摘要: 目的： 研究TLR4沉默联合5-FU对胰腺癌细胞SW1990增殖侵袭及凋亡的影响，从而对胰腺癌的临床治疗提供参考。 方法： 1.选取胰腺癌细胞SW1990常规培养,并对其进行带有荧光TLR4shRNA（GFP-TLR4shRNA）病毒转染48h后，RT-PCR、Western blot检测... 展开 目的： 研究TLR4沉默联合5-FU对胰腺癌细胞SW1990增殖侵袭及凋亡的影响，从而对胰腺癌的临床治疗提供参考。 方法： 1.选取胰腺癌细胞SW1990常规培养,并对其进行带有荧光TLR4shRNA（GFP-TLR4shRNA）病毒转染48h后，RT-PCR、Western blot检测TLR4沉默效率。 2.将TLR4沉默或不沉默的SW1990细胞加或不加5-FU四组A：TLR4（+）/5-FU（-），B：TLR4（-）/5-FU（-），C：TLR4（+）/5-FU（+），D：TLR4（-）/5-FU（+）：GFP-TLR4shRNA及GFP-NC组，7天后，MTT法绘制细胞增殖曲线。 3.将TLR4沉默（或不沉默）加（或不加）5-FU（10μmol/L），分成四组：A：TLR4（+）/5-FU（-），B：TLR4（-）/5-FU（-），C：TLR4（+）/5-FU（+），D：TLR4（-）/5-FU（+），Transwell侵袭实验测定各组细胞侵袭能力，Western blot检测TLR4、Caspase-3、Caspase-8蛋白在各组细胞的表达情况以及流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。 结果： 1.SW1990细胞TLR4在沉默后其表达率明显降低，有显著性差异（p<0.001）。 2.SW1990细胞在TLR4沉默并5-FU干预后，其增殖抑制效应比单一TLR4沉默或单用5-FU增强。 3.Transwell侵袭实验结果显示穿过膜细胞数量（用X±s表示）分别为：A组154±8.185、B组125.7±6.028、C组119.0±4.583、D组36.33±4.041。D组相对于B组，有显著性差异（p<0.001）；D组相对于C组，有显著性差异（p<0.001），B组相对于A组，有显著性差异（p<0.01）。说明TLR4沉默联合5-FU相对于单一TLR4沉默或者单一加用5-FU，对SW1990细胞侵袭能力的抑制显著增强。 4.Western blot检测A、B、C、D四组SW1990细胞的Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况，D组Caspase-3、Caspase-8蛋白表达均低于其余三组。B组 Caspase-3、Caspase-8蛋白表达低于A组。 5.流式细胞检测A、B、C、D四组细胞凋亡情况，与Western bolt结果相符合。其细胞凋亡量联合用药组明显大于单纯TLR4沉默、单用5-FU组，也大于对照组。而单纯TLR4沉默组与单用5-FU组与对照组相比，细胞凋亡也增加。 结论： TLR4在胰腺癌细胞SW1990中表达明显降低时，其细胞增殖和侵袭转移能力降低。TLR4沉默并联合5-FU对胰腺癌细胞SW1990的增殖和侵袭转移能力的抑制效果强于单用TLR4沉默或是单一的5-FU化疗。但是产生这种影响的作用机制，尚未阐明，需要进一步研究。 收起