摘要: 汞是广泛分布于环境中的毒性金属。本世纪五十年代后期，汞的毒性研究开始受到普遍重视。随着各种新技术手段的应用，它对人体健康影响的研究获得重大进展。但是，尽管已知汞和汞化合物对人类机体所造成的重大危害，可目前科学技术水平尚未足以使人类... 展开 汞是广泛分布于环境中的毒性金属。本世纪五十年代后期，汞的毒性研究开始受到普遍重视。随着各种新技术手段的应用，它对人体健康影响的研究获得重大进展。但是，尽管已知汞和汞化合物对人类机体所造成的重大危害，可目前科学技术水平尚未足以使人类研制出汞和汞化合物的同效或高效无毒替代物，它们在医药、农业和工业上仍有很广泛的用途，人类现在仍不能摆脱汞污染对其健康的危害。大量的临床观察和动物实验已证实汞或汞化合物具有神经毒性、生殖毒性、胚胎毒性和免疫毒性，有关肾毒性的研究资料相对较少。为此，本研究以氯化汞为研究对象，从亚硒酸钠及沙棘油在汞诱导大鼠部分肝肾酶活性改变中的作用、沙棘油和亚硒酸钠对汞致肝肾氧化损伤影响、亚硒酸钠对汞致大鼠肾皮质细胞凋亡及部分相关基因改变的影响三方面，初步探讨亚硒酸钠和沙棘油对无机汞肝肾损伤影响及其作用机制，为今后深入研究汞毒作用分子生物学机制提供资料。 方法： 1.亚硒酸钠及沙棘油在汞诱导大鼠部分肝肾酶活性改变中的作用实验研究 按体重将Wistar大鼠32只，雌雄各半，随机分为4组。对照组皮下注射5ml/kg0.9％生理盐水，单纯染汞组皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液，沙棘油干预组先灌胃95％沙棘油5ml/kg，2小时后再皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液。亚硒酸钠干预组先腹腔注射20μmol/kgNa2SeO3溶液，2小时后再皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液。测定尿NAG，ALP和LDH活性，尿汞、尿蛋白和尿肌酐含量；腹主动脉采血，分离血清，测定BUN含量；切取肾皮质测定其汞含量。 2.沙棘油和亚硒酸钠对汞致肝肾氧化损伤影响的实验研究按体重将Wistar大鼠32只，雌雄各半，随机分为4组。对照组皮下注射5ml/kg0.9％生理盐水，单纯染汞组皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液，沙棘油干预组先灌胃95％沙棘油5ml/kg，2小时后再皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液。亚硒酸钠干预组先腹腔注射20μmol/kgNa2SeO3溶液，2小时后再皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液。测定肝脏、肾皮质中GSH、MDA、蛋白含量和SOD、GSH-Px活性。 3.亚硒酸钠对汞致大鼠肾皮质细胞凋亡及部分相关基因改变的影响按体重将Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为5组。对照组皮下注射生理盐水，单纯染汞组皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液，亚硒酸钠对照组腹腔注射20μmol/kgNa2SeO3溶液，亚硒酸钠处理Ⅰ组(先腹腔注射20μmol/kgNa2SeO3溶液，2小时后再皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液)，亚硒酸钠处理Ⅱ组(腹腔注射20μmol/kgNa2SeO3溶液，同时皮下注射2.5mg/kgHgCl2溶液。染毒48小时后处死大鼠。测定肾皮质细胞凋亡、肾皮质细胞c-fosmRNA、c-junmRNA、p38MAPKmRNA表达及肾皮质细胞FOS、JUN、JNK、P38MAPK蛋白表达。 4.数据处理实验所得数据以平均值±标准差表示，用SPSS12.0软件单因素方差分析方法(ANOVA)进行组间差异的显著性检验，两组间比较用q检验(Student-Newman-Keuls，SNK)。 结果： 1.亚硒酸钠及沙棘油在汞诱导大鼠部分肝肾酶活性改变中的作用实验研究 亚硒酸钠干预组肝汞含量显著高于单纯染汞组，其肾皮质汞、尿汞含量和尿NAG、ALP、LDH活性、尿蛋白、BUN含量显著低于单纯染汞组，差异有统计学意义(皆P＜0.05)。沙棘油干预组肝汞、肾皮质汞、尿NAG、尿ALP活性和BUN含量显著低于单纯染汞组，差异有统计学意义(皆P＜0.05)。 2.沙棘油和亚硒酸钠对汞致肝肾氧化损伤影响的实验研究沙棘油干预组肝和肾皮质GSH含量增加、SOD活性升高及MDA含量下降，但与单纯染汞组相比均无显著性统计学差异(P＞0.05)。亚硒酸钠干预组肝GSH、GSH-Px、SOD活性升高，与单纯染汞组各相应指标相比，差异有统计学意义(皆P＜0.05)，MDA含量下降，与单纯染汞组相比无显著性差异(P＞0.05)。亚硒酸钠干预组肾皮质GSH含量增加，SOD活性升高，与单纯染汞组相比均无显著性差异(P＞0.05)。肾皮质GSH-Px活性升高，MDA含量下降，与单纯染汞组各相应指标相比，差异有统计学意义(皆P＜0.05)。 3.亚硒酸钠对汞致大鼠肾皮质细胞凋亡及部分相关基因改变的影响 3.1TUNNEL实验结果单独氯化汞和亚硒酸钠处理大鼠后，均可引起大鼠肾皮质细胞凋亡。亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ组则肾皮质细胞凋亡数明显减少。 3.2流式细胞仪实验结果单纯染汞组、亚硒酸钠对照组、亚硒酸钠处理Ⅰ组的肾皮质细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。亚硒酸钠对照组、亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ组的肾细胞凋亡率均低于单纯染汞组，差异皆有统计学意义(P＜0.05)。亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ的肾皮质细胞凋亡率低于亚硒酸钠对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 3.3RT-PCR实验结果单纯染汞组肾皮质细胞的c-junmRNA、c-fosmRNA和p38MAPKmRNA，亚硒酸钠对照组的c-junmRNA，亚硒酸钠处理Ⅰ组的c-junmR-NA和c-fosmRNA，亚硒酸钠处理Ⅱ组的c-junmRNA均高于对照组各相应指标，差异均有统计学意义(P＜0.05)。亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ组的c-junmRNA、c-fosmRNA及亚硒酸钠处理Ⅱ组的p38MAPKmRNA均高于单纯染汞组各相应指标，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 3.4WesternBlotting实验结果与对照组相比，单纯染汞组、亚硒酸钠对照组、亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ组的JUN、JNK、P38MAPK蛋白的磷酸化水平均升高，FOS蛋白升高。亚硒酸钠处理Ⅰ、Ⅱ组的JUN、JNK、P38MAPK磷酸化水平蛋白和FOS蛋白与单纯染汞组各相应指标相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)，上述各指标与亚硒酸钠对照组各相应指标相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论： 1.沙棘油具有促进汞从肾脏排出的作用。沙棘油和亚硒酸钠在汞诱导的肝、肾脏酶学改变方面具有一定保护作用。 2.氧化损伤介导了汞的肝肾毒性。沙棘油对染汞后诱导的大鼠肝肾氧化损伤没有表现出明显的保护作用。亚硒酸钠对汞所诱导的肝肾氧化损伤具有一定拮抗作用。 3.亚硒酸钠可以抑制染汞所致的肾皮质细胞凋亡作用，并使c-junmRNA、c-fosmRNA和p38MAPKmRNA在染汞后的肾皮质细胞中表达下调。亚硒酸钠使JUN、JNK、P38MAPK和FOS蛋白在染汞后的肾皮质细胞中表达下调。 收起