摘要: 在实际生产中，雌性翘嘴鲌较雄鱼而言具有2龄后体型大、生长迅速等优势，通过人工诱导雌核发育技术实现翘嘴鲌雌性单性化养殖具有重要意义。转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGFβ）超家族是一组具有结构相关性的多功能细胞因子，在细胞增... 展开 在实际生产中，雌性翘嘴鲌较雄鱼而言具有2龄后体型大、生长迅速等优势，通过人工诱导雌核发育技术实现翘嘴鲌雌性单性化养殖具有重要意义。转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGFβ）超家族是一组具有结构相关性的多功能细胞因子，在细胞增殖、分化和生长过程中具有重要作用。该家族的多个基因均已被证明直接或间接与肌肉生长发育相关，拥有多个肌肉特异性靶基因。为了探讨TGFβ/Smad信号通路中相关基因对雌核发育翘嘴鲌生长发育的作用，获得快速生长辅助选育标记，本文对TGFβ/Smad信号通路中TGFβ2、TGFβRⅡ、BMP2、BMPRⅡ和Smad4等5个基因mRNA编码氨基酸序列进行直接测序，SNP位点筛选并鉴定他们在普通群体、雌核发育一代和二代翘嘴鲌群体中的基因型。以普通群体为对照，分析了SNPs位点和连续两代翘嘴鲌生长性状和常规营养成分的关联性；并且对普通雌性、雌核发育一代和二代翘嘴鲌群体肌肉营养组分进行检测和分析。本研究推进了翘嘴鲌生长性状和营养成分相关的分子标记的开发，为生长迅速、养殖效益高的雌核发育翘嘴鲌繁殖群体选育工作提供理论资料。主要研究结果如下： 1.采用直接测序法对TGFβ2、TGFβRⅡ、BMP2、BMPRⅡ和Smad4等5个基因的mRNA编码氨基酸序列进行SNP位点筛选，获得14个SNP位点，均位于对应基因的开放阅读框内，除了TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G位点为非同义突变外，其他13个SNP位点均属于同义突变。利用四引物扩增受阻突变体系（Tetra-primer ARMS PCR）和飞行质谱法对翘嘴鲌候选SNP位点分型，将TGFβ2、TGFβRⅡ、BMP2、BMPRⅡ和Smad4等5个基因SNP位点的不同基因型分别与雌核发育一代、二代及普通翘嘴鲌群体的体长、体重、体厚、体高和全长关联性分析，结果发现14个SNP位点中有6个SNP位点与雌核发育翘嘴鲌群体中的上述5个重要生长性状存在显著相关，分别为TGFβ2-c.999Tgt;C、TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G、BMP2-c.1174Cgt;G、Smad4-c.1462Cgt;T、Smad4-c.1663Tgt;G、Smad4-c.1825Cgt;T。TGFβ2-c.999Tgt;C位点在雌核发育一代翘嘴鲌群体中CT基因型的5种生长性状均显著高于TT基因型CC基因型（Plt;0.05）。TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G位点在雌核发育一、二代翘嘴鲌群体中，TT基因型个体具有生长优势，5种生长性状均显著高于GG基因型和GT基因型（Plt;0.05）。BMP2-c.1174Cgt;G位点不同基因型对雌核发育群体的表型差异有显著影响，CC基因型个体具有生长优势。Smad4-c.1462Cgt;T位点在雌核发育一代、二代翘嘴鲌群体中，CC基因型的5种生长性状均显著高于TT基因型和CT基因型。Smad4-c.1825Cgt;T位点在雌核发育一代翘嘴鲌群体中不同基因型个体的5种生长性状存在显著差异。Smad4-c.1663Tgt;G位点在雌核发育一代群体中优势基因型为GG基因型、TT基因型，雌核发育二代群体中为GG基因型，该位点对翘嘴鲌生长性状的影响需要进一步研究。Real-time qRT-PCR结果显示，在三个群体中，TGFβ2-c.999Tgt;C、TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G、BMPRⅡ-c.1804Tgt;C、Smad4-c.1462Cgt;T、Smad4-c.1663Tgt;G和Smad4-c.1825Cgt;T6个SNP位点不同基因型对应基因在肌肉中的表达量均无显著差异。而在雌核一代中TGFβRⅡ-c.1979Tgt;C和BMP2-c.1174Cgt;G位点不同基因型与对应基因表达量存在显著差异，其机制需要进一步研究。综上所述，TGFβ2-c.999Tgt;C、TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G、BMP2-c.1174Cgt;G、Smad4-c.1462Cgt;T、Smad4-c.1825Cgt;T5个SNP位点具有作为雌核发育翘嘴鲌生长性状的分子标记辅助选育的潜力。 2.本研究将TGFβ2-c.999Tgt;C、TGFβRⅡ-c.1397Tgt;G、BMP2-c.1174Cgt;G、Smad4-c.1462Cgt;T、Smad4-c.1825Cgt;T位点与雌核发育一代、二代及普通翘嘴鲌肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪等常规组分的关联性分析。结果发现，雌核发育二代中，TGFβ2-c.999Tgt;C位点CC基因型粗蛋白含量显著高于TT基因型（Plt;0.05），TGFβ2-c.999Tgt;C位点具有作为雌核发育翘嘴鲌营养成分分子标记辅助选育的潜力。 3.本文对雌核发育一代、二代及普通雌性翘嘴鲌肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪等常规组分进行检测，分析了肌肉氨基酸和脂肪酸组成及含量。结果表明雌核发育翘嘴鲌和普通雌性翘嘴鲌肌肉常规营养成分组成和含量基本一致，无显著差异（Pgt;0.05）。雌核发育一代和二代甘氨酸含量、必需氨基酸所占比例、必需氨基酸氨基酸指数（EAAI）均显著高于普通翘嘴鲌（Plt;0.05）；雌核发育一代、二代亚油酸（C18：2）含量更高。因此，采用雌核发育诱导技术进行翘嘴鲌育种生产，雌核发育翘嘴鲌生长快的同时并没有营养和风味上的损失，雌核发育翘嘴鲌肌肉保持了普通翘嘴鲌高蛋白低脂肪，氨基酸种类丰富比例恰当等优良品质。本研究为翘嘴鲌饲料研究积累资料，为其全雌新品种开发利用提供参考。 收起