摘要: 土地盐碱化已成为一个世界关注的焦点问题,解决土地盐碱化问题已成为全球性难题。在轻度或部分中度盐碱地上种植比较耐盐的作物,是一种简便、快捷、经济有效的改良措施。棉花作为重要的经济作物和盐碱的先锋作物,已成为盐碱地改良及其相关研究的重要研... 展开 土地盐碱化已成为一个世界关注的焦点问题,解决土地盐碱化问题已成为全球性难题。在轻度或部分中度盐碱地上种植比较耐盐的作物,是一种简便、快捷、经济有效的改良措施。棉花作为重要的经济作物和盐碱的先锋作物,已成为盐碱地改良及其相关研究的重要研究材料。通过分子生物学手段研究棉花耐盐基因及作用机制,从而为提高棉花耐盐能力,培育耐盐品种开辟新的途径。本研究以耐盐材料中9806和盐敏感材料中S9612为实验材料,通过基因芯片技术及抑制性差减文库技术筛选到两个耐盐相关基因,利用RACE及RT-PCR技术克隆了它们的cDNA全长,命名为GhPTAC和GhGnT。利用荧光定量PCR技术对两个基因做了耐盐相关性表达分析,并通过GFP亚细胞定位和酵母表达技术对GhGnT基因做了进一步研究。具体研究成果如下: 1获得2个耐盐相关基因cDNA全长 利用RACE及RT-PCR技术获得GhPTAC和GhGnT基因cDNA全长序列。其中GhPTAC基因cDNA全长1564bp,它包括5’-UTR41bp,完整开放阅读框1038bp,3'-UTR485bp,编码345个氨基酸残基的多肽。GhGnT基因cDNA全长2140bp,它包括5'-UTR587bp,完整开放阅读框13531313和3'-UTR200bp,编码450个氨基酸残基的多肽。 2 Real-time PCR分析 种子萌发期荧光定量结果显示:在一定范围内,随着盐胁迫程度的增加,GhPTAC基因在中S9612中表达量逐渐上升,在中9806中的表达量逐渐下降；GhGnT基因在两个材料中表达量都是先上升,再下降。苗期荧光定量结果显示:GhPTAC基因在两个材料中受盐诱导上调表达,但在中9806中的表达量明显高于中S9612；GhGnT基因在两个材料中受盐诱导上调表达,在中S9612中对盐胁迫应答较快,但表达量低于中9806。荧光定量检测发现,两个基因的表达量变化与盐胁迫密切相关。 3 GhGnT基因编码蛋白的亚细胞定位 构建PBI121-GhGnT-GFP植物表达载体,基因枪转化洋葱内表皮细胞,发现GhGnT基因编码蛋白可能定为在细胞核上。 4 GhGnT基因酵母表达分析 构建PYES2-GhGnT酵母表达载体,LiAC法转化盐敏感型酵母菌株AXT3,发现转GhGnT基因酵母菌株在含有0.5％NaCl的YNB培养基中生长速度快于对照,推测GhGnT基因高表达能提高酵母耐盐性。 收起