摘要: 水貂（ Neovison vison）作为一种小型珍贵毛皮动物，属于哺乳纲，食肉目，鼬科，鼬属。水貂主要经济价值体现在貂皮，而水貂的生长性状情况直接影响貂皮的质量。本研究以银蓝水貂和美国短毛黑水貂为研究对象，在 DNA、RNA和蛋白质三个水平上研究 IGF... 展开 水貂（ Neovison vison）作为一种小型珍贵毛皮动物，属于哺乳纲，食肉目，鼬科，鼬属。水貂主要经济价值体现在貂皮，而水貂的生长性状情况直接影响貂皮的质量。本研究以银蓝水貂和美国短毛黑水貂为研究对象，在 DNA、RNA和蛋白质三个水平上研究 IGF-1R基因与水貂生长发育的相关性，为深入研究与水貂生长性状相关的分子遗传标记提供基础数据，为水貂的选育奠定理论基础。 水貂IGF-1R基因的克隆、真核表达及鉴定。提取水貂肝脏总RNA，将RNA反转录得到cDNA，根据GenBank报道的2个物种（雪貂、人）中IGF-1R序列为参考，设计水貂特异性IGF-1R引物，PCR扩增得到CDS序列，将PCR产物进行胶回收并与pEASY-Blunt Zero克隆载体连接并转化Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent Cell中，经测序验证该序列为目的序列，从阳性重组质粒扩增目的片段连接到pEASY-Blunt M3载体上，经验证重组pEASY-Blunt M3-IGF-1R质粒通过脂质体法转染到293 T细胞中，提取总蛋白，并用Western Blot技术检测水貂IGF-1R蛋白的表达。结果表明：（1）以水貂肝脏为样品，利用RT-PCR成功扩增出全部的水貂IGF-1R基因CDS序列，长度为4104 bp，编码1367个氨基酸；（2）获得的水貂IGF-1R基因与雪貂、人同源基因相似性分别为99%和91%。认为该序列为水貂 IGF-1R基因 CDS序列；（3）成功构建pEASY-Blunt M3-IGF-1R真核表达载体，经验证成功获得水貂IGF-1R蛋白。本研究为从受体角度阐明水貂IGF-1R如何调控生长发育，为下一步功能研究奠定基础。 水貂IGF-1R基因的SNPs筛查及其与生长性状的关联分析。选用同场打皮时银蓝水貂（♂，69只）和美国短毛黑水貂（♂，75只），测量体重体长，并采集血液样本。利用PCR产物直接测序技术进行部分外显子SNPs筛查，采用POPGene32软件开展SNPs位点群体遗传结构分析，通过SPSS（19.0）软件GLM统计模型进行SNPs不同基因型与水貂生长性状的相关性分析。结果表明：在IGF-1R基因外显子序列中检测到2个同义突变位点：c.207G>A和c.1782G>A。群体遗传学分析显示，在银蓝水貂群体中，c.207G>A位点为低度多态，c.1782G>A属中度多态，而这2个位点在美国短毛黑水貂群体中均为中度多态。χ2检查表明，c.207G>A和c.1782G>A两个位点在银蓝水貂和美国短毛黑水貂群体群体内分别处于 Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。关联分析表明，c.1782G>A位点与美国短毛黑水貂的体重显著相关（P<0.05），AA基因型个体的体重值显著高于GG基因型个体和GA基因型个体。因此，综上推断c.1782G>A位点适合于美国短毛黑水貂体重的分子标记选择。 收起