摘要: 本文从以下几个方面进行论述: 第一部分 小鼠巩膜中NLRP3炎症小体与近视形成的相关性研究 目的:观察FDM小鼠近视的形成与其巩膜中NLRP3及其信号通路相关因子的表达水平是否具有相关性。 方法:选取健康的雄性3周龄野生型C57BL/6j小鼠54只，将... 展开 本文从以下几个方面进行论述: 第一部分 小鼠巩膜中NLRP3炎症小体与近视形成的相关性研究 目的:观察FDM小鼠近视的形成与其巩膜中NLRP3及其信号通路相关因子的表达水平是否具有相关性。 方法:选取健康的雄性3周龄野生型C57BL/6j小鼠54只，将其随机分为实验组( n=12)与空白对照组( n=6)各3组，实验组按眼部遮盖时间不同进行分组:FDM2组为遮盖2周、FDM4组为遮盖4周、FDM5组为遮盖4周后去除遮盖1周。所有小鼠均以右眼为遮盖眼，左眼为对照眼。在实验终点时测量组内所有小鼠的屈光度后处死小鼠，取出眼球并测量眼轴长度，而后将巩膜组织分离并进行免疫组化和Western blot以测定NLRP3炎症小体及其信号通路下游因子的表达水平。三个空白对照组中小鼠的存活周龄分别与实验组对应，除不进行眼部遮盖外，其他处理与同周龄实验组完全相同。 结果:实验组的对照眼与同周龄组的空白对照眼相比，屈光度、眼轴长度及相关细胞因子的表达水平均无显著差异(p＞0. 05);相比于对照眼与同周龄空白对照眼,FDM2组与FDM4组实验眼均出现近视漂移与眼轴增长，且FDM4组实验眼的改变更为显著(p＜0. 05);此外，相较于对照眼，两组实验眼巩膜中均出现NLRP3、caspase-1、IL-1 β和MMP-2的表达水平上调及Collagen-1表达水平下降(p＜0. 05)。而在FDM5组中，实验眼与对照眼的眼轴及屈光度差异不显著(p＞0.05),且FDM5组实验眼巩膜中各检测指标的表达水平(除Collagen-1)均低于FDM4组实验眼。 结论:FDM小鼠巩膜组织中可检测到NLRP3炎症小体及其信号通路下游因子的表达,且其表达水平与小鼠近视进展情况相关。 第二部分 NLRP3敲减对小鼠屈光发育的影响与机制研究 目的:观察NLRP3-/-小鼠进行FDM建模时其近视进展程度、巩膜中NLRP3及其信号通路相关因子表达水平与野生型FDM小鼠的差异，以明确NLRP3敲减对小鼠屈光发育的影响及可能的机制。 方法:选取健康的雄性3周龄NLRP3纯合C57BL/6j小鼠54只，分组方案及处理方法与第一部分研究相同。为实现与第一部分结果的可比性，通过image-j将western-blot图像转化为相对灰度值，通过IRS将免疫组化图像量化评分。 结果:同周龄组的野生型和NLRP3-/-型小鼠的空白对照眼的屈光水平及相关细胞因子表达水平无统计学差异(p＞0.05)。相较于其他NLRP3-/-组别，FDM4组中实验眼的近视漂移与眼轴延长最显著;这一结果与野生型小鼠中的结果类似，但NLRP3-/-小鼠实验眼的近视漂移程度与眼轴延长程度低于同周龄组的野生型小鼠的实验眼。FDM2和FDM4组实验眼中IL-1β、IL-18、Caspase-1、MMP-2表达水平仍高于对照眼( p＜0. 05),但总体表达水平较野生型更低。NLRP3在NLRP3-/-组各眼中均处于低表达且差异不显著(p＞0. 05),Collagen-1表达水平则与MMP-2、Caspase-1、IL-1β等呈现负相关。 结论:NLRP3敲减减缓了 FDM小鼠的近视进展，这可能是NLRP3炎症小体通过激活MMP-2而影响Collagen-1的表达进而引起巩膜细胞外基质重塑实现的。 第三部分 NLRP3抑制剂MCC950对小鼠屈光发育的影响 目的:观察NLRP3抑制剂MCC950对野生型FDM小鼠屈光发育的影响。 方法:选取健康的雄性3周龄野生型C57BL/6j小鼠60只，将其随机分为实验组( n=10)与空白对照组( n=5)各4组，实验组分别为形觉剥夺2周且注射MCC950组，形觉剥夺4周且注射MCC950组，形觉剥夺2周且注射生理盐水组，形觉剥夺4周且注射生理盐水组，注射方式均为腹腔注射。四个空白对照组与实验组分别对应,即除不进行眼部遮盖外，其他处理与实验组相同，采集指标与处理方法与前两部分相同。此外将第一部分研究中的野生型小鼠的2、4周空白对照组数据纳入本研究,纳入时去除屈光度最高与最低的两只小鼠数据，以保证入组小鼠数量相等。 结果:在相同周龄的空白对照组小鼠中，比较注射MCC950组、注射生理盐水或不进行注射组，三组小鼠的眼轴、屈光度无显著差异(p＞0. 05);在同周龄FDM小鼠的实验眼中，NLRP3、IL-1 β、IL-18、Caspase-1和MMP-2的表达水平在注射MCC950组对照眼、注射MCC950组实验眼和注射生理盐水组实验眼中呈现渐次升高，且4周组表达高于2周组( p＜0. 05);各组中的近视漂移与眼轴也存在类似改变。 结论:MCC950可通过抑制NLRP3表达进而对FDM小鼠的近视进展产生影响。 收起