摘要: 根管治疗的目的在于彻底清除感染物质与坏死组织，促进组织的修复与再生。然而以目前的根管预备和消毒方法，不能完全清除根管内的微生物；加之根管解剖的变异和复杂性，感染根管的细菌常存在于牙本质小管、根管侧枝等较隐匿的区域。这些细菌繁殖后会... 展开 根管治疗的目的在于彻底清除感染物质与坏死组织，促进组织的修复与再生。然而以目前的根管预备和消毒方法，不能完全清除根管内的微生物；加之根管解剖的变异和复杂性，感染根管的细菌常存在于牙本质小管、根管侧枝等较隐匿的区域。这些细菌繁殖后会造成根管内的再感染，最终导致根管治疗的失败。因此，对于永久充填在根管内的封闭剂来说，不仅需要有良好的封闭性能来封闭根管的冠方和根方，还需要具有抗菌活性来杀灭根管内的残余细菌，提高根管治疗的成功率。 因此，在根管充填中选用抗菌能力强的封闭剂，对于彻底预防再感染能起到关键的作用。随着口腔材料学的发展，许多新型根管封闭剂不断应用于临床，如GuttaFlow、iRoot SP封闭剂等，其良好的生物相容性、严密的封闭性和便捷的操作性，使其在临床治疗中的应用日益广泛，但是其抗菌性能如何？和传统的封闭剂相比，其抗菌性能有何优势？值得我们分析研究。目前，研究封闭剂抗菌性的方法较多，如ADT、DCT、感染根管模型等，其具有各自优缺点，不同方法得出的抗菌效果是否一致？这也值得我们对比研究。 本课题通过选用DCT和感染根管模型两种体外检测方法，对氧化锌丁香油（zinc oxide-euqenol，ZOE）、AH-Plus、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五种临床常用的根管封闭剂的抗菌效果进行研究分析，观察其对临床分离粪肠球菌（Enterococcus faecalis，E.f）的抗菌效果，并测定其流动性和pH值，以期为临床治疗的选择提供依据，也为设计更加完善的评价封闭剂抗菌性能的实验提供思路。实验分为以下四个部分： 一、临床E.f的采集、分离和鉴定 选取就诊于我科室的病例20例，均需要根管再治疗。采用粪链球菌培养基（Streptococcus Faecalis Medium，SF Medium）和胆汁七叶苷培养基对临床分离的菌株进行培养，通过观察颜色变化进行初步鉴定；鉴定为阳性结果的菌株利用 BBL CRYSTAL系统进行细菌生化反应的鉴定；最后利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和DNA纯化回收技术，鉴定细菌的16SrRNA序列，并与基因库中的标准菌进行比对。结果显示，在收集的20例病例样本中，有6例分离鉴定出E.f，检出率为30%。本实验说明16SrRNA和PCR扩增技术是目前临床中检测鉴定E.f的重要方法，其精确度明显大于传统的微生物培养法，确保了实验的准确性。 二、利用DCT评价不同根管封闭剂的抗菌效果 将ZOE、AH-Plus、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五种封闭剂均匀混合后放入离心管底部，阳性对照组选用凡士林。在新鲜混合（20min）和1d、3d、7d、14d时分别取出相应样本，与提前配制的 E.f菌悬液充分接触1h，阴性对照组加入无菌去离子水。随后吸取菌液梯度稀释，厌氧培养并铺板计数，记录24h内五种封闭剂抗菌效果的变化。结果显示：生物陶瓷类封闭剂 iRoot SP和AH-Plus在新鲜混合时（20min）可以完全杀灭细菌，且iRoot SP的抗菌能力可以维持7d（P<0.05）；ZOE、AH-Plus和Vitapex封闭剂在新鲜混合时（20min）具有较强的抗菌性（P<0.05），但3d后抗菌性基本消失（P>0.05）；而GuttaFlow封闭剂则对临床分离的E.f没有抗菌效果（P>0.05）。 三、利用E.f感染根管模型评价不同根管封闭剂的抗菌效果 收集单直根管人牙成功建立 E.f感染根管模型，随机分为五个实验组（ZOE、AH-Plus、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex）进行根管充填，并同时设置阳性、阴性对照组。分别在1d、3d、7d和14d时取出相应样本，利用球钻磨除充填材料和牙本质。收集粉末并进行梯度稀释，培养后细菌计数。结果显示：GuttaFlow封闭剂仍然对临床分离的E.f没有抗菌效果（P>0.05），而其余封闭剂的抗菌性均可以维持到14d（P<0.05），其抗菌时间较DCT实验中有所延长；ZOE、AH-Plus和Vitapex三种封闭剂的抗菌性在3d后基本上无变化（P>0.05），而 iRoot SP在14d时抗菌性最强（P<0.05），说明随着时间的延长，其抗菌性并没有减弱。据此得出初步结论：在评价封闭剂抗菌能力时，应根据各封闭剂的组成成分、物理化学特性，选择合适的方法进行测定。 四、体外不同根管封闭剂流动性和pH值的测定 五种封闭剂各自混合后放置在玻璃板中心位置，并将另一块玻璃板轻压于封闭剂表面，在其上放置120g砝码。10分钟后，取下覆盖于封闭剂上的玻璃板和砝码，用游标卡尺测量各封闭剂形成圆形图案的最大与最小直径，取其平均值。pH测定方法为：各封闭剂均匀涂抹在24孔板的孔底部，分别在混合后20min和1d、3d、7d、14d取出，将3ml去离子水加入到每个孔中，利用pH测试仪进行检测。结果显示：流动性由强到弱排序为iRoot SP>GuttaFlow>ZOE>AH-Plus>Vitapex；14d时pH由高到低的排列顺序为iRoot SP>VItapex>AH-Plus>GuttaFlow>ZOE。结果显示pH值与封闭剂的抗菌能力有一定的相关性，但流动性与抗菌性无直接关联。 综上所述，根管封闭剂的远期抗菌性能和其所含抗菌成分密切相关；同时，其他的物理化学性能均可以影响封闭剂的抗菌效果。 收起