摘要: 目的：体外培养大鼠骨髓基质细胞（rat bone marrow stromal cells,rBMSCs），构建携带人牙骨质蛋白(cementum-protein,CEMP)1基因的慢病毒载体并转染rBMSCs，探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs生物学行为的影响。 方法：1.全骨髓贴壁法体外分离培养rBMSC... 展开 目的：体外培养大鼠骨髓基质细胞（rat bone marrow stromal cells,rBMSCs），构建携带人牙骨质蛋白(cementum-protein,CEMP)1基因的慢病毒载体并转染rBMSCs，探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs生物学行为的影响。 方法：1.全骨髓贴壁法体外分离培养rBMSCs，通过成骨和成脂分化能力以及细胞表面标志物检测对rBMSCs进行鉴定；2.构建含人CEMP1基因的重组慢病毒过表达载体，通过RT-PCR及基因测序对重组载体进行鉴定；3.通过荧光显微镜观察转染后细胞荧光表达，流式细胞术检测转染效率，RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学和Western Blot检测转染后细胞CEMP1基因和蛋白的表达情况；4.通过检测转染后rBMSCs的成牙骨质相关基因表达，探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs的影响。 结果：1.成功分离培养rBMSCs；流式细胞术显示细胞高表达CD29和CD90；2.rBMSCs成骨诱导21d，茜素红染色可见红染的矿化结节；成脂诱导21d，油红O染色可见红染的空泡样脂滴；3.RT-PCR及基因测序证实成功构建携带人CEMP1基因的慢病毒表达载体；4.转染后rBMSCs在荧光显微镜下可见大量绿色荧光表达，流式细胞术检测结果证实具有较高表达率；5.经RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学及Western Blot检测，被转染的细胞高表达CEMP1基因和蛋白；6.Real-time PCR检测结果显示LV-CEMP1-EGFP组细胞BSP、OPN表达较LV-EGFP组和未转染组明显增高，差异具有统计学意义。 结论：成功构建携带人CEMP1基因的慢病毒载体并转染BMSCs，CEMP1基因可促进rBMSCs成牙骨质相关基因的表达。 收起