摘要: BHMT(Betaine homocysteine methyltransferase)，即甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶，是一种Zn2+依赖的巯基甲基转移酶。本实验通过PCR和RACE技术克隆了鲈鱼(Lateolabrax japonicus)BHMT基因全长，并对其进行了结构分析，通过RT-PCR方法检测了BHMT基因在... 展开 BHMT(Betaine homocysteine methyltransferase)，即甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶，是一种Zn2+依赖的巯基甲基转移酶。本实验通过PCR和RACE技术克隆了鲈鱼(Lateolabrax japonicus)BHMT基因全长，并对其进行了结构分析，通过RT-PCR方法检测了BHMT基因在鲈鱼各组织中的分布，同时利用RT-PCR和实时荧光定量PCR检测了盐度和甜菜碱对鲈鱼各组织中BHMT基因表达的影响，为今后研究BHMT功能及鱼类渗透压调节机制奠定基础。 利用RT-PCR和SMARTRACE的方法从鲈鱼肝脏中成功克隆了BHMT全长cDNA。该序列全长1461bp，5'端非翻译区1151bp，3'端非翻译区517bp，开放阅读框(ORF)1206bp，可编码一个由401个氨基酸残基组成的蛋白质，该蛋白质理论分子量为44.32kDa、等电点为7.21。氨基酸序列分析表明，BHMT基因具有较高的保守性，鲈鱼BHMT与黄鲈(Perca flavescens)、金头鲷(Sparus aurata)、大西洋鲑(Salmo salar)、斑马鱼(Danio rerio)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)、非洲爪蟾(Xenopus laevis)、人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes)、小鼠(Mus， musculus)、牛(Bos taurus)等十个物种的同源性为77％～93％，其中与黄鲈的同源性最高，为93％。BHMT具有Zn2+依赖的硫醇和硒醇甲基转移酶家族的结构特征，即具有G(ILV)NCX结构的基序A和具有(ALV)X(2)(LV)GGCCX(3)PX(2)I结构的基序B。利用RT-PCR法检测BHMT基因在鲈鱼肌、心、眼、脑、鳃、肝、肠、肾、脂、脾组织中的表达情况，结果表明该基因在鲈鱼肝、肠和肾三个组织中均有表达，其中肝脏组织的表达量最大。 通过RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法表明鲈鱼从盐度25的海水转入盐度12的海水后，肝、肠和肾BHMT基因表达量均有增加，而将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为29的海水后，肝、肠和肾的BHMT基因表达量则减少。腹腔注射甜菜碱后，鲈鱼肝、肠和肾三个组织中的BHMT基因的相对表达量有显著的增加。结果表明，盐度剌激后对鲈鱼BHMT基因的表达量有显著影响，同时甜菜碱也可诱导鲈鱼BHMT基因的表达，说明BHMT在适应鱼类环境渗透压变化中起到重要的作用。 收起