摘要: CD4(Cluster of differentiation 4)分子是一类单链跨膜蛋白，目前研究发现该蛋白主要表达于胸腺及成熟的T细胞表面，作为MHCⅡ(Maior histocompatibility complexⅡ，主要组织相容性复合体Ⅱ)分子限制性TH细胞和部分胸腺细胞重要的表面受体与信号传导... 展开 CD4(Cluster of differentiation 4)分子是一类单链跨膜蛋白，目前研究发现该蛋白主要表达于胸腺及成熟的T细胞表面，作为MHCⅡ(Maior histocompatibility complexⅡ，主要组织相容性复合体Ⅱ)分子限制性TH细胞和部分胸腺细胞重要的表面受体与信号传导分子，参与T细胞抗原识别受体TCR(T cell receptor)介导的TH细胞增殖活化和胸腺细胞发育过程。同时，CD4是质膜上的转运系统之一，研究发现CD4是HIV-1病毒的包裹蛋白gp120的受体分子。 本实验以山羊(Capra hircus)为研究对象，参考GenBank发表的绵羊(Ovis aries)CD4的mRNA序列，EST序列以及其它动物的CD4mRNA序列，在高度保守位置设计特异性引物，通过RT-PCR方法克隆了山羊CD4基因，并对其核苷酸序列、氨基酸序列和蛋白质高级结构进行了分析，运用RT-PCR和荧光定量PCR检测了CD4基因在不同组织中表达水平。主要研究结果如下： 1．从山羊睾丸组织克隆获得山羊CD4基因编码区全序列(GenBank登录号：EU913093)。所获得的山羊CD4全长cDNA为1555nt，包括一个长度为149个核苷酸的5’非编码区序列(5'UTR)，编码455个氨基酸，分子量为50.50kD，等电点为9.52。 2．氨基酸序列分析表明，山羊CD4蛋白前体是一种跨膜蛋白分子，由信号肽、胞外区、跨膜区和胞浆区4部分构成，分别由25、352、23和36个氨基酸残基组成。在胞外区含有4个Ig样结构域，两个二硫键(C41—C109和C143—C180)及3个N糖基化位点(N231，N263，N343)。CD4氨基酸序列比对表明，山羊与绵羊(Ovis aries)氨基酸相似性最高达98％，与猪(Sus domestica)、马(Equuscaballus)、人(Homo sapiens sapiens)、兔(Oryctolagus cuniculus)、狗(Canis familiaris)、猫(Felis catus)、小鼠(Mus musculus)和蝙蝠(Pousettus aegyptiacus)，氨基酸序列同源性分别为81％、72％、70％、75％、74％、73％、66％和70％。 3．RT-PCR结果表明，CD4基因在所检测的山羊胸腺、脾脏、卵巢、淋巴、胰脏、睾丸和肌肉组织中均有表达。荧光定量PCR检测表明，CD4在淋巴和脾脏组织中表达量较高。 收起