摘要: 目的:研究治疗阳虚寒凝证所致偏头痛的经方吴茱萸汤的提取和精制工艺,对精制半成品进行初步含量测定及药效学研究,以确定提取精制得到的7种成分与药效相关,可作为进一步优选提取精制工艺指标成分。 方法:在采用多种色谱分离方法对吴茱萸醇提物进行... 展开 目的:研究治疗阳虚寒凝证所致偏头痛的经方吴茱萸汤的提取和精制工艺,对精制半成品进行初步含量测定及药效学研究,以确定提取精制得到的7种成分与药效相关,可作为进一步优选提取精制工艺指标成分。 方法:在采用多种色谱分离方法对吴茱萸醇提物进行分离并累积主要单体成分的基础上,以前期实验或文献确定的吸收入血和治疗偏头痛有效的7种成分为指标,按照《伤寒论》和《金匮要略》所记载的不同煎煮方法制备药液,依据煎出液中上述成分的含量测定结果,确定一种提取方法。选择6种大孔吸附树脂对提取液进行静态吸附、动态吸附及泄漏曲线的考察,优选出对7种成分吸附效果最佳的大孔树脂进行工艺优化。采用单因素及正交试验方法进行吸附时间、上样量与树脂体积比、径高比、上样浓度、上样流速、洗脱液浓度、洗脱剂用量、树脂再生后吸附率、放大树脂量及上样量后洗脱率等考察,最终确定最佳精制工艺参数。对优化工艺精制成的半成品进行含量测定,并采用热板致痛仪致痛、醋酸扭体模型对其镇痛作用进行考察,采用醋酸诱发小鼠毛细血管通透性改变、二甲苯致小鼠耳廓肿胀、棉球肉芽肿模型对其抗炎作用进行考察,并与原提取液进行比较,以验证工艺的可靠性。, 结果:①对吴茱萸醇提物进行分离,得到5个化合物,鉴定了3个化合物的结构,分别为吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、1-甲基-2-[(6Z,9Z)6,9-十五二烯]-(1H)-喹诺酮,对前两者进行累积。⑦提取方法中以《金匮要略》法取水5升煮取3升,两煎合并效果最佳。③精制用树脂选择弱极性大孔吸附树脂AB-8,最佳精制工艺为吸附时间45min,上样量与树脂体积比1:1(生药质量:树脂体积),上样药液浓度0.33g·mL-1,柱径高比1:4,洗脱溶剂为60％乙醇,沈脱体积8BV,洗脱流速0.1BV·min-1。乙醇洗脱前用15BV蒸馏水洗脱除杂。④建立了HPLC同时测定半成品中7种成分的含量测定方法。⑤药效学研究发现优化工艺制得吴茱萸汤精制半成品可抑制小鼠醋酸致痛扭体反应(P<0.01),降低醋酸诱发小鼠毛细血管通透性增加(P<0.01),抑制棉球肉芽肿形成(P<0.01)。 结论:优化后的提取、精制工艺合理可行,运用HPLC法对半成品中7种药效物质同时进行含量测定的方法简便可靠,药效学试验结果证明精制得到的半成品对于持续性疼痛、钝痛、慢性炎症有显著抑制作用。 收起