摘要: 类风湿关节炎（Rheumatoidarthritis，RA）是一种与慢性关节炎症和软骨破坏相关的自身免疫性疾病。以触发免疫细胞聚集和成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-likesynoviocytes，FLSs）增生为特征，导致软骨及硬骨的破坏及关节畸形，最终可能致残。目前，非... 展开 类风湿关节炎（Rheumatoidarthritis，RA）是一种与慢性关节炎症和软骨破坏相关的自身免疫性疾病。以触发免疫细胞聚集和成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-likesynoviocytes，FLSs）增生为特征，导致软骨及硬骨的破坏及关节畸形，最终可能致残。目前，非甾体抗炎药、细胞毒性药物和免疫抑制剂是其常用治疗方法，但由于这些药物的非特异靶向性，导致严重的副作用，如骨质疏松、肌肉萎缩和免疫功能受损等，进而限制了其应用。因此，有必要开发特异性杀伤炎症部位炎性细胞和增生FLSs的治疗方法，以提高疗效和减少毒性。现有研究表明，炎症部位分泌的趋化因子和细胞因子可以大量招募巨噬细胞，从而造成巨噬细胞向炎症部位的募集，表明巨噬细胞可作为药物载体，提高药物对RA部位的靶向效率。鉴于此，我们构建了负载铁死亡诱导剂-柳氮磺胺吡啶（SSZ）的氧化铁纳米粒子（IONPs），通过巨噬细胞摄取后，利用巨噬细胞的主动趋化作用，精准地将负载药物SSZ的IONPs递送到炎症部位，开展特异性光热/铁死亡联合治疗。利用IONPs产生的光热效应杀死巨噬细胞并触发药物快速释放，释放的IONPs在炎症酸性环境下酸解生成Fe2+，催化细胞内过氧化氢（H2O2）发生芬顿反应产生活性氧（ROS）。同时，释放的铁死亡诱导剂SSZ能抑制胱氨酸/谷氨酸反向转运体（Xc-）系统、减少谷胱甘肽（GSH）的生成、下调谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的活性和降低细胞的抗氧化能力，进一步促进脂质过氧化（LPO）的发生，与Fe2+发挥协同促铁死亡效果，从而达到高效治疗RA的目的。具体研究内容如下： 一、用于铁死亡治疗的IONPs粒径优化。采用溶剂热法合成不同尺寸（10，40和70nm）的IONPs，研究了不同粒径的IONPs对Fe2+和?OH的产生以及巨噬细胞负载量的影响。结果表明，小粒径IONPs（10nm）在酸性介质中不稳定能酸解产生更多的Fe2+，从而催化芬顿反应产生更高的?OH。而大粒径的IONPs（70nm）性质稳定，产生的Fe2+和?OH较少，但细胞摄取量较高。中间粒径的IONPs（40nm）具有较为均衡的铁死亡效果和药物负载能力，作为初级递送系统有望发挥更好的治疗效果。 二、基于巨噬细胞和IONPs的纳米靶向药物递送系统的构建及体外评价研究。首先，制备了负载SSZ的IONPs（IONP-SSZ），体外光热实验和?OH产生情况表明，IONP-SSZ具有良好光热性能与自由基产生能力。将IONP-SSZ与巨噬细胞共孵育构建了巨噬细胞载药系统（Mφ-IONP-SSZ），细胞迁移实验与炎症因子水平测定结果表明，负载IONP-SSZ不会影响巨噬细胞的功能与表型。体外光热细胞毒性证实，IONP-SSZ能通过光热作用杀死细胞。细胞抑制实验、细胞内GSH、GPX4和丙二醛（MDA）以及细胞内ROS和LPO检测结果表明，IONPs能联合铁死亡诱导剂SSZ发挥协同铁死亡效果。体外细胞毒性实验显示，IONP-SSZ能通过光热联合铁死亡作用，产生强大的细胞毒性从而杀伤FLSs。 三、基于巨噬细胞和IONPs的纳米靶向药物递送系统，用于RA的体内治疗研究。首先，构建胶原蛋白诱导的关节炎（Collageninducedarthritis，CIA）模型小鼠。活体成像结果表明，载药巨噬细胞能主动靶向关节炎症部位，具有较高和较持久的药物蓄积量。体内光热实验结果证明，静脉注射Mφ-IONP-SSZ后能产生良好的体内光热效果，Mφ-IONP-SSZ联合近红外光照射能有效抑制RA的发生，具体表现包括：治疗后CIA小鼠足爪厚度显著减小，并接近正常小鼠足爪厚度；血清中促炎细胞因子含量恢复正常水平；滑膜增生、软骨损伤和炎症细胞浸润等病理现象明显减少。 收起