摘要: 放线菌次级代谢产物是药物先导化合物的重要来源。由于放线菌易选育，培养发酵周期短，比较容易进行代谢调控，可以通过大规模发酵进行工业化生产，历来是抗生素生产中最多产的类群。而土壤又是放线菌分布最丰富的场所，因此，土壤放线菌次级代谢产物... 展开 放线菌次级代谢产物是药物先导化合物的重要来源。由于放线菌易选育，培养发酵周期短，比较容易进行代谢调控，可以通过大规模发酵进行工业化生产，历来是抗生素生产中最多产的类群。而土壤又是放线菌分布最丰富的场所，因此，土壤放线菌次级代谢产物研究具有重要的生物学价值和社会价值。本研究选用采自不同生境的土壤作为放线菌分离源，对分离得到的放线菌进行发酵，对发酵产物进行提取分离及结构鉴定，并对次级代谢产物的绝对构型进行研究，结果如下: (1)选用两种分离培养基(HV、GS)对采自伊春市百年红松树根际、临沂市地黄根际、阳朔深山环境的土壤进行放线菌分离，共得到40株放线菌。以白色念珠菌、表皮葡萄球菌、水稻纹枯致病菌和大豆菌核致病菌为拮抗指示菌对40株放线菌进行生长抑制实验。结果显示:37.5％的放线菌对指示细菌具有抑制活性，32.2％的放线菌对至少1种致病真菌具有抑制活性。对抑制真菌效果明显或抑制细菌效果较好的17株活性放线菌采用GYM和H9两种发酵配方进行摇瓶发酵实验，对其发酵液粗提物再次进行抑菌活性筛选，并以人结肠癌细胞HCT-116为筛选模型，采用SRB的方法检测抑制肿瘤细胞活性。结果显示:在100μg/mL样品浓度下，有8株放线菌对HCT-116抑制率在50％以上，在20μg/mL样品浓度下有3株放线菌对HCT-116抑制率依然大于50％。 (2)对筛选得到的两株放线菌Streptomyces sp.HS-NF-780和Streptomyces sp.HS-NF-1542进行放大发酵，发酵液经过抽滤、离心、大孔树脂吸附等方法前处理后，然后通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、HPLC制备等一系列分离纯化手段和1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC、红外吸收光谱、紫外吸收光谱、高分辨质谱等化合物鉴定方法，共获得9个化合物。从链霉菌Streptomyces sp.HS-NF-780共分离到7个化合物1-7，其中1-6均为戊二酰亚胺类化合物，化合物1，3，4为具有新颖结构化合物，分别命名为hydroxyiso-9-methylstreptimidone,9-methylstreptimidone2-α-D-glucopyranoside,(2E，6E,8E)-3'-(1'-amino-1'-oxoethyl)-11，12-dimethyl-4-oxotrideca-2，6，8-trienoic acid;从链霉菌Streptomyces sp.HS-NF-1542中分离2个已知化合物8-9，分别为丁烷内酯类化合物和二萜类化合物。 (3)对化合物1，3绝对构型进行研究。通过改进的Mosher法确定了化合物1在C-2位置的绝对构型为R，发现化合物1在C-9位置为差向异构体，进一步对化合物1进行手性色谱柱分析，确定化合物1为混合物，混合比例约为3∶2。对化合物3进行酸水解反应，得到糖苷配基和糖基两部分，通过液相分析糖苷配基部分与化合物2液相分析保留时间一致，确定了化合物3糖苷配基部分与化合物2结构相同，即为9-methylstreptimidone。对糖基部分和标准D-Glucose进行衍生反应，并对衍生产物进行液相分析，两者具有一致的保留时间，确定了化合物3所连接单糖构型为D-Glucose。 (4)对新化合物1，3，4进行抗菌活性检测，结果显示:化合物1对大豆菌核致病菌具有一定的抑制效果;化合物4对白色念珠菌和大豆菌核致病菌具有一定的抑制效果。采用CCK8法对新化合物1，3，4进行抗肿瘤细胞活性检测。结果显示:新化合物1，3，4对人白血病细胞K562，乳腺癌细胞MCF-7，结肠癌细胞HCT-116均有适中的抗肿瘤活性，化合物1，3，4对人白血病细胞K562的IC50值分别为36.47、28.37、10.50μg/mL;对乳腺癌细胞MCF-7的IC50值分别为34.68、28.79、15.43μg/mL;对结肠癌细胞HCT-116的IC50值分别为36.76、34.83、20.49μg/mL。 收起