摘要: 背景：肌-眼-脑病是一种常染色体隐性遗传性疾病，为编码N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖转移酶 1(protein-O-linked manrloseβ1，2-N-acetylglucosaminyl -transferase1，POMGnT1)的基因缺陷，临床表现为严重的肌营养不良、眼缺陷以及智力障碍。为了阐... 展开 背景：肌-眼-脑病是一种常染色体隐性遗传性疾病，为编码N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖转移酶 1(protein-O-linked manrloseβ1，2-N-acetylglucosaminyl -transferase1，POMGnT1)的基因缺陷，临床表现为严重的肌营养不良、眼缺陷以及智力障碍。为了阐明该病的病理生理机制已经进行了许多研究，发现患者或者动物模型的脑内存在神经元迁移异常。然而，迄今为止，神经元迁移异常是如何发生的、生物体内还有哪些继发变化等问题还没有得到解决。 目的： 探讨肌-眼-脑病的病理生理机制，了解该病神经元迁移缺陷的发生过程以及基因表达谱的变化。 方法： 1．产生POMGnT-1 基因敲除小鼠并确定基因型，以同一窝的野生型小鼠作为正常对照。 2．应用免疫荧光染色的方法显示小脑基底膜层、胶质细胞界膜和颗粒细胞的发育；免疫荧光双标染色的方法显示Laminin和胶质细胞酸性蛋白之间的关系；应用高尔基染色显示小脑的细胞形态。 3．进行BrdU皮下注射，免疫标记识别 S 期的分裂细胞，进行出生后日期计数。 4．应用电镜分析来检查软脑膜基底膜层的完整性和颗粒细胞的分化情况。 5．应用 YFPH 小鼠显示由黄色荧光蛋白标记的苔藓纤维。 6.分离小脑皮质，提取mRNA。 7.利用Affymetrix公司的基因芯片，获取 POMGnT-1 基因敲除小鼠小脑皮质的基因差异表达谱，通过该公司的信息分析中心，进一步分析微阵列信息。 8.合成cDNA，行实时定量PCR证实微阵列数据。 结果： 1.POMGnT-1 基因敲除小鼠的软脑膜基底膜层局灶的缺口和胶质细胞界膜的破坏与外生发层的细胞异位明确相关。Bergman 胶质细胞的纤维回缩、紊乱、或突出到异位区域，缺乏正常的 Bergman 胶质细胞纤维的脚手架是导致神经元迁移失败的原因。不过，异位的 EGL 细胞可以发育成成熟的颗粒细胞，并与苔藓纤维形成突触。 2.和野生型相比较，POMGnT-1缺陷小鼠的大多数的基因的表达水平增加。在这些基因中，S100 钙结合蛋白、酪氨酸羟化酶、小脑锌指样蛋白、calbindin 2、鸟苷酸结合蛋白增加的 fold 数较高，分别为27.39、13.97、13.94、11.64、11.00；仅有少数的几个基因的表达水平下降，分别为神经丝3-M、POMGnT-1和一个编码未知蛋白的基因。表达变化的基因分成转录、代谢、发育、信号转导、迁移、糖基化等组，其中，转录、代谢、发育、信号转导组发生变化的基因较多。 结论： 1.在POMGnT-1基因敲除小鼠中，导致小脑颗粒细胞异位的原因是软脑膜基底膜层和胶质细胞的界膜的破裂，而颗粒细胞迁移到 IGL 并非是分化所必需。 2.POMGnT-1 的基因缺陷小鼠的基因表达谱则为进一步研究 MEB 的病理生理机制提供了新的线索。 收起