摘要: 目的： 确认玉屏风加味鼻喷剂 (YPF+) 治疗大鼠变应性鼻炎 (AR) 的药效，同时以细胞焦亡为切入点探究 YPF+减轻 AR 大鼠鼻黏膜损伤的机制。 方法： 1. 药效研究：以卵清蛋白 (OVA) 诱导建立大鼠 AR 模型，造模 成功后 AR 模型组、玉屏风加味... 展开 目的： 确认玉屏风加味鼻喷剂 (YPF+) 治疗大鼠变应性鼻炎 (AR) 的药效，同时以细胞焦亡为切入点探究 YPF+减轻 AR 大鼠鼻黏膜损伤的机制。 方法： 1. 药效研究：以卵清蛋白 (OVA) 诱导建立大鼠 AR 模型，造模 成功后 AR 模型组、玉屏风加味鼻喷剂组 (50 μL/侧，每日 2次)、阳 性药组 (糠酸莫米松，50 μg/侧，每日 1 次)，每组 10 只，空白组和 模型组给予等量的生理盐水 (50 μL/侧，每日 2 次)，另设空白组，连续给药 4 周。给药 1 周、2 周、4 周观察各组大鼠行为学表现并进 行评分，采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 测定血清 IgE 水平。在 给药 4 周时，观察大鼠鼻黏膜病理变化，并通过ELISA 法检测鼻咽冲 洗液 sIgA、IL-6 水平。 2.机制研究：采用 DCFH-DA探针法测定鼻黏膜 ROS水平；采用免疫组化法 (IHC)、蛋白免疫印迹法 (Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应 (qRT-PCR) 法测定鼻黏膜中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 ( NLRP3 )、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1 (Caspase-1)、消皮素 D 蛋白 (GSDMD)蛋白及 mRNA 表达；采用ELISA 测定大鼠血清中白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 18 (IL-18) 水平。 结果： 1. 药效研究：(1) 一般状况观察结果表明，较模型组大鼠相比， YPF+给药 4 周时大鼠一般状况更好，接近空白组大鼠的一般情状况。(2) 行为学观察结果表明，与模型组相比，YPF+给药 1 周、2周、4 周大鼠喷嚏、鼻塞，及流鼻涕次数减少，行为学评分均显著降低 (P ＜0.05)，且 YPF+给药 4 周时行为学评分最低。(3) 鼻黏膜病理切片 观察结果表明，与模型组相比，YPF+给药 4 周大鼠鼻黏膜炎性细胞浸 润减轻，上皮层修复，可见明显的再生微绒毛，病理评分显著降低 (P ＜0.05)。(4) ELISA 血清 IgE 水平检测结果表明，与模型组相比， YPF+给药 1 周、2 周、4 周大鼠血清 IgE 水平均显著降低 (P＜0.05)，且 YPF+给药 4 周时大鼠血清 IgE 水平最低。(5) ELISA 鼻咽冲洗液 sIgA 水平检测结果表明，与模型组相比， YPF+给药 4 周大鼠鼻咽冲 洗液 slgA 水平显著降低 (P＜0.05)。(6) ELISA 鼻咽冲洗液 IL-6 水 平检测结果表明，与模型组相比，YPF+给药 4 周大鼠鼻咽冲洗液 IL-6 水平显著降低 (P＜0.05)。 2. 机制研究：(1) DCFH-DA 探针法鼻黏膜 ROS 水平检测结果表明，与模型组相比，YPF+给药显著降低了大鼠鼻黏膜组织的 ROS水平 (P＜0.05)。(2) IHC 法鼻黏膜 NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白表达 检测结果表 明，YPF+给药显著 降低 了大 鼠鼻黏膜组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白的表达 (P＜0.05)。(3) WB 法鼻黏膜 NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白表达检测结果表明，YPF+给药显著降低了大 鼠鼻黏膜组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白的表达 (P＜0.05)。(4) RT-PCR 法鼻黏膜 NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA 表达检测结果表明，YPF+给药显著降低了大鼠鼻黏膜组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA 的表达 (P＜0.05)。(5)ELISA 血清 IL-1β、IL-18 水平检测结果表明，YPF+给药显著降低了大鼠血清 IL-1β、IL-18 水平 (P＜0.05)。 结论： YPF+ 可能是通过降低鼻黏膜ROS的产生，调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD 途径来抑制细胞焦亡，抑制细胞焦亡介导的 过度炎症反应，从而缓解、修复鼻黏膜损伤，使大鼠打喷嚏、鼻痒、流鼻涕等症状缓解，起到治疗 AR 的作用。 收起