摘要: 目的： 研究氨溴索(ambroxol)对哮喘大鼠气道炎症的作用及其可能的作用机制。观察氨溴索对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)及血液中中性粒细胞(Polymorphonuclear neutrophil，PMN)计数的影响。通过对BALF和血清中白... 展开 目的： 研究氨溴索(ambroxol)对哮喘大鼠气道炎症的作用及其可能的作用机制。观察氨溴索对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)及血液中中性粒细胞(Polymorphonuclear neutrophil，PMN)计数的影响。通过对BALF和血清中白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)及血清和肺组织中核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、髓过氧化物酶(MPO)表达的研究，探讨氨溴索对哮喘大鼠气道炎症的作用及其可能的作用机制。 方法： 随机将30只雄性健康的Sprauge-Dawley(SD)大鼠分为3组，其中空白对照组10只，哮喘模型组10只，氨溴索处理组10只。第1天和第8天时，分别用抗原液1mL(含有OVA100mg，氢氧化铝100mg)对哮喘模型组和氨溴索处理组大鼠给予腹腔内注射进行致敏。2周后给大鼠雾化吸入1％OVA(w/v)激发气道，每次20min，每日1次，共7天。第1天和第8天时，空白对照组用生理盐水1mL进行腹腔内注射，并于2周后开始给予生理盐水雾化吸入，每次20min，每日1次，共7天。 从致敏的第1天起，氨溴索处理组每日给与氨溴索注射液50mg/kg腹腔注射，同时哮喘模型组与空白对照组每日腹腔注射等量的生理盐水，共21d。 在最后1次雾化吸入后24h，对各组大鼠进行支气管肺泡灌洗，并收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，同时采取静脉血。HE染色观察肺组织病理改变，免疫组织化学技术观察NF-κBp65、MMP-9、MPO在肺组织中的表达。行BALF中炎症细胞总数、PMN计数及细胞分类计数。取BALF上清液，应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoa-dsorbent assay，ELISA)法测定IL-8水平。行静脉血白细胞及PMN计数，ELISA法测定静脉血中IL-8、NF-κBp65、MMP-9、MPO浓度。方差齐数据采用单因素方差分析，方差不齐采用校正t检验，两两比较采用SNK-q检验，相关分析采用Pearson直线相关分析，a=0.05。 结果： 1.各组大鼠肺组织病理变化:哮喘模型组显示支气管、血管周围大量炎性细胞浸润，可见巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞，伴支气管痉挛，黏液产生增加。氨溴索处理组显示支气管痉挛及炎性细胞浸润明显减轻，黏液产生减少。正常对照组则无上述明显变化。 2.BALF中炎症细胞及PMN计数变化:与空白对照组比较，哮喘模型组大鼠BALF中的炎性细胞和PMN计数显著升高(P＜0.01)。氨溴索处理组大鼠BALF中的炎性细胞和PMN计数与哮喘模型组比较明显降低(P＜0.01），但仍高于空白对照组(P＜0.01)。 3.BALF中IL-8水平变化:哮喘模型组大鼠IL-8水平显著高于空白对照组(P＜0.01)。氨溴索处理组大鼠IL-8水平显著低于模型组(P＜0.01），但仍高于空白对照组(P＜0.01)。 4.免疫组化法测定肺组织中NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达:哮喘模型组肺组织中NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著高于对照组(P＜0.01)。氨溴索处理组大鼠肺组织中NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著低于模型组(P＜0.01)，但仍高于空白对照组(P＜0.01)。 5.血液白细胞及PMN计数变化:哮喘模型组大鼠血液中白细胞及PMN计数显著高于空白对照组(P＜0.01)。氨溴索处理组大鼠血液中白细胞及PMN计数显著低于模型组(P＜0.01），但仍高于空白对照组(P＜0.01）。 6.血清中IL-8、NF-κBp65、MMP-9、MPO水平:哮喘模型组血清中IL-8、NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著高于对照组(P＜0.01）。氨溴索处理组大鼠血清中IL-8、NF-κBp65、MMP-9、MPO的表达水平显著低于模型组(P＜0.01)，但仍高于空白对照组(P＜0.01)。 7.直线相关分析结果:(1)大鼠BALF中PMN计数与BALF中IL-8水平，肺组织中MPO、NF-κBp65及MMP-9水平均呈显著正相关(P＜0.01）。大鼠肺组织中NF-κBp65与BALF中IL-8水平呈显著正相关(P＜0.01），与肺组织中MMP-9水平呈显著正相关（P＜0.01）。(2)大鼠血液中PMN计数与血清中IL-8、MPO、NF-κBp65及MMP-9水平均呈显著正相关（P均＜0.01）。大鼠血清中NF-κBp65与IL-8及MMP-9水平呈显著正相关（P均＜0.01）。 结论： (1)以OVA为致敏原、氢氧化铝干粉为免疫佐剂腹腔注射致敏，以1％OVA压缩雾化吸入激发，能够成功建立哮喘大鼠模型。 (2)哮喘大鼠模型气道中PMN计数增多，IL-8、MPO、MMP-9及NF-κB在哮喘大鼠的气道及肺组织中均表达增强。 (3)哮喘大鼠血液中PMN计数增多，IL-8、MPO、MMP-9及NF-κB在哮喘大鼠血清中的水平均明显升高。检测血液中PMN计数及血清中IL-8、MMP-9、MPO、NF-κB有助于哮喘的诊断。 (4)氨溴索能够减轻哮喘大鼠的症状，降低气道及血液中PMN计数及血清中IL-8、MMP-9、MPO、NF-κB水平。 (5)氨溴索治疗哮喘的机制可能是通过抑制核转录因子NF-κB的活化，继而下调IL-8、MMP-9、MPO等的表达，减少PMN在气道中的浸润及血液中的反应性升高，从而达到对哮喘的治疗作用。 收起