摘要: 目的：观察UrocortinⅠ后处理对缺血/缺氧大鼠心脏功能、线粒体结构及功能的影响，探讨UrocortinⅠ后处理产生心肌保护作用的线粒体机制。 方法：1.采用Langendorff离体心脏灌注装置建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，SPF级健康雄性SD大鼠48只随机分... 展开 目的：观察UrocortinⅠ后处理对缺血/缺氧大鼠心脏功能、线粒体结构及功能的影响，探讨UrocortinⅠ后处理产生心肌保护作用的线粒体机制。 方法：1.采用Langendorff离体心脏灌注装置建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，SPF级健康雄性SD大鼠48只随机分为正常组（Nor组）、缺血再灌组（I/R组）、UrocortinⅠ后处理组（UcnⅠ组）、5-羟葵酸拮抗UrocortinⅠ组（5-HD+UcnⅠ组），每组12例。其中Nor组：Kerbs-Henseleit（K-H）液平衡20min后持续灌注135min。I/R组：平衡20min后灌注4℃停跳液，于32℃下全心缺血40min，再复灌95min。 UcnⅠ组：缺血后复灌含UcnⅠ的K-H液30min，再续灌K-H液65min。5-HD+UcnⅠ组：UcnⅠ后处理前先给予含5-HD的K-H液5min，其余处理同UcnⅠ组。各组于平衡末及复灌末：（1）Powerlab/8SP数据采集系统记录：心率（HR）、左室发展压（LVDP）、左室舒张末压力（LVDEP）及最大dp/dt(+dp/dtmax)等心功能指标；（2）取左室心肌组织提取线粒体，汉莎氧电极测定线粒体3态呼吸、呼吸控制比（RCR）等呼吸功能及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NADH-OX）、琥珀酸氧化酶（Suc-OX）等呼吸酶活性变化；（3）透射电子显微镜（TEM）观察心肌超微结构改变。 2.离体心脏灌注装置（MPA）分离成年大鼠心肌细胞，培养24h后进行细胞计数并随机分为正常组（Nor组）、缺氧/复氧组（I/R组）、UrocortinⅠ后处理组（UcnⅠ组）、5-羟葵酸拮抗UrocortinⅠ组（5-HD+UcnⅠ组）。其中Nor组：37℃培养箱中细胞持续培养135min；I/R组：细胞缺氧40min后复氧95min；UcnⅠ组：缺氧后复氧时先在含UcnⅠ的培养基中处理30min后再复氧60min；5-HD+UcnⅠ组：在给予UcnⅠ处理前先用特异性线粒体ATP敏感性钾通道（mito-KATP）拮抗剂5-HD处理5min，余处理同 UcnⅠ组。各组于复氧末对比观察（1）激光共聚焦显微镜（LSCM）下线粒体膜电位(MMP)的变化；（2）CCK-8试剂盒检测细胞活力的改变。 结果： 1.心功能指标变化：与复灌末相比各组HR、LVDP、LVEDP、+dp/dtmax心功能缺血前均好于复灌末（P<0.05）；而缺血前各组心脏功能差异无统计学意义（P>0.05）；在复灌末：Nor组均优于其余各组（P<0.05），而UcnⅠ组比I/R组和5-HD+UcnⅠ组心功能好（P<0.05）；I/R组LVEDP、+dp/dtmax较5-HD+UcnⅠ组差（P<0.05），但两组间HR、LVDP比较差异无统计学意义（P>0.05）。 2.心肌线粒体呼吸功能和酶活性变化：缺血前各组呼吸功能及酶活性改变无统计学意义（P>0.05）；与复灌末相比，各组呼吸控制比（RCR）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NADH-OX）、琥珀酸氧化酶等酶活性变化缺血前均好于复灌末（P<0.05）；在复灌末：Nor组线粒体呼吸功能及酶的活性均优于其余各组（P<0.05），而UcnⅠ组呼吸酶活性及3态呼吸、呼吸控制比（RCR）较I/R组和5-HD+UcnⅠ组要好（P<0.05），但I/R组较5-HD+UcnⅠ组差（P<0.05）；关于4态呼吸（State4）缺血前及复灌末组间、组内比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 3.线粒体膜电位的变化：Nor组心肌细胞膜电位比例均高于其余各组（P<0.01），而UcnⅠ组膜电位比例高于I/R组和5-HD+UcnⅠ组（P<0.05），但5-HD+Ucn I组与I/R组比差异无统计学意义（P>0.05）。 4.心肌细胞活力测定：Nor组细胞活力高于其余各组（P<0.05）；UcnⅠ组细胞活力较5-HD+UcnⅠ组和I/R组高（P<0.05），而5-HD+UcnⅠ组与I/R组比差异无统计学意义（P>0.05）。 结论： 1.UcnⅠ后处理可改善离体心脏心肌收缩力、降低舒张末压，恢复缺血再灌注后的心脏功能。 2.UcnⅠ后处理可通过保护缺血心肌线粒体3态呼吸、RCR呼吸功能及 Suc-OX、NADH-OX、Cyt-OX呼吸酶的活性，维持呼吸链电子传递及氧化磷酸化正常进行，并稳定线粒体膜电位，减轻线粒体结构的损害而产生心肌保护效应。且该心肌保护效应与UcnⅠ后处理能开放mito-KATP通道有关。 收起