摘要: 背景与目的：胰腺癌是比较常见且恶性程度很高的消化系统肿瘤。近些年，胰腺癌的发病率逐步上升，同时，每年因胰腺癌而死亡的人也在逐渐增加。目前，手术切除仍然是唯一能达到治愈效果的治疗方式，但只有极少数的病人具备接受手术治疗的条件。对于转... 展开 背景与目的：胰腺癌是比较常见且恶性程度很高的消化系统肿瘤。近些年，胰腺癌的发病率逐步上升，同时，每年因胰腺癌而死亡的人也在逐渐增加。目前，手术切除仍然是唯一能达到治愈效果的治疗方式，但只有极少数的病人具备接受手术治疗的条件。对于转移性胰腺癌和晚期胰腺癌患者，目前的治疗手段主要是全身化疗，但5年平均生存率依旧不到10%。柠檬苦素是一种可以从中药和柑橘中提取到的四环三萜类化合物。除了抗炎、抗病毒和抗氧化等生物活性外，柠檬苦素也被证实具有广泛的抗肿瘤作用。它可以通过诱导凋亡和抑制肿瘤干细胞等方式在肝癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤中起到抗癌作用。然而，该化合物在胰腺癌中的抗癌作用及作用机制仍然不清楚。因此，本次研究的目的在于初步探讨柠檬苦素在胰腺癌中的抗癌作用及其潜在的分子机制。 方法：（1）通过CCK8实验检测不同浓度（0、5、10、20、30、40、50、60、70、80μM）的柠檬苦素对人胰腺癌细胞系PANC-1和Patu-8988的细胞活力的抑制效果。（2）RTCA和平板克隆实验检测加入0、20、50μM柠檬苦素后的胰腺癌细胞的增殖能力变化情况。（3）免疫荧光检测加入柠檬苦素后的胰腺癌细胞中的Ki67的细胞定位及蛋白表达情况。（4）划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测柠檬苦素对胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力的抑制效果。（5）流式细胞仪检测柠檬苦素在胰腺癌细胞中的促凋亡作用。（6）通过裸鼠成瘤实验检验柠檬苦素在体内对胰腺癌生长的抑制作用。（7）Westernblot检测细胞和组织中Ki67、E-cadherin、α-SMA、Bcl-2、Bax及JAK2/STAT3通路蛋白的表达情况。 结果：（1）首先通过CCK8实验确定了柠檬苦素可以呈浓度依赖性的方式抑制胰腺癌细胞PANC-1和Patu-8988的细胞活性以及柠檬苦素在两种细胞中的IC50值。（2）RTCA和平板克隆实验结果显示柠檬苦素能明显抑制胰腺癌细胞的增殖能力，且高浓度的抑制效果更强于低浓度。（3）与对照组相比，在用柠檬苦素处理后，两种胰腺癌细胞中的Ki67的表达水平均明显降低，下降幅度与柠檬苦素浓度具有相关性。（4）柠檬苦素可以呈浓度依赖性的方式减弱胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。（5）WB的结果显示柠檬苦素处理后的胰腺癌细胞中的E-cadherin表达升高，而α-SMA的表达降低。(6)流式细胞仪显示柠檬苦素可以呈浓度依赖性方式诱导胰腺癌细胞发生凋亡，高浓度作用时的诱导效果更强。（7）WB结果显示柠檬苦素可以上调Bax蛋白的表达同时下调Bcl-2表达，在高浓度时两个蛋白的表达差异更加明显。（8）WB结果显示柠檬苦素可以显著降低PANC-1和Patu-8988细胞中JAK2和STAT3的磷酸化水平。（9）体内实验证明柠檬苦素可以通过下调JAK2和STAT3的磷酸化水平来诱导内源性凋亡，从而抑制胰腺癌的生长。 结论：（1）柠檬苦素可以呈浓度依赖性方式抑制胰腺癌的增殖、迁移和侵袭，并诱导其发生内源性凋亡。（2）柠檬苦素可以通过调控EMT来抑制胰腺癌细胞的转移。（3）柠檬苦素可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路来发挥其抗胰腺癌的作用。因此，柠檬苦素或许能在未来被应用于胰腺癌的治疗中。 收起