摘要: 背景和目的： 肝纤维化是肝脏结缔组织异常增生的病理过程，是长期肝损伤后慢性伤口愈合反应的结果。如果不进行干预，肝纤维化会逐渐进展成肝硬化，甚至恶化为肝癌。因此，我们有必要探索肝纤维化的发病机制并积极寻找特异性的靶点进行治疗。肝纤... 展开 背景和目的： 肝纤维化是肝脏结缔组织异常增生的病理过程，是长期肝损伤后慢性伤口愈合反应的结果。如果不进行干预，肝纤维化会逐渐进展成肝硬化，甚至恶化为肝癌。因此，我们有必要探索肝纤维化的发病机制并积极寻找特异性的靶点进行治疗。肝纤维化与肝星状细胞（HepaticStellateCell,HSC）的激活密切相关，且超过80%以上的细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）产生都是由肝星状细胞负责。白藜芦醇（resveratrol，Res），化学名称为3,4'',5-三羟基二苯乙烯，是一种广泛存在于不同植物和水果中的天然多酚化合物，具有多种活性作用，包括抗氧化自由基、调节脂蛋白代谢、抗炎、抗血管生成、抗菌、抗衰老，抗纤维化和抗肿瘤等。Hippo信号通路是一条进化上高度保守的信号通路，近年来的研究表明其在调节细胞周期进程、增殖、凋亡和器官生长等方面具有重要作用。但令人遗憾的是，目前关于Hippo信号通路调控肝纤维化进展的相关研究尚在起步阶段，其涉及的分子机制仍不清楚。 方法： 1.白藜芦醇是否可以有效抑制肝纤维化的发生发展 动物层面，通过体内注射CCl4构建肝纤维化模型，治疗组同时接受白藜芦醇灌胃处理。实验结束时，用10%水合氯醛麻醉小鼠，取血灌流后，取肝脏组织进行HE染色和Masson染色。 细胞层面，采用不同浓度的白藜芦醇处理人肝星状细胞LX-2，然后利用WesternBlot、CCK8、免疫荧光、实时无标记动态细胞分析技术和实时荧光定量PCR等技术方法检测肝星状细胞的增殖及凋亡。 2.白藜芦醇抑制肝星状细胞活性相关分子的机制探讨 分别提取正常组及用白藜芦醇处理后LX-2细胞的相关RNA样本，用于完成样品的质量检测（RNA纯度、完整度和浓度）。我们对检测合格的样本进行了转录组测序以获取正常组与白藜芦醇处理组之间的差异基因；随后采用KEGG方法分析，以进一步明确白藜芦醇抑制肝纤维化的下游分子机制。 3.初步明确白藜芦醇抑制肝纤维化进程与Hippo信号通路有关 通过采用WesternBlot、免疫荧光和实时荧光定量PCR等方法，确定了白藜芦醇抑制肝纤维化是通过激活Hippo信号通路。 4.再次验证白藜芦醇抑制肝纤维化进程涉及Hippo信号通路 在使用Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1来抑制该通路活性后，通过采用WesternBlot、免疫荧光和实时荧光定量PCR等方法检测肝星状细胞的活性是否有效提高。 结果： 1.HE染色和Masson染色结果共同证实白藜芦醇能有效抑制CCl4小鼠肝纤维化进程。CCK8实验表明白藜芦醇能抑制肝星状细胞增殖活性。此外，白藜芦醇抑制了肝纤维化相关分子表达且增强了凋亡水平。 2.转录组测序结果揭示：与对照组相比，白藜芦醇组新增了大量的差异基因，KEGG分析显示白藜芦醇对肝星状细胞活性的抑制与Hippo信号通路高度相关。3.免疫荧光，PCR和WesternBlot结果共同表明，Hippo信号通路相关分子YAP和TAZ均被白藜芦醇有效下调，提示该通路被激活。 4.XMU-MP-1抑制了白藜芦醇诱导的Hippo信号通路活性上调并恢复了肝星状细胞活性，再次证实白藜芦醇抑制肝纤维化进展与Hippo信号通路有关。 结论： 白藜芦醇能激活Hippo信号通路，导致肝星状细胞凋亡增多并伴随活性降低，进而抑制肝纤维化的发生发展过程。 收起