摘要: 目的： piRNA（Piwi-interactingRNA）是一种特异性表达的内源性小分子非编码RNA，主要表达于生殖细胞中，通常与PIWI蛋白结合而发挥生物学作用。近年来在越来越多的肿瘤细胞中发现piRNA有异常表达，而胃癌中piRNA的表达情况及其与PIWI蛋白相关性的... 展开 目的： piRNA（Piwi-interactingRNA）是一种特异性表达的内源性小分子非编码RNA，主要表达于生殖细胞中，通常与PIWI蛋白结合而发挥生物学作用。近年来在越来越多的肿瘤细胞中发现piRNA有异常表达，而胃癌中piRNA的表达情况及其与PIWI蛋白相关性的报道则比较少，本研究旨在筛选出在胃癌（GastricCancer，GC）组织及癌旁组织中差异性表达的piRNA，分析其表达特点及其与胃癌患者临床病理特征的关系，探寻piRNA与PIWIL4（Piwi-Like4）表达的相关性及其在胃癌患者预后中的作用，揭示其在胃癌临床诊治过程中的潜在价值。 方法： 1.收集2014年～2015年福建省某三甲医院进行外科手术的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织，并对患者预后进行随访。 2.提取新鲜胃癌及癌旁组织中总RNA，利用人piRNA芯片（HumanpiRNAchip）筛选出差异性差异性表达的piRNAs。 3.应用即时荧光定量PCR（Realtimequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR）的方法检测相关piRNA在胃癌及癌旁组织中的差异性表达，并分析其与肿瘤大小，部位，分型，浸润深度，TNM分期，神经血管侵犯和淋巴结转移等临床病理特征的相关性。 4.选取对应胃癌及癌旁组织制作石蜡组织芯片（TissueMiroarray，TMA），利用免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）的方法分别检测PIWIL4在胃癌、癌旁中的表达情况。 5.结合胃癌患者随访信息，分析piRNA及PIWIL4与患者术后总体生存率（Overallsurvival，OS）的相关系，探寻piRNA及PIWIL4在胃癌患者预后中的作用。 结果： 1.通过人piRNA芯片共鉴定出了50个在胃癌、癌旁组织中有差异性表达的piRNAs，其中17个在胃癌组织中高表达，33个低表达，进一步通过预实验筛选出2个与胃癌密切相关的piRNAs，即piR-hsa-9994与piR-hsa-30715。 2.piR-9994与piR-30715在胃癌组织中的表达量均显著高于癌旁组织（均P＜0.01）。 3.当胃癌侵袭深度为T3和T4时，piR-9994的表达水平显著高于T1和T2（P=0.023），是前者的4倍；按TNM分期，Ⅲ、Ⅳ期的表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌（P=0.001），上升4.6倍；淋巴结转移组的表达量是未转移组3倍(P=0.045)。 4.当胃癌浸润深度为T3和T4时，piR-30715的表达量显著高于T1和T2（P=0.034），上升4.4倍；按TNM分期，Ⅲ、Ⅳ期的表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌（P＜0.001），提升6.2倍；淋巴结转移组的表达量是未转移组5.1倍(P=0.017)。 5.PIWIL4在胃癌组织中的表达率为46%（23/50），显著高于癌旁组织中的14%（7/50），两者差异有统计学意义（x2=12.190，P＜0.001）。 6.胃癌组织中piR-9994表达与PIWIL4表达呈正相关（r=0.318，P=0.024）；胃癌中piR-30715的表达和PIWIL4的表达呈正相关（r=0.333，P=0.018）。 7.piR-3071高表达组总体生存率（OS）比低表达组差（P=0.024），PIWIL4阳性表达组总体生存率比阴性组差（P=0.025）；PIWIL4是胃癌预后独立的不良因素。 结论： 1.piR-9994在胃癌组织中过表达并与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关，piR-9994可能通过调节PIWIL4表达来参与胃癌的发生、发展，piR-9994可能成为诊断胃癌和确定胃癌恶性程度的分子标记物。 2.piR-30715在胃癌组织中过表达并与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及胃癌患者预后密切相关，piR-9994可能通过调节PIWIL4表达来参与胃癌的发生、发展与转移，piR-30715可能成为诊断胃癌、确定胃癌恶性程度及预后判断的分子标记物。 收起