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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的:探讨KIF20A在肾透明细胞癌发生发展过程中的潜在生物学作用及其机制。 方法:应用TCGA数据库及生物信息学技术挖掘及筛选与肾透明细胞癌发生发展相关的关键基因,使用GEPIA在线工具进行生存分析。在收集到的10例肾透明细胞癌肿瘤样本及其配对... 展开 目的:探讨KIF20A在肾透明细胞癌发生发展过程中的潜在生物学作用及其机制。 方法:应用TCGA数据库及生物信息学技术挖掘及筛选与肾透明细胞癌发生发展相关的关键基因,使用GEPIA在线工具进行生存分析。在收集到的10例肾透明细胞癌肿瘤样本及其配对的癌旁组织中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别在mRNA水平和蛋白水平检测KIF20A基因的表达量。采用免疫组织化学(IHC)法检测72例临床肾透明细胞癌肿瘤样本中KIF20A的定位与表达水平。培养包括四株肾透明细胞癌细胞株ACHN、786-O、Caki-1和Caki-2以及一株人肾小管上皮细胞株HK2,使用Westernblot确定KIF20A相对高表达的细胞株。使用分别包被三段shRNA序列的三种慢病毒感染细胞株,根据细胞株MOI值设置感染梯度,用GFP荧光强弱及比例判断转染及KIF20A沉默效率;用嘌呤霉素筛选稳转株。通过CCK8检测肿瘤细胞的增殖情况;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡、细胞周期;细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力;体内环境下的裸鼠皮下成瘤实验检测KIF20A表达水平对肿瘤生长的影响。 结果:GO和KEGG分析结果表明,TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达基因主要参与炎症反应、细胞表面受体信号通路、分泌等10个生物学过程。KEGG的主要富集途径有细胞粘附分子、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用、排斥反应、细胞因子-细胞因子受体相互作用等,最后筛选出7个核心候选基因:ASPM、NCAPG、NUSAP1、KIF20A、Bub1、AURKB和TPX2。基因差异表达分析结果表明,Bub1和KIF20A在在肿瘤组织中的表达高于癌旁组织(P<0.001)。生存分析显示,ASPM、AURKB、Bub1、TPX2和KIF20A基因高表达的患者总体生存率(OS)和无病生存率(DFS)较低。PCR和Westernblot实验结果表明,无论是蛋白水平还是mRNA水平,KIF20A在肾透明细胞癌组织中的表达都高于癌旁组织(P<0.001)。72例肾透明细胞癌免疫组织化学实验检测结果表明,KIF20A高表达的患者有着更高的病理分级(P=0.004),临床分期更晚(P=0.017),同时也有着更大的肿瘤体积(P=0.040)。选择KIF20A相对高表达的ACHN和786-O进行体外细胞实验。CCK-8实验结果表明KIF20A基因沉默可抑制ACHN和786-O细胞的增殖;Transwell实验表明KIF20A基因沉默抑制了肾透明细胞癌的侵袭和迁移能力。细胞流式实验表明KIF20A基因沉默可诱导肿瘤细胞的细胞周期进程阻滞在S/G2期并诱导肿瘤细胞凋亡。体内环境裸鼠皮下成瘤实验结果表明,来自KIF20A基因沉默的肾透明细胞癌细胞生成的肿瘤体积更小。 结论:KIF20A在肾透明细胞癌中表达上调,其高表达提示临床预后不良。沉默KIF20A可以抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。提示KIF20A可能是肾细胞癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。 收起
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