摘要: 本文对RNAa靶向调控VEGF信号通路治疗子痫前期相关机制进行了研究。本研究分为两个部分： 第一部分：saRNA（dsVEGF-706）上调绒毛外滋养细胞VEGF的表达。 目的：对人绒毛外滋养细胞(HTR-8/Svneo）转染荧光标记的saRNA（dsVEGF-706），通过流式... 展开 本文对RNAa靶向调控VEGF信号通路治疗子痫前期相关机制进行了研究。本研究分为两个部分： 第一部分：saRNA（dsVEGF-706）上调绒毛外滋养细胞VEGF的表达。 目的：对人绒毛外滋养细胞(HTR-8/Svneo）转染荧光标记的saRNA（dsVEGF-706），通过流式及荧光拍照来检测转染效率，再分别从mRNA和蛋白质水平检测滋养细胞内VEGF是否上调,验证转染效果是否符合预期设想。 方法：⑴实验分为mock组、cotrol组、dsVEGF-706组分别转染完成后72小时进行荧光拍照，同时于转染后72小时应用流式细胞仪检测各组的转染效率。⑵采用RT-PCR的方法于转染后72小时检测各分组VEGFmRNA表达的变化。⑶应用western-blot的方法，于转染完成后72小时检测各分组VEGF蛋白的表达情况。 结果：①荧光拍照显示，与control组及mock组相比，dsVEGF-706组有明显的的荧光信号即提示有较高的转染效率，流式结果显示dsVEGF-706组转染效率达94.83%。②与control组相比，dsVEGF-706组VEGF mRNA的表达明显增高，差异具有显著性。③与congtrol组相比，dsVEGF-706组VEGF蛋白的表达明显升高，差异具有显著性（P=0.012） 结论：小激活RNA（dsVEGF-706）能够明显上调人绒毛外滋养细胞（HTR-8/Svneo）内VEGF的表达，与预期的实验结果相符，这将有望将小激活 RNA（dsVEGF-706）应用于子痫前期的治疗。 第二部分：saRNA（dsVEGF-706）上调VEGF表达对正常滋养细胞及子痫前期滋养细胞模型迁移能力、成管能力及eNOS-NO信号通路的影响。 目的：探讨内源性上调人绒毛外滋养细胞（HTR-8/Svneo）VEGF的表达对人绒毛外滋养细胞及子痫前期滋养细胞模型迁移能力、血管生成能力及 eNOS-NO信号通路的影响。 方法：⑴运用细胞划痕实验，检测dsVEGF-706对滋养细胞迁移能力的影响。⑵在不同分组处理滋养细胞的的情况下，利用基质胶3D培养技术观察各组滋养细胞成管能力的变化。⑶采用硝酸盐还原法检测不同分组NO的表达，应用western-blot的方法检测各组eNOS的表达，阐明dsVEGF-706增强滋养细胞迁移能力和成管能力的可能机制。 结果：①与control组相比，dsVEGF-706转染后，滋养细胞的迁移能力明显增强，差异具有显著性。②与control组相比，dsVEGF-706转染能明显增加滋养细胞的成管能力，差异具有显著性（P=0.013）。与control组相比，在TNF-a处理过的HTR-8/Svneo（即是TNF-a组）的血管生成能力明显下降，差异具有统计学意义（P=0.001）。但是，与TNF-a组相比，在TNF-a处理转染过dsVEGF-706的滋养细胞时（即是TNF-a+dsVEGF-706组），滋养细胞血管生成能力明显增强，差异有统计学意义。③NO合成能力检测显示：与control组相比，dsVEGF-706转染后72h，滋养细胞NO的合成能力明显增强，差异有统计学意义（P=0.0003）。与control组相比，TNF-a处理组，滋养细胞NO合成能力下降了51%，差异有统计学意义（P=0.001）。但与TNF-a组相比，TNF-a+dsVEGF-706组滋养细胞NO合成能力明显改善。eNOS蛋白水平检测显示：与control组相比，dsVEGF-706转染后72h，滋养细胞eNOS的表达明显上调，差异有统计学意义（P=0.032）。与control组相比，TNF-a处理组，滋养细胞eNOS蛋白表达明显下降，差异有统计学意义（P=0.004）。但与TNF-a组相比，TNF-a+dsVEGF-706组滋养细胞eNOS的表达水明显得到改善。 结论：⑴saRNA（dsVEGF-706）上调滋养细胞内VEGF后能明显增强滋养细胞的迁移能力及成管能力，而 TNF-a能明显抑制滋养细胞的成管能力，但用 TNF-a处理dsVEGF-706转染过的滋养细胞，滋养细胞的成管能力明显得到改善。这表明滋养细胞内上调的VEGF能有效对抗TNF-a对滋养细胞成管能力的抑制作用。⑵saRNA（dsVEGF-706）上调滋养细胞内VEGF后能明显增强滋养细胞NO合成能力及eNOS蛋白的表达水平，相反，TNF-a处理滋养细胞后，其NO合成能力及eNOS蛋白的表达水平明显受到抑制，但用TNF-a处理dsVEGF-706转染过的滋养细胞，其NO合成能力及eNOS蛋白的表达水平明显得到改善。这表明dsVEGF-706不仅上调了VEGF表达，还激活eNOS-NO通路，进而增强滋养细胞的迁移能力和血管生成能力，从而有望成为子痫前期的治疗途径。 收起