摘要: 鳜(Siniperca chuatsi)是我国重要的淡水经济养殖鱼类之一，对其适应性免疫系统的研究在理论和应用方面均具有重要的意义。 本研究通过兼并引物扩增出鳜CD分子的部分中间片段，RACE-PCR技术获得了鳜CD分子的cDNA全长。通过RT-PCR方法检测健康鳜和L... 展开 鳜(Siniperca chuatsi)是我国重要的淡水经济养殖鱼类之一，对其适应性免疫系统的研究在理论和应用方面均具有重要的意义。 本研究通过兼并引物扩增出鳜CD分子的部分中间片段，RACE-PCR技术获得了鳜CD分子的cDNA全长。通过RT-PCR方法检测健康鳜和LPS刺激后不同CD分子的表达情况。通过对CD8分子的胞外区进行原核表达，制作多克隆抗体，通过western-blotting技术检测CD8分子在组织中的表达情况，免疫组织化学技术检测CD8α阳性细胞在免疫组织中的分布。 鳜CD3γ/δ基因组全长2398 bp，包含6个外显子和5个内含子，开放阅读框包含549 bp，编码182个氨基酸。鳜CD38基因组全长2191 bp，包含5个外显子和4个内含子，开放阅读框包含537 bp，编码178个氨基酸。鳜CD3分子中存在很多保守的氨基酸和基序，例如：胞外区中用来形成二硫键的四个Cys残基和免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)等。同红鳍东方鲀一样，鳜CD3γ/δ中跨膜区中缺少带电荷的氨基酸，胞内区缺少di-leucine(leucine-isoleucine)基序，这可能会影响TCR-CD3复合体的组装以及细胞表面表达。在鱼类中CD3ε序列中存在N-糖基化位点，表明CD3ε可能行使CD3γ/δ在抗原识别方面的功能。通过对胞内区的分析发现，鱼类CD3γ/δ序列中ITAM基序的两个YXXL/Ⅰ单体之间间隔的氨基酸数各不相同，表明鱼类中存在更多的遗传多样性。 鳜CD4基因cDNA全长2296 bp，编码469个氨基酸。胞外区包含四个免疫球蛋白样结构域。同CD3γ/δ一样，胞内区也缺少di-leucine(leucine-isoleucine)基序。对胞外区结构域内的二硫键分析发现，鱼类中存在不同的二硫键分布。鳜CD8αcDNA全长1594 bp，编码221个氨基酸。鳜CD8βcDNA全长1336 bp，编码212个氨基酸。二者在保守的氨基酸序列、糖基化位点方面有很多的共同点，表明二者之间在功能上可能还没有完全分化。与哺乳动物不同的是，鱼类CD8α胞内区都包含一个共有的序列：RTR(K)RCPHKYKR，CD8β胞内区中都包含LPKKCRH序列。 RT-PCR方法显示表明CD分子主要在胸腺中表达，在脾脏、头肾、肠和鳃中也有一定量的表达。而用LPS刺激8h后，CD3γ/δ和CD4分子在胸腺、脾脏和头肾中都有显著性上调表达，表明胸腺是T淋巴细胞主要成熟和分化的场所，而其它组织则是T淋巴细胞行使功能的场所。Western-blotting分析表明，CD8α分子在多个组织中都有表达。免疫组化显示，CD8α阳性细胞广泛分布于胸腺和脾脏。 收起