摘要: 体细胞核移植胚胎在体外发育时，因为供体细胞核过低多能性及异常表观重编程而出现胚胎发育阻滞现象。继而导致体细胞克隆胚胎发育异常和哺乳动物体细胞核移植效率低下。目前关于同时提高胚胎发育的多能性和表观遗重编程能力少有研究。RepSox是在诱导... 展开 体细胞核移植胚胎在体外发育时，因为供体细胞核过低多能性及异常表观重编程而出现胚胎发育阻滞现象。继而导致体细胞克隆胚胎发育异常和哺乳动物体细胞核移植效率低下。目前关于同时提高胚胎发育的多能性和表观遗重编程能力少有研究。RepSox是在诱导多能干细胞中发现的一种可以促进细胞产生多能性的小分子化合物。本实验的目的是结合RepSox和组蛋白去乙酰化抑制剂处理猪体细胞克隆胚胎，提高胚胎发育多能性的同时又改善表观遗传修饰，从而提高猪体细胞克隆胚胎体外发育能力及克隆效率。通过分析早期胚胎体外发育能力筛选出最佳的去乙酰化抑制剂及RepSox的最佳处理浓度。通过检测早期胚胎不同发育时期多能性基因的表达情况，分析胚胎发育的全能性;通过免疫荧光染色检测早期胚胎乙酰化和甲基化水平，判断其表观重编程能力;并通过凋亡染色确定胚胎质量。本实验得到以下分析结果: 1.50nmol/L LBH589处理24小时组体外发育能力显著高于5μmol/LM344处理6小时组、0.2μmol/L MGCD0103处理6小时组、2mmol/L VPA处理24小时组和对照组(P＜0.05)。 2.不同浓度RepSox处理猪体细胞克隆胚胎，12.5、25μmol/L组2-细胞率、4-细胞率、囊胚率、囊胚平均细胞数和对照组没有显著性差异，但显著高于50、100μmol/L处理组(P＜0.05)。 3.12.5μmol/LRepSox和50nmol/L LBH589共处理胚胎体外发育能力显著高于对照组，多能性基因NANOG、POU5F1、SOX2表达量在4-细胞期、囊胚期显著高于对照组和LBH589处理组，且共处理组表观重编程水平优于对照组和LBH589处理组。 结论:RepSox和LBH589共处理可以提高猪体细胞克隆胚胎早期发育能力和胚胎质量，提高多能性基因的表达及表观重编程水平。 收起