摘要: 乳杆菌是乳酸菌最大的一个属。植物乳杆菌、发酵乳杆菌以及鼠李糖乳杆菌的益生功能强大、应用前景广泛，得到了广泛而深入的研究。乳杆菌分布广泛，人源如口腔、肠道、母乳粪便等;非人源如天然发酵食品、土壤等。研究表明，不同来源乳杆菌的功能基因组... 展开 乳杆菌是乳酸菌最大的一个属。植物乳杆菌、发酵乳杆菌以及鼠李糖乳杆菌的益生功能强大、应用前景广泛，得到了广泛而深入的研究。乳杆菌分布广泛，人源如口腔、肠道、母乳粪便等;非人源如天然发酵食品、土壤等。研究表明，不同来源乳杆菌的功能基因组学及表型存在差异，即不同的生长环境会造成菌株特性的差异，为提高筛选具有良好特性乳杆菌的成功率，研究不同来源乳杆菌的特性差异规律具有重要意义。如今，对人源与非人源植物乳杆菌、发酵乳杆菌及鼠李糖乳杆菌在生理特性及功能特性的差异规律研究较少。本研究主要对获得的乳杆菌的部分生物学特性进行测定，通过多元统计比较不同种与来源乳杆菌的生物学特性差异。主要研究内容如下: (1)不同种与来源乳杆菌的分离。从巴马长寿老人肠道、云南传统发酵乳制品、传统发酵蔬菜进行乳杆菌的分离。通过MRS培养基富集培养，划线分离并纯化。对单菌落进行革兰氏染色并镜检，共分离得到57株乳杆菌。利用16SrDNA对分离的57株乳杆菌进行鉴定，人源植物乳杆菌13株，非人源植物乳杆菌17株;人源发酵乳杆菌为9株，非人源发酵乳杆菌3株;人源鼠李糖乳杆菌9株，非人源鼠李糖乳杆菌6株。通过测定57株乳杆菌在MRS里48h生长曲线，确定了57株乳杆菌的稳定期，结果发现92.98％乳杆菌在24h前到达稳定期。 (2)乳杆菌的生理特性及功能特性研究。对57株乳杆菌的部分生物学特性进行了测定，结果显示:所有乳杆菌都能在16h～40h凝乳，发酵乳酸度为26.98°T～88.89°T，发酵乳活菌数为7.82logCFU/mL～9.36logCFU/mL，发酵乳持水力为43.63％～78.11％;乳杆菌在pH2.0环境的存活率为0.01％～104.63％，在pH3.0环境的存活率为35.56％～170.54％，在0.1％胆盐环境的存活率为0.01％～153.33％，在0.3％胆盐环境的存活率为0.01％～67.17％;乳杆菌自聚合能力为0.73％～71.11％，疏水性为1.48％～71.81％，对Caco-2细胞的粘附能力为2.27％～50.71％;乳杆菌的发酵液抑菌能力:对大肠杆菌的抑菌圈直径为1.31cm～3.92cm，对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径1.12cm～3.54cm，对沙门氏菌的抑菌圈直径1.05cm～4.38cm;乳杆菌及其发酵液的抗氧化能力:菌体抗氧化能力为0.39mmol/gprot～0.74mmol/gprot，发酵液抗氧化能力为0.93mmol/gprot～2.17mmol/gprot;乳杆菌的免疫调节能力为:乳杆菌干预后，RAW264.7的TNF-α分泌量为45.53pg/mL～1062.19pg/mL。 (3)不同来源乳杆菌生物学特性的差异研究。以箱线图的形式呈现57株乳杆菌的部分生理特性与功能特性，从来源上对菌株特性进行独立样本t检验，发现人源乳杆菌的发酵乳活菌数与酸度显著高于非人源(p＜0.05)，人源乳杆菌对pH3.0和pH2.0的耐受能力显著高于非人源乳杆菌(p＜0.05);人源乳杆菌的发酵液体外抗氧化能力与体外粘附能力都显著高于非人源乳杆菌(p＜0.05)，对乳杆菌的部分生理特性与功能特性进行主成分分析，结果显示:主成分1(PC1)与主成分2(PC2)涵盖了凝乳时间、酸度、活菌数、pH3.0耐酸、0.3％耐胆盐、自聚合、疏水性、粘附能力、发酵液的抗氧化能力、对大肠杆菌的抑制能力以及免疫调节能力的40.9％，其中PC1为23.7％，PC2为17.2％，从来源的角度对菌株的PC1和PC2得分分别进行独立样本t检验，人源菌株在PC1得分显著高于非人源菌株(p＜0.05)，在PC2得分极显著高于非人源菌株(p＜0.01)。 (4)不同种乳杆菌生物学特性的差异研究。以箱线图的形式呈现57株乳杆菌的部分生理特性与功能特性，从种的角度对57株乳杆菌的特性进行单因素方差分析。发现鼠李糖乳杆菌的凝乳时间显著低于植物乳杆菌与发酵乳杆菌(p＜0.05)，其发酵乳活菌数以及酸度都显著高于其余乳杆菌(p＜0.05);鼠李糖乳杆菌在pH2.0的存活率显著高于其余两个种菌株(p＜0.05);乳杆菌在pH3.0环境的存活率顺序为:鼠李糖乳杆菌＞植物乳杆菌＞发酵乳杆菌;在0.3％胆盐环境的存活率排序为:植物乳杆菌＞发酵乳杆菌＞鼠李糖乳杆菌;菌体干预后，免疫低下RAW264.7细胞上清液中TNF-α含量排序为:鼠李糖乳杆菌＜植物乳杆菌＜发酵乳杆菌(p＜0.05)，对不同种乳杆菌生物学特性进行主成分分析，在PC1得分鼠李糖乳杆菌显著高于植物乳杆菌与发酵乳杆菌(p＜0.05)，但在PC2得分无显著性差异(p＞0.05)。 收起