摘要: 背景与目的： 结核病是世界上最致命的传染病之一威胁人类的健康安全。在全世界脊柱结核是仅次于艾滋病的致死性疾病，2014年世界卫生组织报道:2013年约900万人患结核病，其中约有150万人因结核致死，全球每年至少花费约80亿美元来应对结核病的流行... 展开 背景与目的： 结核病是世界上最致命的传染病之一威胁人类的健康安全。在全世界脊柱结核是仅次于艾滋病的致死性疾病，2014年世界卫生组织报道:2013年约900万人患结核病，其中约有150万人因结核致死，全球每年至少花费约80亿美元来应对结核病的流行，目前结核患者数出现耐药、耐多种药[1]甚至广泛耐药据统计在全球正在治疗与新发的结核病例中估计MDR-TB约48万人，其中约有9％的病例为XDR-TB，这使结核的个体化化疗面临严峻挑战。深入研究探讨结核病的发病机制，以更有效的治疗结核。 在西方国家早期治疗结核策略上，将维生素D用于抗结核治疗，在一些疗养院中广泛应用，在当时结核的治疗取得了很好效果，但随着抗结核药物研发与临床应用，25(OH)D3很少被用来抗结核治疗[2，3]。近年来结核耐药被被诊断。许多患者在抗结核的药物使用过程中出现结核耐药[4，5]，常规的抗结核药物治疗效果不明显。25(OH)D3的在结核免疫中的作用作用机制，当前已经逐渐引起重视。虽然关于25(OH)D3与结核免疫的的相关文献研究已经很多，但在25(OH)D3对结核的免疫及在结核临床治疗中存在很多争议，没有公认一致的结论。有些报道称25(OH)D3不仅能提高临床治疗结核疗效，还能改善结核患者的影像学表现[6]。然而，有些报道认为25(OH)D3在临床中对提高结核患者的临床效果没有发挥作用。因此，25(OH)D3在结核感染分子免疫与临床抗结核治疗的作用需要更深入的研究。25(OH)D3在结核杆菌感染的免疫过程中发挥着至关重要的作用[9,10]。25(OH)D3影响结核固有免疫的机制已经被明确研究[7，8]有关于25(OH)D3在结核获得性免疫中具体机制的研究还没有深入。结核感染后的获得性免疫启动过程中，树突状细胞(Dendritic cells，DCs)作为机体重要的抗原提呈细胞发挥重要作用[9,10]，树突状细胞在结核免疫调节中发挥重要作用。虽然25(OH)D3在树突状细胞成熟中的作用已有广泛报道[18]，但结核杆菌感染时，25(OH)D3对树突状细胞影响机制的研究还不够深入。 因此，本研究的主要目的为评估小鼠骨髓来源树突状细胞在25(OH)D3存在与不存在的情况下，25(OH)D3对结核杆菌刺激成熟的树突状细胞成熟和调节功能的差异研究。 方法： 1、建立实验组、阳性对照组、阴性对照组:维生素D正常组、维生素D充足组和维生素D缺乏组，酶联免疫复合技术方法检测各组血清中25(OH)D3水平。 2、小鼠骨髓细胞来源树突状细胞的培养及鉴定:扫描电镜、光镜观察细胞形态，细胞流式测量MHC-Ⅱ，CD11C，CD86，CD80的表达。 3、检测不同条件的三组小鼠骨髓源性树突状细胞表达MHC-Ⅱ、CD11C、CD86和CD80的差异。 4、测量三组小鼠脾脏淋巴细胞混合反应对T淋巴细胞增殖的影响，CD4+T、CD8+T细胞各自百分比、CD4+T/CD8+T细胞比值。 结果： 1、25(OH)D3在正常组、VD-组和VD+组三组的数据比较中，正常组和VD+组无明显统计学差异。在VD-组中25(OH)D3明显少于正常组。 2、通过小鼠骨髓细胞培养分化DC细胞镜下能观察到典型的树枝状突起，细胞流式检测表面分子CD80、MHC-Ⅱ、CD86、CD11C的阳性率平均为84.69％、89.26％、58.94％、87.23％(Fig.8); DCs细胞的阳性率高。 3、CD11C的比例在对照组、25(OH)D3和25(OH)D3缺乏组分别83.99％±3.20％，81.13％±5.18％and84.46±2.60;共刺激分子的表达在对照组，25(OH)D3和25(OH)D3缺乏组分别是:87.62％±3.23％ and84.99％±3.17％85.44±3.41; CD80:85.28％±7.39％ and85.11％±8.02％、87.41±6.64;CD86:66.97％±8.29％ and52.18％±8.52％、70.87±7.83;对照组中CD86的表达显著高于25(OH)D3组，差异有统计学意义(P＜0.05);CD11C、MHC-Ⅱ、CD80、CD86平均荧光强度在对照组、25(OH)D3组和缺乏组分别是:CD11C:445.19±129.82 and444.21±109.28、439.23±127.64;MHC-Ⅱ:1102.16±371.02and681.62±292.71、1012.21±365.12， CD80:350.11±101.18and341.01±113.27、362.08±110.13; CD86:149.18±29.13and139.15±25.91、153.36±26.32，其中对照组的MHC-Ⅱ的平均荧光强度值显著大于25(OH)D3组，差异有统计学意义。(P＜0.05) 4、缺乏组的树突状细胞明显提高了T细胞的增殖水平，检测CD4+T and CD8+T的分布，CD4+T在对照组、25(OH)D3和缺乏组分别是:27.11±0.50 and25.31±0.32、33.88±0.52。CD8+T在对照组、25(OH)D3和缺乏组分别是:13.12±0.59 and11.50±0.55、17.02±0.52; CD4+T/CD8+T的比值在25(OH)D3组高于对照组，缺乏组低于25(OH)D3组。 结论： 1、通过对小鼠减少紫外线光照和去除维生素D食料的控制，缺乏维生素D的模型成功建立。 2、结核杆菌感染时，25(OH)D3降低了树突状细胞表面共刺激分子MHC-Ⅱ和CD86的表达，减弱了其抗原提呈能力，抑制了T细胞的增殖。 收起