摘要: 滋养层细胞分化是妊娠建立与维持的重要生物学基础之一。胎盘发育期间，细胞滋养层细胞增殖并分化为不同亚型，绒毛外滋养层细胞侵润子宫蜕膜并改建母体螺旋动脉，而合体滋养层细胞是母体与胎儿间实现物质交换的主要场所，并可产生多种激素和因子调控... 展开 滋养层细胞分化是妊娠建立与维持的重要生物学基础之一。胎盘发育期间，细胞滋养层细胞增殖并分化为不同亚型，绒毛外滋养层细胞侵润子宫蜕膜并改建母体螺旋动脉，而合体滋养层细胞是母体与胎儿间实现物质交换的主要场所，并可产生多种激素和因子调控母胎对话。滋养层细胞的分化受到众多信号通路的严格时空调控，其失调或障碍将对正常妊娠进程产生重要影响。 子痫前期是一种妊娠相关综合症，表现为妊娠20周后出现的原发性高血压与蛋白尿，发病率约5-8％。目前学界普遍认为，滋养层细胞侵润及血管改建能力不足是子痫前期的主要诱因。滋养层侵润浅表与螺旋动脉改建不足导致胎盘灌注不足、缺血缺氧，进一步造成滋养层细胞分化失调、氧化应激增强、细胞凋亡、内皮细胞损伤、炎症因子释放增加，从而引发母体子痫前期的病理表现。子痫前期影响母亲与胎儿的近期与远期健康，至今尚无有效的预测与治疗手段。因此，对子痫前期病理机制的研究对于母胎健康的保障具有积极意义。 miRNA是一种约19-22个碱基的内源性单链非编码小分子RNA，参与对增殖、分化、凋亡等多种细胞行为的调控。前期通过微阵列芯片检测发现，子痫前期胎盘中miR-195表达异常降低，而miR-210表达升高。本研究分别对这两个miRNA的功能进行深入研究，探讨它们与子痫前期发生发展之间的关联。 原位杂交实验显示多种胎盘滋养层细胞可表达miR-195;前瞻性分析表明子痫前期患者妊娠早中期的血浆中，miR-195的水平已显著降低，提示miR-195可能参与子痫前期病理的早期事件。生物信息学预测显示激活素A的Ⅱ型受体ActRⅡB为miR-195的潜在靶基因;而ActRⅡB在子痫前期患者胎盘中表达上调，与miR-195呈现相反的变化趋势。利用人类滋养层细胞系HTR8/SVneo，证明ActRⅡB受到miR-195直接靶向调控，ActRⅡB能够挽救miR-195对滋养层细胞侵润能力的促进作用。这一研究表明miR-195可通过靶向ActRⅡB促进滋养层细胞侵润。 为了全面认识miR-195在滋养层细胞中的功能，联用高通量质谱技术与生物信息学预测，在HTR8/SVneo细胞中筛查miR-195的靶基因谱，发现线粒体相关蛋白FOXRED1与PDPR可能受到miR-195直接靶向调控。通过蛋白免疫印迹实验与双荧光素酶报告基因检测，证明子痫前期胎盘中FOXRED1或PDPR表达水平均升高;滋养层细胞中这两种分子均是miR-195的直接靶基因;miR-195能够促进氧化应激诱导的滋养层细胞凋亡与线粒体功能损伤，而这种损伤可被FOXRED1或PDPR部分挽救;慢性氧化应激刺激下，miR-195的表达水平降低。因此，子痫前期胎盘中miR-195的表达下调可能是作为过量氧化应激的应答的反馈补偿机制。 RNA结合蛋白CPEB2是miR-210的诸多预测靶基因之一。多项报道显示低氧诱导因子HIF-1α可转录激活miR-210，而其mRNA序列中存在CPE元件，可能受到CPEB2调控。发现胎盘中miR-210广泛表达于多种滋养层细胞，而CPEB2与miR-210具有相似的空间表达模式;在子痫前期患者胎盘中CPEB2表达水平降低，与miR-210的变化趋势相反。利用人绒毛膜癌细胞系BeWo，证明CPEB2受miR-210直接靶向抑制，低氧处理可诱导miR-210表达并抑制CPEB2。RNA免疫共沉淀证实CPEB2与HIF-1α编码基因的相互结合，且低氧条件下过表达CPEB2能够抑制HIF-1α的蛋白水平;敲降miR-210使低氧条件下HIF-1α蛋白水平降低，表明HIF-1α可通过miR-210/CPEB2途径实现自身的正反馈增强。此外，过表达miR-210与敲降CPEB2均能够抑制毛喉素诱导的BeWo细胞合体化，且过表达CPEB2能够挽救miR-210对细胞融合的抑制作用。这些结果提示低氧下HIF-1α、miR-210与CPEB2构成正反馈环路，可能放大子痫前期胎盘中的低氧应答信号及miR-210的表达增高;同时，低氧诱导的miR-210可能通过CPEB2抑制滋养层细胞合体化，参与子痫前期发生。 综上所述，本研究阐明了滋养层细胞中miR-195可通过ActRⅡB影响细胞侵润功能，并通过靶向线粒体相关蛋白FOXRED1与PDPR调节氧化应激诱导的细胞凋亡与线粒体功能损伤。低氧环境中miR-210通过CPEB2反馈调节HIF-1α蛋白水平，并影响滋养层细胞合体化。胎盘中microRNA的表达失调可能影响滋养层细胞的分化与存活，从而参与子痫前期的发生与发展。 收起