摘要: 研究背景及目的: 随着人类寿命在不断延长，人口年龄结构的老龄化日渐突出，骨质疏松症成为危害人类健康的主要问题，其防治是日益受到关注的问题。已有大量研究表明许多中药有促进骨折愈合和防治骨质疏松的功效。本实验探讨三七总皂甙（Panax Not... 展开 研究背景及目的: 随着人类寿命在不断延长，人口年龄结构的老龄化日渐突出，骨质疏松症成为危害人类健康的主要问题，其防治是日益受到关注的问题。已有大量研究表明许多中药有促进骨折愈合和防治骨质疏松的功效。本实验探讨三七总皂甙（Panax Notoginseng Saponins，PNS)对骨髓基质细胞（Bone Marrow Stromal Cells，BMSCs）成骨分化的调节及机制研究。 为骨质疏松症的防治提供依据。 研究方法: 一、PNS 对BMSCs 成骨分化的影响研究：采用全骨髓贴壁法从雄性SD 大鼠双侧后肢骨髓组织中分离获取BMSCs，取第三代BMSC分别用不同培养液进行培养,对照组(C)(DMEM培养液含10%胎牛血清),成骨诱导培养基(I)(含10%胎牛血清的DMEM 培养液中加入10 nM地塞米松、10 mM β-磷酸甘油、100μg/ml 维生素C)，和成骨诱导培养基内分别加入终浓度含10mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L PNS 培养液组（分别标记10P、50P、100P、200P）。采用MTT 法测定BMSCs的增殖能力。通过茜素红，碱性磷酸酶等成骨标志物来检测成骨能力。运用RT－PCR 技术检测核结合因子、碱性磷酸酶、骨涎蛋白和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA 表达。 二、PNS 调节BMSCs 成骨分化的机制研究：第三代BMSC分别在成骨诱导培养基（I）、100mg/LPNS的成骨培养基（100P）和100mg/LPNS的成骨培养基加入JNK 抑制剂SP600125，p38MAPK 抑制剂SB203580，ERK1/2 抑制剂PD98059 三种不同MAPK 通路抑制剂(分别标记100P+SP、100P+SB、100P+PD)。通过茜素红，碱性磷酸酶等成骨标志物来检测成骨能力。 运用RT－PCR 技术检测核结合因子、碱性磷酸酶、骨涎蛋白和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA 表达。 研究结果: 一、PNS 对BMSCs 成骨分化的影响研究：PNS 呈浓度依赖性促进BMSCs的增殖、ALP活性、钙结节形成，其中以浓度为100mg/LPNS 作用最为显著。RT－PCR 结果：100mg/LPNS骨诱导液组其核结合因子、碱性磷酸酶、骨涎蛋白的mRNA 表达最高，而过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA 表达最低。 二、PNS 调节BMSCs 成骨分化的机制研究：100p组及100P+Sp组茜素红钙结节定量及碱性磷酸酶活性均优于其它各组，两组与其它各组比较均有显著差异(P＜0.01)，而这两组间对比没有显著差异(P＞0.05)。RT－PCR 结果：在各组不同培养液中，100mg/LPNS 骨诱导组其核结合因子、碱性磷酸酶、骨涎蛋白的mRNA 表达最高，100P+SB、100P+PD 组其mRNA 表达居中，比100p组低，比骨培养基组高。100p组过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA 表达最低，100P+SB、100P+PD 组其mRNA 表达居中，比100mg/LPNS 骨诱导高，比骨培养基组低。 研究结论: 一、三七总皂甙呈浓度依赖性促进BMSCs的增殖及成骨分化，其中以浓度为100mg/LPNS 作用最为显著。 二、三七总皂甙促进BMSCs 向成骨细胞定向分化的机制可能是通过MAPK 信号通路中ERK1/2 及P38MAPK 起作用。 收起