摘要: 第一部分 Wiskott-Aldrich综合征基因、蛋白与临床研究 目的：建立中国最大的 Wiskott-Aldrich综合征（WAS）患儿数据库，探讨基因型与临床表型及远期预后的关系。 方法：2011年2月~2012年9月，收集21例WAS患儿外周静脉血，流式细胞术（FCM）检... 展开 第一部分 Wiskott-Aldrich综合征基因、蛋白与临床研究 目的：建立中国最大的 Wiskott-Aldrich综合征（WAS）患儿数据库，探讨基因型与临床表型及远期预后的关系。 方法：2011年2月~2012年9月，收集21例WAS患儿外周静脉血，流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMCs）中 WAS蛋白（WASp）表达，并对WASp基因直接双向测序分析突变情况。随访2000年4月~2012年9月确诊的81例WAS患儿临床资料，分析基因型与临床表型及远期预后的关系。 结果：81例男性患儿，9例为X连锁血小板减少症（XLT），临床表型评2分；56例为典型WAS，评3/4分；12例发生自身免疫性疾病及1例发生恶性肿瘤，评5分；3例评分不详。FCM检测64例患儿PBMCs中WASp表达，40例不表达，18例单峰部分表达，6例双峰部分表达。78例患儿WASp基因测序共发现60种不同突变，包括20种新发突变及8种热点突变。其中，错义突变17例，无义突变17例，插入突变5例，缺失突变16例，拼接位点突变19例，及复合突变4例。XLT患儿8例为错义突变，1例基因突变未明确；5例WASp单峰减少表达，2例不表达，2例未检测。典型WAS患儿包括31例无义/插入/缺失突变，15例拼接位点突变，6例错义突变，2例复合突变，2例基因突变未明确；32例WASp不表达，10例单峰减少表达，2例双峰减少表达，12例未检测。评5分患儿有4例无义突变（包括2例回复突变），4例拼接位点突变，3例错义突变，1例缺失突变，1例复合突变；6例WASp不表达，4例双峰减少表达，3例单峰减少表达。未接受造血干细胞移植的57例患儿，远期生存率典型WAS组低于XLT组（P=0.18），非错义突变组低于错义突变组（P=0.26，0.55），WASp阴性组低于WASp阳性（单峰/双峰）组（P=0.08，0.20）。 结论：WASp基因突变将不同程度影响患儿临床表型及远期预后。错义突变及可产生正常拼接产物的拼接位点突变患儿可有部分 WASp表达，临床表型较轻，远期预后较好；WASp不表达的典型WAS患儿则需及早接受免疫重建治疗。 第二部分 WASp基因突变对细胞免疫功能的影响 目的：检测Wiskott-Aldrich综合征（WAS）患儿Th1、Th2、Th17及Treg细胞数量，探讨WASp基因突变对CD4+T细胞免疫功能的影响。 方法：2011年3月~2012年7月，收集14例WAS患儿、23例同龄健康儿童及14例健康成人外周血，流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMCs）中Th1、Th2、Th17及Treg细胞分别占CD4+T细胞比例，分析CD4+T细胞亚群变化，探讨WASp基因突变对CD4+T细胞免疫功能的影响。 结果：14例WAS患儿与23例同龄健康儿童平均年龄分别为1.97岁及1.89/2.41岁（P=0.912/0.677），14例健康成人平均年龄为30.79岁。FCM检测PBMCs中CD4+T细胞各亚群数量，WAS患儿Th1/CD4+T细胞为18.28±11.08，与同龄健康儿童15.89±6.34相当（P=0.478），而显著低于健康成人31.86±11.67（P=0.004）；患儿 Th2/CD4+T细胞为1.20±1.02，与同龄健康儿童0.78±0.46及健康成人0.68±0.58相当（P=0.177，0.112）；患儿Th17/CD4+T细胞为1.47±0.76，与同龄健康儿童0.99±0.51及健康成人1.96±0.85相当（P=0.058，0.123）；患儿Treg/CD4+T细胞为2.88±1.19，显著低于同龄健康儿童4.80±1.37（P=0.003），而与健康成人3.55±0.68相当（P=0.081）。 结论：WAS患儿1型T辅助/效应细胞（Th1）显著低于健康成人可能与年龄因素相关，而调节性 T细胞（Treg）显著低于同龄健康儿童则提示 Treg产生及功能缺陷可能是 WAS患儿易发生自身免疫性疾病的关键因素，其作用机制有待进一步研究。 收起