摘要: 目的：肺动脉高压（PAH）发病机制复杂，涉及多个通路，雌激素对肺动脉高压有保护作用，但雌激素与乳酸代谢在肺动脉高压发病机制中相关联系尚不明确，本研究主要研究雌激素对肺动脉高压的保护机制，探究在此过程中雌激素对M2型丙酮酸激酶（PKM2）的作... 展开 目的：肺动脉高压（PAH）发病机制复杂，涉及多个通路，雌激素对肺动脉高压有保护作用，但雌激素与乳酸代谢在肺动脉高压发病机制中相关联系尚不明确，本研究主要研究雌激素对肺动脉高压的保护机制，探究在此过程中雌激素对M2型丙酮酸激酶（PKM2）的作用通路，进而影响糖酵解代谢产物乳酸含量，为肺动脉高压靶向治疗提供新的思路。 方法： 将42只雌性SD大鼠按随机数字表法平均分为7组（各组n=6）：假手术+常氧组、假手术+低氧组、去势+常氧组、去势+低氧组、去势+常氧+17β-雌二醇（E2）组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+PKM2特异性激动剂（TEPP-46）组。去势组即手术切除卵巢；而非去势组（假手术组）则打开腹腔找到卵巢不予处理，直接还纳缝合。低氧组置于低氧箱内饲养，常氧组则给予正常空气。去势+常氧+E2组与去势+低氧+E2组给予E2[20ug/(kg·d)]皮下注射，其余组皮下注射生理盐水。去势+低氧+PKM2特异性激动剂（TEPP-46）组给予TEPP-46[5mg/(kg·2d)]腹腔注射，其余组腹腔注射生理盐水。饲养8周建立低氧性肺动脉高压模型。通过右心导管检测每组动物的平均肺动脉压（mPAP）并称量左右心室、室间隔以计算右心室肥厚指数（RVHI），HE法染色后观察肺小血管形态学变化并检测WA%（血管壁占血管总面积）和WT%（肺小动脉中膜厚度比）。试剂盒法测量乳酸的生成量、丙酮酸水平，免疫荧光法测量活性氧（ROS）表达，免疫荧光法显示PKM2分布及强度，免疫组织化学法测量肺组织及细胞核内PKM2蛋白水平。 结果： 1.成功建立了低氧性肺动脉高压大鼠模型 低氧组大鼠较常氧组反应迟钝、毛色晦暗、呼吸频率加快、进食水量及活动量均减少，无死亡标本。去势+低氧+E2组较去势+低氧组增长速度快，活动度好。去势+低氧+PKM2特异性激动剂（TEPP-46）组与去势+低氧+E2组生长速度差异不明显，但均较常氧组缓慢。 2.各组样本的mPAP和RVHI 低氧组较常氧组的mPAP和RVHI均升高（P均lt;0.05），且符合肺动脉高压的压力水平。相比于去势+低氧组，去势+低氧+E2组、去势+低氧+PKM2特异性激动剂（TEPP-46）组大鼠mPAP和RVHI均降低（P均lt;0.05），提示雌激素、TEPP-46均可不同程度改善低氧性肺动脉高压。 3.各组肺组织的形态学改变 假手术+低氧组与去势+低氧组肺动脉壁增厚，动脉管腔明显狭窄，而去势+低氧+E2组、去势+低氧+PKM2特异性激动剂（TEPP-46）组肺动脉管腔出现不同程度的逆转。其WA%及WT%也均较去势+低氧组小。 4.各项研究指标结果 与常氧组大鼠相比，低氧条件下大鼠的乳酸生成量、丙酮酸水平、ROS表达、肺组织PKM2蛋白水平及细胞核PKM2蛋白水平均明显增加，有统计学差异（Plt;0.05）；PKM2免疫荧光结果显示低氧组免疫荧光强度明显强于常氧组，去势+低氧+E2组及去势+低氧+TEPP-46组较去势+低氧组免疫荧光强度稍减弱，但大鼠肺组织细胞核PKM2水平明显降低，有统计学差异（Plt;0.05），提示PKM2核转位减少。 结论： 长期慢性低氧可诱导低氧性肺动脉高压的发生，Warburg效应使得乳酸含量增多，17β-雌二醇可通过减少ROS进而增强PKM2活性，抑制其核转位，使Warburg效应降低，降低乳酸水平，从而改善肺动脉高压。 收起