摘要: 目的： 探讨谷氨酸受体（AMPA-GluR2）在脊髓损伤前后少突胶质前体细胞（OPC）中的表达规律，明确AMPA-GluR2在OPCs凋亡中的作用。 方法： 1.无特定病原体（SPF级）雌雄不限SD大鼠60只，1-2日龄。经断颈、解剖、剪碎、消化、培养和分离提纯后... 展开 目的： 探讨谷氨酸受体（AMPA-GluR2）在脊髓损伤前后少突胶质前体细胞（OPC）中的表达规律，明确AMPA-GluR2在OPCs凋亡中的作用。 方法： 1.无特定病原体（SPF级）雌雄不限SD大鼠60只，1-2日龄。经断颈、解剖、剪碎、消化、培养和分离提纯后，获得原代少突胶质前体细胞。采用免疫荧光技术，以抗体A2B5标记少突胶质前体细胞，以DAPI标记细胞核，镜下观察并统计细胞纯度。 2.无特定病原体（SPF级）雌性SD大鼠12只，6-8周龄，体重200-250g。采用Allen's打击法制作SD大鼠脊髓损伤(T9)模型，使用NYU IMPACTOR MODEL-II脊髓打击器造成T9脊髓冲击伤，10g重物，降落高度30mm。手术后12h无菌条件下快速取出脊髓损伤动物模型组损伤处脊髓，对照组仅暴露对应脊髓节段后12h取出脊髓。利用Transwell共培养技术，培养板内培养OPC细胞，Transwell小室内放置脊髓组织块。依次分为对照组、脊髓损伤组、谷氨酸激动组、拮抗剂NBQX组、拮抗剂JSTX组，流式细胞检测技术检测各组凋亡率。 3.采用western blot及免疫组化的方法检测AMPA-GluR2在对照组及脊髓损伤组中表达差异。联系各组凋亡率的不同，探讨AMPA-GluR2在OPC凋亡中的作用。 结果： 1.OPCs纯度鉴定：分离提纯后的少突胶质前体细胞经过免疫荧光染色后，倒置相差显微镜拍摄照片，图像处理软件Image J统计细胞纯度＞95%，满足实验要求。 2.流式细胞检测结果显示：与对照组相比，脊髓损伤不加谷氨酸受体拮抗剂组OPC凋亡率显著升高，两组间差异有统计学意义（P＜0.001），然而加入谷氨酸受体拮抗剂后凋亡率显著下降，差异有统计学意义（P＜0.001）。 3.免疫组化及Western blot检测结果：细胞免疫组化显示AMPA-GluR2在对照组中表达呈现阳性，在脊髓损伤组表达呈现阴性，对照组中AMPA-GluR2明显高于脊髓损伤组。Western blot结果显示，少突胶质前体细胞中AMPA-GluR2在脊髓损伤组24h及48h的表达量较对照组均明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。且在脊髓损伤组中，共培养48h组AMPA-GluR2表达量低于共培养24h组，差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组在24h和48h的AMPA-GluR2表达量无统计学差异(P＞0.05)。 结论： 1.受损脊髓可诱导OPC凋亡明显增多，其凋亡机制可能与AMPA-GluR2表达量明显减少有关，CP-AMPAR可导致细胞钙内流增加，诱导OPC凋亡。 2.NBQX、JSTx作为CP-AMPA受体拮抗剂，可在一定程度上阻断CP-AMPAR，终止细胞的钙内向整流，对细胞的存活起到促进作用。 收起