摘要: 背景目的：原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，危害着世界许多国家人民的健康。我国是世界上原发性肝癌发病率和死亡率最高的国家之一。肝细胞癌(HCC)是主要亚型。虽然近年来原发性HCC的诊断和治疗取得了很大进展，但多数患者诊断为中晚期，预后... 展开 背景目的：原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，危害着世界许多国家人民的健康。我国是世界上原发性肝癌发病率和死亡率最高的国家之一。肝细胞癌(HCC)是主要亚型。虽然近年来原发性HCC的诊断和治疗取得了很大进展，但多数患者诊断为中晚期，预后无明显改善，5年生存率低于37%。主要原因是HCC早期没有明显的临床症状，没有简单、无创的早期诊断方法。因此，寻找一种无创、敏感、特异、简单易用的生物标志物，将有效提高HCC的早期诊断率和预后。环状RNA(Circular RNA, circRNA)是一类具有调控能力的内源性非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)。它是由反向剪接形成的闭环结构，不易被RNA外切酶破坏，具有细胞外稳定性和进化保护，在调控基因表达中起重要作用。近年来的研究表明，circRNA与多种疾病的发生有关，有可能成为疾病诊断和预后的标志物。 材料与方法：本研究采用三部分研究设计，第一部分，收集NCBIGEOHCC相关circRNA高通量芯片(GSE78520，GSE94508，GSE97332)，通过RobustRankAggreg的方法筛选HCC及其配对正常组织样本间差异表达的circRNA，筛选标准：表达量差异倍数(fold change，FC)≥1；组间比较p＜0.05。绘制热图，选择差异性大的候选circRNA；收集16对HCC和相邻正常组织样本通过实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR)对候选circRNA进行表达水平检测验证。第二部分，选择两种肝细胞癌细胞系(Huh7、Hep3B)，构建circRNA过表达载体，转染至肝细胞癌细胞系Huh7、Hep3B中，观察其对细胞凋亡、细胞周期、增殖、迁移和侵袭的影响。第三部分，采用生物在线网站预测候选circRNA潜在结合的miRNA，运用双荧光素酶报告基因检测法验证结合位点，分析其潜在的作用机制。 结果：1.通过RobustRankAggreg的方法整合三个HCC芯片数据集结果发现，共有6种环状RNA(2种上调的环状RNA,hsa_circRNA_103510和hsa_circRNA_100542和4种下调的环状RNA,hsa_circRNA_102166、hsa_circRNA_0002980、hsa_circRNA_105031和hsa_circrna_100291)，并且通过qPCR在16对人HCC组织标本中验证了hsa_circRNA_0002980在HCC组织中明显低表达于其配对的癌旁组织，p<0.05；2.体外细胞功能实验表明过表达hsa_circRNA_0002980能够显著促进肝癌细胞的增殖、增强癌细胞迁移和侵袭能力，并干扰细胞周期,致使DNA合成期(S期)细胞比例明显增多。3.生物信息学预测hsa-miR-1303、hsa-miR-877-5p、hsa-miR-142-5p均与hsa_circ_0002980存在保守的结合位点，且荟萃分析显示miR1303肝细胞癌中相对于正常肝组织具有更高的表达水平,合并的sROC曲面下面积达到0.81，具有较好的诊断肝细胞癌的价值。但是双荧光素酶报告基因检测不支持hsa-miR-1303与hsa_circ_0002980存在相互作用。 结论：hsa_circ_0002980在肝细胞癌组织中相对于正常非癌肝脏组织显著低表达。体外细胞功能实验表明，过表达hsa_circ_0002980能显著促进肝癌细胞增殖，促进细胞迁移和侵袭，干扰细胞周期，导致DNA合成期(S期)细胞比例显著增加。hsa-miR-1303与hsa_circ_0002980可能不存在相互作用。 收起