录试剂盒鉴定后，可得到36只NIPBL+/-胎鼠肢芽，10天（n=12）、11天（n=12）、12天（n=12）。对照组，利用RT-PCR逆转录试剂盒鉴定，可得到36只NIPBL+/+胎鼠肢芽，10天（n=12）、11天（n=12）、12天（n=12），将胎鼠肢芽组织放入液氮中，15-20min后，取出肢芽组织将其冷冻保存于-80℃冰箱内，备用。real-timePCR检测Shh、Wnt5a基因转录及表达水平。实验数据均为正态分布，均数±标准差（-用单因素方差分析，且各组数据间Pearson相关分析，P＜0.05有统计学差异，P＜0.01有显著差异。(x)±s）表示，经SPSS17.0统计软件分析，各组比较均采结果：通过NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠获得NIPBL+/-小鼠模型，然后NIPBL+/-小鼠杂交，通过RT-PCR鉴定出实验组胎鼠及对照组胎鼠。利用real-timePCR检测Shh、Wnt5a基因转录水平，实验组Shh、Wnt5a的表达术后第10d开始升高，第11d达到最大值，第12d有下降。实验组各时间点与对照组各时间点比较，基因表达量较对照组表达量低，差异有统计学意义（P＜0.01），组内各不同时间段之间比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。利用Westernblot检测Shh、Wnt5a蛋白表达水平，实验组Shh、Wnt5a的表达术后第10d开始升高，第11d达到最大值，第12d有下降，实验组各时间点与对照组各时间点比较，基因表达量较对照组表达量低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：通过检测NIPBL+/-基因敲除胎鼠肢芽中Shh及Wnt5a基因的表达发现在孕鼠第10、11、12天两基因表达受到抑制，说明NIPBL对Wnt5a和Shh基因表达有影响，有助于人们更好的了解NIPBL+/-基因缺陷引起CdLs综合征骨畸形的发病机制。收起

关键词 : 基因缺陷性疾病 Shh基因 Wnt5a基因 NIPBL+/-动物模型肢芽表达

3. 3例多种羧化酶缺陷症患者基因突变的研究

[学位论文] 李端广州医学院 2005年硕士导师: 刘丽共49页

摘要 : 多种羧化酶缺陷症(multiplecarboxylasedeficiency，MCD)是一种先天遗传代谢性疾病，属常染色体隐性遗传的单基因疾病。根据缺陷酶的不同，MCD分为生物素酶缺陷(biotinidasedeficiency，BTD)和全羧化酶合成酶缺陷(holocarboxylasesynthetasedeficienc... 展开多种羧化酶缺陷症(multiplecarboxylasedeficiency，MCD)是一种先天遗传代谢性疾病，属常染色体隐性遗传的单基因疾病。根据缺陷酶的不同，MCD分为生物素酶缺陷(biotinidasedeficiency，BTD)和全羧化酶合成酶缺陷(holocarboxylasesynthetasedeficiency，HLCSD)两类。MCD临床表现多样，常常表现为精神运动发育迟缓、代谢性酸中毒、皮疹、脱发和癫痫等，如果不及时治疗常常导致不可逆的神经系统、视力和听力的损害，因此早期诊断和治疗十分重要。基因突变的研究对实现产前诊断和基因诊断，预测患儿的临床表型和治疗疗效评估具有非常重要的作用。目前报道的生物素酶基因(biotinidase，BT)突变超过80余种，在美国报道的突变中有五个常见突变。报道的全羧化酶合成酶基因(holocarboxylasesynthetase，HLCS)突变有20多种。中国仅见香港和台湾地区关于HLCS基因的研究。目的: 对3例MCD患者进行基因突变分析，与香港和台湾地区资料结合探讨中国人MCD基因突变特点，为MCD的产前诊断和家系分析提供方法和实验依据。方法: 1、应用末梢血滴滤纸片对3例广东地区MCD患者进行生物素酶活性测定。 2、提取3例MCD患者外周血基因组DNA，应用PCR-DNA直接测序各个外显子的方法，分析患者生物素酶基因(BT)和全羧化酶合成酶基因(HLCS)。 3、对已知突变用PCR-直接测序的方法对患者父母进行遗传相关性分析；以限制性内切酶反应确认突变的特异性，分析每个突变位点在正常对照组中(n=50)有无分布。结果: 1、3名患者生物素酶活性正常。 2、生物素酶BT基因各个外显子及侧翼区未发现突变。 3、通过对HLCS基因的9个编码外显子进行PCR-直接测序，检测到患者1HLCS基因第11号外显子上第1522位碱基由C变为T(1522C＞T)，引起第508位密码子由CGG转变为TGG，使原来编码的精氨酸被色氨酸取代(R508W)。患者1的父母是R508W突变的杂合子。患者2是Y456C与R508W复合杂合突变。第11号外显子上第1522位碱基为碱基T和C的重叠峰，即该位点为R508W突变杂合子。第9号外显子上第1367位碱基由A转变为G(1367A＞G)，引起第456位密码子发生TAT＞TGT改变，使酪氨酸被半胱氨酸取代(Y456C)。患者2的父亲是Y456C突变的杂合子，母亲是R508W突变的杂合子。患者3是R508W与D634N复合杂合突变。第11号外显子上第1522位碱基为碱基T和C的重叠峰，即该位点为R508W突变杂合子。第13号外显子上第1900位碱基由G转变为A(1900G＞A)，引起第634位密码子发生GAT＞AAT改变，使天冬氨酸被天冬酰胺取代(D634N)。患者3的父亲是R508W突变的杂合子，母亲是D634N突变的杂合子。 4、根据突变导致的酶切位点的改变，对患者、各自的父母及50例正常人进行限制性内切酶反应，R508W、Y456C和D634N分别在50例正常人(100个等位基因位点)中均未发现这3个突变。结论: 1.3例广东地区MCD患者BT酶活性均正常，皆为HLCS基因发生了突变，结合北京、香港和台湾地区报道，可能在中国南方地区MCD患者多为HLCS基因缺陷。 2.HLCS基因的R508W突变可能是我国HLCSD患者的突变热点，各个国家HLCS基因突变有其各自的特点。 3.本研究发现的3种突变国外已报道为致病突变，但是与临床表型之间的相关性有待于进一步探讨。R508W突变与迟发表型相关，生物素治疗及预后较好。 4.本实验采用的PCR-直接测序技术和PCR-RFLP技术对MCD基因突变检测是一种有效的方法。收起

关键词 : 多种羧化酶缺陷症先天遗传代谢性疾病全羧化酶合成酶缺陷症 HLCS基因缺陷基因突变儿科学

4. 肌-眼-脑病病理生理机制的实验研究

[学位论文] 李小凤重庆医科大学 2007年博士导师: 胡长林共110页

摘要 : 背景：肌-眼-脑病是一种常染色体隐性遗传性疾病，为编码N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖转移酶 1(protein-O-linked manrloseβ1，2-N-acetylglucosaminyl -transferase1，POMGnT1)的基因缺陷，临床表现为严重的肌营养不良、眼缺陷以及智力障碍。为了阐... 展开背景：肌-眼-脑病是一种常染色体隐性遗传性疾病，为编码N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖转移酶 1(protein-O-linked manrloseβ1，2-N-acetylglucosaminyl -transferase1，POMGnT1)的基因缺陷，临床表现为严重的肌营养不良、眼缺陷以及智力障碍。为了阐明该病的病理生理机制已经进行了许多研究，发现患者或者动物模型的脑内存在神经元迁移异常。然而，迄今为止，神经元迁移异常是如何发生的、生物体内还有哪些继发变化等问题还没有得到解决。目的：探讨肌-眼-脑病的病理生理机制，了解该病神经元迁移缺陷的发生过程以及基因表达谱的变化。方法： 1．产生POMGnT-1 基因敲除小鼠并确定基因型，以同一窝的野生型小鼠作为正常对照。 2．应用免疫荧光染色的方法显示小脑基底膜层、胶质细胞界膜和颗粒细胞的发育；免疫荧光双标染色的方法显示Laminin和胶质细胞酸性蛋白之间的关系；应用高尔基染色显示小脑的细胞形态。 3．进行BrdU皮下注射，免疫标记识别 S 期的分裂细胞，进行出生后日期计数。 4．应用电镜分析来检查软脑膜基底膜层的完整性和颗粒细胞的分化情况。 5．应用 YFPH 小鼠显示由黄色荧光蛋白标记的苔藓纤维。 6.分离小脑皮质，提取mRNA。 7.利用Affymetrix公司的基因芯片，获取 POMGnT-1 基因敲除小鼠小脑皮质的基因差异表达谱，通过该公司的信息分析中心，进一步分析微阵列信息。 8.合成cDNA，行实时定量PCR证实微阵列数据。结果： 1.POMGnT-1 基因敲除小鼠的软脑膜基底膜层局灶的缺口和胶质细胞界膜的破坏与外生发层的细胞异位明确相关。Bergman 胶质细胞的纤维回缩、紊乱、或突出到异位区域，缺乏正常的 Bergman 胶质细胞纤维的脚手架是导致神经元迁移失败的原因。不过，异位的 EGL 细胞可以发育成成熟的颗粒细胞，并与苔藓纤维形成突触。 2.和野生型相比较，POMGnT-1缺陷小鼠的大多数的基因的表达水平增加。在这些基因中，S100 钙结合蛋白、酪氨酸羟化酶、小脑锌指样蛋白、calbindin 2、鸟苷酸结合蛋白增加的 fold 数较高，分别为27.39、13.97、13.94、11.64、11.00；仅有少数的几个基因的表达水平下降，分别为神经丝3-M、POMGnT-1和一个编码未知蛋白的基因。表达变化的基因分成转录、代谢、发育、信号转导、迁移、糖基化等组，其中，转录、代谢、发育、信号转导组发生变化的基因较多。结论： 1.在POMGnT-1基因敲除小鼠中，导致小脑颗粒细胞异位的原因是软脑膜基底膜层和胶质细胞的界膜的破裂，而颗粒细胞迁移到 IGL 并非是分化所必需。 2.POMGnT-1 的基因缺陷小鼠的基因表达谱则为进一步研究 MEB 的病理生理机制提供了新的线索。收起

关键词 : 神经元迁移软脑膜基底膜层胶质细胞基因芯片常染色体疾病隐性遗传性疾病基因缺陷免疫荧光染色